基因重组干扰素γ治疗呼吸道合胞病毒所致毛细支气管炎的临床疗效分析
作者：齐春华 陈慧中 王之梁 陈虹
单位：齐春华(第一作者现在250021山东省立医院儿内科)；陈慧中(100020首都儿科研究所)；王之梁(100020首都儿科研究所)；陈虹(100020首都儿科研究所)
关键词：细支气管炎，病毒性；呼吸道合胞体病毒感染；干扰素γ，重组
中华儿科杂志001002 【摘要】 目的 探讨肌肉注射基因重组干扰素γ (rIFN-γ)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染毛细支气管炎患儿的临床治疗效果。方法 采用双盲、随机对照方法,对诊断为RSV感染阳性、符合纳入标准的39例毛细支气管炎患儿进行了 rIFN-γ的治疗研究。观察了治疗前、后症状好转及实验室指标如细胞免疫指标，血清总IgE等的恢复情况。结果 (1) 治疗前RSV感染毛细支气管炎患儿存在较低的CD+8水平(25±7) (P<0.05)和较高的血清总IgE水平(0.51～84 kIU/L) (P<0.01)。(2) rIFN-γ治疗组在临床Lowell评分降低、咳嗽消失、发热降至正常等方面所需天数比生理盐水对照组明显缩短，差异均有显著意义(P<0.01、0.05)；但细胞免疫指标和血清总IgE水平无明显改善(P>0.05)。结论 (1) RSV感染毛细支气管炎患儿存在Th2型增强的免疫反应；(2) rIFN-γ治疗婴幼儿RSV感染毛细支气管炎是较为有效的方案。
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Recombinant interferon gamma (rIFN-γ) therapy in infants with bronchiolitis caused by respiratory syncytial virus
QI Chunhua CHEN Huizhong WANG Zhiliang
(The Capital Institute of Pediatrics, Beijing 100020, China)
【Abstract】 Objective To evaluate the therapeutic effects of intramuscular injection of recombinant interferon gamma (rIFN-γ) in treatment of acute bronchiolitis in infants caused by respiratory syncytial virus (RSV). Methods 1. The authors compared the RSV infected bronchiolitis infants with the normal children in terms of cellular immunology parameters and total serum IgE antibodies. 2. The authors applied double-blind, randomized, controlled method to conduct the prospective clinical study in 39 infants with bronchiolitis caused by RSV infection and compared the effects of rIFN-γ on remission of acute phase symptoms, cellular immunology parameters and total serum IgE antibodies. The rIFN-γ group had 20 cases and placebo (normal saline,N.S.) group had 19 cases. Results 1. The mean level of serum total IgE antibodies was much higher (0.51～84 k IU/L) in infants with bronchiolitis caused by RSV than those in normal children (P<0.01). The CD+3 (48±14 P<0.01), CD+4(24±10 P<0.01), and CD+8 (25±7 P<0.05) T cell number of the former group was much lower compared with those of the normal children; 2. Treatment with rIFN-γ was superior to N.S. treatment in terms of the improvement of clinical Lowell's scores especially on days 3 ,5 ,7 (P<0.01), the number of days needed for relieves of symptoms and signs such as cough (P<0.01), fever (P<0.05) and wheezing (P<0.01) (5.2±1.2, 4.4±1.7 and 2 days, respectively). 3. No improvement of CD+3, CD+4, CD+8, B cell number and the mean level of the total serum IgE antibodies (P>0.05) was found in both groups. 4. No severe side effects were seen in rIFN-γ group except for 1 case with low degree fever and 1 case with rash during the treatment. The total white blood cell counts remained almost the same in the two groups (t=0.48 P>0.05), and were both more than 6.0×109/L. Conclusions 1. Compared with the normal controls, infants infected with RSV had decreases in the number of CD+8(P<0.05) T cell and an increase in the level of total serum IgE antibodies. These findings suggested a predominant Th2 like response in RSV-infected bronchiolitis infants. 2. The intramuscular injection of rIFN-γ was demonstrated to be a safe and effective therapeutic approach to infants with bronchiolitis caused by RSV.
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【Key words】 Bronchiolitis, viral;Respiratory syncytial virus infections;Interferon-gamma, recombinant
目前认为，呼吸道合胞病毒(RSV)感染后体液免疫主要参与保护机制[1-3]。但这种保护作用非常不完全，再感染经常发生。在T细胞免疫方面，CD+8较CD+4细胞在清除病毒及介导免疫保护上都有较强作用[4]。最近的研究表明其感染后的细胞免疫反应与发病有关，尤其是以干扰素γ/白细胞介素4 (IFN-γ/IL-4)为代表的Th1/Th2反应失衡参与了发病过程[5]。本研究就肌肉注射基因重组干扰素γ(rIFN-γ)对RSV感染毛细支气管炎患儿的临床治疗效果进行初步评价，以期为RSV感染毛细支气管炎的治疗研究提供资料。
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对象和方法
一、对象
RSV感染毛细支气管炎患儿均为1997年11月～1999年3月两个冬春季节本院的住院患儿，符合标准的共42例。按完全随机法分为2组，分别接受rIFN-γ， 生理盐水肌注治疗。除3例因自动出院等原因退出研究外，完成全程研究者共39例。
生理盐水对照组：患儿19例，男15例，女4例，年龄5(2～10)个月；发病距纳入研究时间为 3(1～4)日；入院时按Lowell评分为(9.8±2.1)分(Lowell评分最高17分,最低0分,分数越高,相应喘息症状越重)[6]；体温(37.2±0.3)℃。
rIFN-γ组：患儿20例，男13例，女7例；年龄为5(1～10)个月；发病距纳入研究时间为3(1～4)日；入院时按Lowell评分为 (9.2±1.5)分;体温(37.3±0.4)℃。两组患儿在分组治疗前性别(χ2=0.94, P<0.05)、年龄、发病距纳入研究时间、入院时Lowell氏评分、体温等各方面均无明显差异。
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二、诊断标准
研究对象纳入标准为：年龄在24个月以内的婴幼儿，本次发病为生后第1次发作，经RSV病毒分离阳性和(或)间接免疫荧光法(检测患儿鼻咽分泌物中脱落细胞内的RSV抗原)诊断为RSV感染，由临床医师按照中华人民共和国卫生部，小儿四病防治方案诊断为毛细支气管炎的患儿[7]。排除标准为：有先天性心脏病，早产儿，免疫缺陷患儿或支气管、肺发育不良者。
三、治疗方案
鉴于毛细支气管炎有自限过程，为客观判定疗效，本组资料中所有患儿发病至纳入研究时间少于(或等于) 4 d。根据文献[8]确定给药途径为肌肉注射，治疗组rIFN-γ[上海克隆高技术有限公司，生产批号(95)卫药试字(沪克隆)S-01号]用药剂量为 50 μg/m2 (即3.375×104 IU/kg)，实际用药剂量为3～5万 IU/(kg*d),×3 d。对照组为肌注等体积的生理盐水。其他常规治疗措施如：雾化吸痰、吸氧、使用抗生素及本院中药制剂等两组均相同。
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四、 疗效的判断
1.临床症状: 病情变化由专人以填表方式逐日详细记录(首诊病情评估及病情变化主要按Lowell评分法，以及记录体温，咳嗽变化情况)。
2.免疫学效应: 以保健地段幼儿园及儿保门诊体检婴幼儿为健康对照，比较RSV阳性毛细支气管炎患儿在治疗前与健康婴幼儿之间的细胞免疫指标如CD+3、CD+4、CD+8、B淋巴细胞总数(BC)及血清总IgE水平； 观察纳入研究的两组RSV感染阳性患儿在治疗前后细胞免疫指标及血清中总IgE水平的变化。
3.药物副作用的观察: 包括全身情况如发热，皮疹，出院时外周血中白细胞总数等。
五、 统计学处理
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根据数据性质，对组间资料及治疗前后自身对比的显著性检验，分别采用χ2、方差t检验、秩和检验。各值以
±s或中位数表示。以P<0.05双(或单)尾表示有显著性差异。
结果
一、两组患儿治疗前后Lowell评分结果(表1)
对比发现, 从第3天始rIFN-γ组患儿的Lowell评分结果已显著低于对照组(P<0.01)。第5及7天两组的评分结果差异亦有显著意义。
表1 两组在治疗各阶段Lowell评分比较 治疗天数
Lowell 评分中位数及范围
秩和检验t值
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(或u值)
rIFN-γ组(20)
生理盐水组(19)
1
9(6～13)
9(6～14)
1.11
3
4(0～ 9)
6(0～13)
2.97*
5
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1(0～ 6)
3(0～ 8)
2.66*
7
0(0～ 2)
1(0～ 7)
3.17*
10
0(0～ 1)
0(0～ 4)
0.66
* P<0.01；表头括号内为例数 二、两组患儿主要症状及体征(表2)
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包括咳嗽消失，体温降至正常的天数，以Lowell评分降低4分[6]作为喘憋减轻的指标，比较两组症状消失或降低所需的天数。对照组在以上各项指标中的缓解天数分别为2～14 d，4～12 d，2～10 d；而治疗组则分别为2～7 d，4～7 d，1～5 d。
表2 两组主要症状缓解天数(±s或中位数) 组别
例
数
体温
(d)
咳嗽
(d)
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Lowell降
4分(d)
rIFN-γ组
20
4.4±1.7(17例)
5.2±1.2
2(1～ 5)
生理盐水组
19
6.8±3.6(16例)
7.3±2.1
3(2～10)
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t值(或u值)
2.39*
3.90**
4.22**
*P<0.05， ** P<0.01
三、健康婴幼儿与RSV阳性毛细支气管炎患儿之间,两治疗组间、治疗前后细胞免疫指标的比较
两治疗组患儿治疗前各细胞免疫指标间经t检验差异无显著意义(P>0.05);合并后与健康儿比较,其CD+3 、CD+4 、CD+8细胞均低于健康儿,t分别为3.49,5.22,2.05,P均<0.01或0.05,而BC则差异无显著意义。两治疗组治疗前后各免疫指标间经配对t检验差异均无显著意义，P均>0.05 (表3)。
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四、 血清总IgE水平测定结果
1. 健康婴幼儿与RSV阳性毛细支气管炎患儿血清总IgE值比较：RSV阳性毛细支气管炎患儿与健康婴幼儿相比，其血清总IgE值显著升高 (t=3.32, P<0.01)。健康婴幼儿的IgE值为0～11.8 kIU/L ,而RSV感染毛细支气管炎患儿则为0.51～84 kIU/L。
2. 两组患儿治疗前后血清总IgE水平比较(表4)：由表4可见，两组患儿治疗前IgE差异无显著意义(t=1.42,P>0.05)，治疗前后亦无明显变化 (P均>0.05)。
五、 rIFN-γ治疗的毒副作用
有1例患儿在rIFN-γ肌注治疗期间出现发热，体温最高38.2℃，用药3 d停药后热退。另1例患儿在rIFN-γ肌注治疗期间出现全身皮疹，停药及加用抗过敏药后好转。出院时两组患儿外周血白细胞总数对比差异无显著意义(t=0.48,P>0.05)。
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讨论
最近几年，有关RSV感染的免疫和发病机理的研究得出了Th1/Th2失衡理论，即：RSV感染导致机体Th2型优势反应。主要表现在外周血单个核细胞培养上清中IFN-γ/IL-4比值增高，血中BC数升高，CD+8T细胞数下降，RSV特异性(或非特异性) IgE 、IgG4重链同型转化，嗜酸性粒细胞(EOS)活化及分化等[5,9]。相比而言，Th1型反应无论是在RSV疫苗的研究方面还是在自然感染状态下都被认为与机体保护性反应有关。而Th2型反应则因为促进IgE介导的Ⅰ型变态反应及相应的EOS浸润，故与疾病的发生及RSV致哮喘的病理过程有关。
本研究发现，RSV感染毛细支气管炎患儿较同期健康儿童表现出明显降低的CD+8T细胞数，及明显升高的血清中总IgE值。同时，我们还发现RSV阳性患儿的CD+4T细胞数也有明显下降，而BC总数变化不大。既往的动物实验表明，RSV特异性CD+8T细胞可以下调Th2型优势反应[10]。表现为Th2型细胞因子的产生及肺组织内的EOS浸润减少。所以机体CD+8T细胞数目的下降可能参与了RSV感染患儿体内Th2优势反应。
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IFN-γ/IL-4是分别代表Th1/Th2的最典型的细胞因子，它们在许多方面呈现出相互拮抗的作用。而IFN-γ与其他两种干扰素IFN-α、IFN-β相比，其抗病毒活性比它们低(只及1/100～ 1/1 000 )，而免疫调节功能比它们强100～1 000倍。文献中认为，每天50～100 μg/m2的全身给药剂量可明显改善免疫状况，提高抗病毒微生物的效应[8]。我们的研究对象都是婴幼儿，故而采取较小剂量。在尽量排除主观因素干扰的前提下，确实发现患儿喘憋症状(Lowell评分变化)、咳嗽、发热的缓解天数等方面较对照组有明显差异；但治疗前后比较，两组患儿的细胞免疫指标及血清总IgE值均无明显改善。曾有动物实验表明，腹腔或静脉注射rIFN-γ均能增强肺泡吞噬细胞的活性[11]；并证实全身性给药方式可使药物达到呼吸道局部。有研究表明，rIFN-γ还能上调体外培养呼吸道上皮细胞产生分泌性IgA及分泌片SC水平[12]，从而使局部抵抗力增强，减少病毒的复制。我们的结果推测：全身用药对呼吸系统症状的改善可能通过调节呼吸道局部的Th1/Th2平衡,局部分泌性免疫蛋白含量，促进吞噬细胞的活性等起作用。本研究中免疫指标改善不明显考虑还有以下几点原因：纳入研究的样本量偏小；用药剂量偏小，时间较短；复查时间为治疗后的7～10 d，未能反应治疗当时的机体免疫状况；外源性的细胞因子只作用于Th分化机制中的一个方面，未能从全局影响Th细胞的分化过程。
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表3 毛细支气管炎患儿治疗前后与健康儿细胞免疫指标测定结果(±s) 组别
例数
CD+3
CD+4
CD+8
BC
疗前
疗后
疗前
疗后
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疗前
疗后
疗前
疗后
健康儿
18
59± 5
39± 8
31±10
24±9
患儿
23
48±14*
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24±10*
25± 7**
20±6
rIFN-γ组
13
46±11
55±15
21± 9
27±13
26±8
27±6
21±7
, 百拇医药
18±7
生理盐水组
10
51±16
62±10
28±12
34±11
25±7
26±7
26±5
20±5
与健康儿比较，*P<0.01，**P<0.05表4 两组患儿治疗前后血清总IgE值测定结果及比较 组别
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例
数
几何均数
(kIU/L)
Lg±S1gx
前后
比较
t值
疗前
疗后
疗前
疗后
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rIFN-γ组
14
6.250
5.560
1.22±0.26
1.19±0.24
0.27
生理盐水组
14
3.583
2.025
1.11±0.09
1.08±0.07
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1.66
两组比较t值
1.42
1.69
注:因IgE原始数据呈偏态分布，将数据x以(原始数据+10)作对数置换：其平均数为相应几何均数,lg=lg(原始数据+10)均数, Slgx为相应标准差
目前，在RSV疫苗的研究方面，抗IL-4及IL-10抗体及基因重组IL-12等已被用做研究RSV疫苗的免疫佐剂。但至今为止，我们尚未发现国内外用rIFN-γ治疗RSV毛细支气管炎的报道。所以本研究为该方面的研究进展提供了一定的理论依据。
本组患儿接受rIFN-γ的治疗过程中，除1例在用药期间出现低热，1例出现全身皮疹外，未发现其它副作用。Colo等[13]曾用rIFN-γ治疗儿科类风湿性关节炎，在长达两年的治疗过程中发现其副作用包括：发热，头痛，高血压，粒细胞减少症，呕吐等。本次研究中的两组患儿，出院时白细胞总数均正常，且无显著差异。
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在研究过程中,对临床病例特征性症状及体征的评分,我们采取了Lowell氏评分法。我们在既往及本次研究中都体会到，这种方法集中体现了本病的临床特点[14]。
总结上述工作，我们认为RSV感染毛细支气管炎患儿可能存在Th2型优势反应。在我们的研究中主要表现为CD+8 T细胞减少，血清中总IgE值升高；而rIFN-γ治疗RSV感染毛细支气管炎在临床症状及体征的缓解方面有较显著的疗效。rIFN-γ治疗后的长期随访研究及其他有关研究有待进一步进行。
参考文献
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, 百拇医药
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13，Colo C, Varela G, Herngndez V, et al. Use of recombinant interferon gamma in pediatric patients with juvenile chronic arthritis. Biotherapy, 1998,11:15-20.
14，黄荣妍,陈慧中,耿学辉,等. 呼吸道合胞病毒毛细支气管炎维生素A水平的变化.中华儿科杂志,1996,34:372-375.
收稿日期：2000-02-03, http://www.100md.com
单位：齐春华(第一作者现在250021山东省立医院儿内科)；陈慧中(100020首都儿科研究所)；王之梁(100020首都儿科研究所)；陈虹(100020首都儿科研究所)
关键词：细支气管炎，病毒性；呼吸道合胞体病毒感染；干扰素γ，重组
中华儿科杂志001002 【摘要】 目的 探讨肌肉注射基因重组干扰素γ (rIFN-γ)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染毛细支气管炎患儿的临床治疗效果。方法 采用双盲、随机对照方法,对诊断为RSV感染阳性、符合纳入标准的39例毛细支气管炎患儿进行了 rIFN-γ的治疗研究。观察了治疗前、后症状好转及实验室指标如细胞免疫指标，血清总IgE等的恢复情况。结果 (1) 治疗前RSV感染毛细支气管炎患儿存在较低的CD+8水平(25±7) (P<0.05)和较高的血清总IgE水平(0.51～84 kIU/L) (P<0.01)。(2) rIFN-γ治疗组在临床Lowell评分降低、咳嗽消失、发热降至正常等方面所需天数比生理盐水对照组明显缩短，差异均有显著意义(P<0.01、0.05)；但细胞免疫指标和血清总IgE水平无明显改善(P>0.05)。结论 (1) RSV感染毛细支气管炎患儿存在Th2型增强的免疫反应；(2) rIFN-γ治疗婴幼儿RSV感染毛细支气管炎是较为有效的方案。
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Recombinant interferon gamma (rIFN-γ) therapy in infants with bronchiolitis caused by respiratory syncytial virus
QI Chunhua CHEN Huizhong WANG Zhiliang
(The Capital Institute of Pediatrics, Beijing 100020, China)
【Abstract】 Objective To evaluate the therapeutic effects of intramuscular injection of recombinant interferon gamma (rIFN-γ) in treatment of acute bronchiolitis in infants caused by respiratory syncytial virus (RSV). Methods 1. The authors compared the RSV infected bronchiolitis infants with the normal children in terms of cellular immunology parameters and total serum IgE antibodies. 2. The authors applied double-blind, randomized, controlled method to conduct the prospective clinical study in 39 infants with bronchiolitis caused by RSV infection and compared the effects of rIFN-γ on remission of acute phase symptoms, cellular immunology parameters and total serum IgE antibodies. The rIFN-γ group had 20 cases and placebo (normal saline,N.S.) group had 19 cases. Results 1. The mean level of serum total IgE antibodies was much higher (0.51～84 k IU/L) in infants with bronchiolitis caused by RSV than those in normal children (P<0.01). The CD+3 (48±14 P<0.01), CD+4(24±10 P<0.01), and CD+8 (25±7 P<0.05) T cell number of the former group was much lower compared with those of the normal children; 2. Treatment with rIFN-γ was superior to N.S. treatment in terms of the improvement of clinical Lowell's scores especially on days 3 ,5 ,7 (P<0.01), the number of days needed for relieves of symptoms and signs such as cough (P<0.01), fever (P<0.05) and wheezing (P<0.01) (5.2±1.2, 4.4±1.7 and 2 days, respectively). 3. No improvement of CD+3, CD+4, CD+8, B cell number and the mean level of the total serum IgE antibodies (P>0.05) was found in both groups. 4. No severe side effects were seen in rIFN-γ group except for 1 case with low degree fever and 1 case with rash during the treatment. The total white blood cell counts remained almost the same in the two groups (t=0.48 P>0.05), and were both more than 6.0×109/L. Conclusions 1. Compared with the normal controls, infants infected with RSV had decreases in the number of CD+8(P<0.05) T cell and an increase in the level of total serum IgE antibodies. These findings suggested a predominant Th2 like response in RSV-infected bronchiolitis infants. 2. The intramuscular injection of rIFN-γ was demonstrated to be a safe and effective therapeutic approach to infants with bronchiolitis caused by RSV.
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【Key words】 Bronchiolitis, viral;Respiratory syncytial virus infections;Interferon-gamma, recombinant
目前认为，呼吸道合胞病毒(RSV)感染后体液免疫主要参与保护机制[1-3]。但这种保护作用非常不完全，再感染经常发生。在T细胞免疫方面，CD+8较CD+4细胞在清除病毒及介导免疫保护上都有较强作用[4]。最近的研究表明其感染后的细胞免疫反应与发病有关，尤其是以干扰素γ/白细胞介素4 (IFN-γ/IL-4)为代表的Th1/Th2反应失衡参与了发病过程[5]。本研究就肌肉注射基因重组干扰素γ(rIFN-γ)对RSV感染毛细支气管炎患儿的临床治疗效果进行初步评价，以期为RSV感染毛细支气管炎的治疗研究提供资料。
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对象和方法
一、对象
RSV感染毛细支气管炎患儿均为1997年11月～1999年3月两个冬春季节本院的住院患儿，符合标准的共42例。按完全随机法分为2组，分别接受rIFN-γ， 生理盐水肌注治疗。除3例因自动出院等原因退出研究外，完成全程研究者共39例。
生理盐水对照组：患儿19例，男15例，女4例，年龄5(2～10)个月；发病距纳入研究时间为 3(1～4)日；入院时按Lowell评分为(9.8±2.1)分(Lowell评分最高17分,最低0分,分数越高,相应喘息症状越重)[6]；体温(37.2±0.3)℃。
rIFN-γ组：患儿20例，男13例，女7例；年龄为5(1～10)个月；发病距纳入研究时间为3(1～4)日；入院时按Lowell评分为 (9.2±1.5)分;体温(37.3±0.4)℃。两组患儿在分组治疗前性别(χ2=0.94, P<0.05)、年龄、发病距纳入研究时间、入院时Lowell氏评分、体温等各方面均无明显差异。
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二、诊断标准
研究对象纳入标准为：年龄在24个月以内的婴幼儿，本次发病为生后第1次发作，经RSV病毒分离阳性和(或)间接免疫荧光法(检测患儿鼻咽分泌物中脱落细胞内的RSV抗原)诊断为RSV感染，由临床医师按照中华人民共和国卫生部，小儿四病防治方案诊断为毛细支气管炎的患儿[7]。排除标准为：有先天性心脏病，早产儿，免疫缺陷患儿或支气管、肺发育不良者。
三、治疗方案
鉴于毛细支气管炎有自限过程，为客观判定疗效，本组资料中所有患儿发病至纳入研究时间少于(或等于) 4 d。根据文献[8]确定给药途径为肌肉注射，治疗组rIFN-γ[上海克隆高技术有限公司，生产批号(95)卫药试字(沪克隆)S-01号]用药剂量为 50 μg/m2 (即3.375×104 IU/kg)，实际用药剂量为3～5万 IU/(kg*d),×3 d。对照组为肌注等体积的生理盐水。其他常规治疗措施如：雾化吸痰、吸氧、使用抗生素及本院中药制剂等两组均相同。
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四、 疗效的判断
1.临床症状: 病情变化由专人以填表方式逐日详细记录(首诊病情评估及病情变化主要按Lowell评分法，以及记录体温，咳嗽变化情况)。
2.免疫学效应: 以保健地段幼儿园及儿保门诊体检婴幼儿为健康对照，比较RSV阳性毛细支气管炎患儿在治疗前与健康婴幼儿之间的细胞免疫指标如CD+3、CD+4、CD+8、B淋巴细胞总数(BC)及血清总IgE水平； 观察纳入研究的两组RSV感染阳性患儿在治疗前后细胞免疫指标及血清中总IgE水平的变化。
3.药物副作用的观察: 包括全身情况如发热，皮疹，出院时外周血中白细胞总数等。
五、 统计学处理
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根据数据性质，对组间资料及治疗前后自身对比的显著性检验，分别采用χ2、方差t检验、秩和检验。各值以
±s或中位数表示。以P<0.05双(或单)尾表示有显著性差异。结果
一、两组患儿治疗前后Lowell评分结果(表1)
对比发现, 从第3天始rIFN-γ组患儿的Lowell评分结果已显著低于对照组(P<0.01)。第5及7天两组的评分结果差异亦有显著意义。
表1 两组在治疗各阶段Lowell评分比较 治疗天数
Lowell 评分中位数及范围
秩和检验t值
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(或u值)
rIFN-γ组(20)
生理盐水组(19)
1
9(6～13)
9(6～14)
1.11
3
4(0～ 9)
6(0～13)
2.97*
5
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1(0～ 6)
3(0～ 8)
2.66*
7
0(0～ 2)
1(0～ 7)
3.17*
10
0(0～ 1)
0(0～ 4)
0.66
* P<0.01；表头括号内为例数 二、两组患儿主要症状及体征(表2)
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包括咳嗽消失，体温降至正常的天数，以Lowell评分降低4分[6]作为喘憋减轻的指标，比较两组症状消失或降低所需的天数。对照组在以上各项指标中的缓解天数分别为2～14 d，4～12 d，2～10 d；而治疗组则分别为2～7 d，4～7 d，1～5 d。
表2 两组主要症状缓解天数(
±s或中位数) 组别例
数
体温
(d)
咳嗽
(d)
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Lowell降
4分(d)
rIFN-γ组
20
4.4±1.7(17例)
5.2±1.2
2(1～ 5)
生理盐水组
19
6.8±3.6(16例)
7.3±2.1
3(2～10)
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t值(或u值)
2.39*
3.90**
4.22**
*P<0.05， ** P<0.01
三、健康婴幼儿与RSV阳性毛细支气管炎患儿之间,两治疗组间、治疗前后细胞免疫指标的比较
两治疗组患儿治疗前各细胞免疫指标间经t检验差异无显著意义(P>0.05);合并后与健康儿比较,其CD+3 、CD+4 、CD+8细胞均低于健康儿,t分别为3.49,5.22,2.05,P均<0.01或0.05,而BC则差异无显著意义。两治疗组治疗前后各免疫指标间经配对t检验差异均无显著意义，P均>0.05 (表3)。
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四、 血清总IgE水平测定结果
1. 健康婴幼儿与RSV阳性毛细支气管炎患儿血清总IgE值比较：RSV阳性毛细支气管炎患儿与健康婴幼儿相比，其血清总IgE值显著升高 (t=3.32, P<0.01)。健康婴幼儿的IgE值为0～11.8 kIU/L ,而RSV感染毛细支气管炎患儿则为0.51～84 kIU/L。
2. 两组患儿治疗前后血清总IgE水平比较(表4)：由表4可见，两组患儿治疗前IgE差异无显著意义(t=1.42,P>0.05)，治疗前后亦无明显变化 (P均>0.05)。
五、 rIFN-γ治疗的毒副作用
有1例患儿在rIFN-γ肌注治疗期间出现发热，体温最高38.2℃，用药3 d停药后热退。另1例患儿在rIFN-γ肌注治疗期间出现全身皮疹，停药及加用抗过敏药后好转。出院时两组患儿外周血白细胞总数对比差异无显著意义(t=0.48,P>0.05)。
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讨论
最近几年，有关RSV感染的免疫和发病机理的研究得出了Th1/Th2失衡理论，即：RSV感染导致机体Th2型优势反应。主要表现在外周血单个核细胞培养上清中IFN-γ/IL-4比值增高，血中BC数升高，CD+8T细胞数下降，RSV特异性(或非特异性) IgE 、IgG4重链同型转化，嗜酸性粒细胞(EOS)活化及分化等[5,9]。相比而言，Th1型反应无论是在RSV疫苗的研究方面还是在自然感染状态下都被认为与机体保护性反应有关。而Th2型反应则因为促进IgE介导的Ⅰ型变态反应及相应的EOS浸润，故与疾病的发生及RSV致哮喘的病理过程有关。
本研究发现，RSV感染毛细支气管炎患儿较同期健康儿童表现出明显降低的CD+8T细胞数，及明显升高的血清中总IgE值。同时，我们还发现RSV阳性患儿的CD+4T细胞数也有明显下降，而BC总数变化不大。既往的动物实验表明，RSV特异性CD+8T细胞可以下调Th2型优势反应[10]。表现为Th2型细胞因子的产生及肺组织内的EOS浸润减少。所以机体CD+8T细胞数目的下降可能参与了RSV感染患儿体内Th2优势反应。
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IFN-γ/IL-4是分别代表Th1/Th2的最典型的细胞因子，它们在许多方面呈现出相互拮抗的作用。而IFN-γ与其他两种干扰素IFN-α、IFN-β相比，其抗病毒活性比它们低(只及1/100～ 1/1 000 )，而免疫调节功能比它们强100～1 000倍。文献中认为，每天50～100 μg/m2的全身给药剂量可明显改善免疫状况，提高抗病毒微生物的效应[8]。我们的研究对象都是婴幼儿，故而采取较小剂量。在尽量排除主观因素干扰的前提下，确实发现患儿喘憋症状(Lowell评分变化)、咳嗽、发热的缓解天数等方面较对照组有明显差异；但治疗前后比较，两组患儿的细胞免疫指标及血清总IgE值均无明显改善。曾有动物实验表明，腹腔或静脉注射rIFN-γ均能增强肺泡吞噬细胞的活性[11]；并证实全身性给药方式可使药物达到呼吸道局部。有研究表明，rIFN-γ还能上调体外培养呼吸道上皮细胞产生分泌性IgA及分泌片SC水平[12]，从而使局部抵抗力增强，减少病毒的复制。我们的结果推测：全身用药对呼吸系统症状的改善可能通过调节呼吸道局部的Th1/Th2平衡,局部分泌性免疫蛋白含量，促进吞噬细胞的活性等起作用。本研究中免疫指标改善不明显考虑还有以下几点原因：纳入研究的样本量偏小；用药剂量偏小，时间较短；复查时间为治疗后的7～10 d，未能反应治疗当时的机体免疫状况；外源性的细胞因子只作用于Th分化机制中的一个方面，未能从全局影响Th细胞的分化过程。
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表3 毛细支气管炎患儿治疗前后与健康儿细胞免疫指标测定结果(
±s) 组别例数
CD+3
CD+4
CD+8
BC
疗前
疗后
疗前
疗后
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疗前
疗后
疗前
疗后
健康儿
18
59± 5
39± 8
31±10
24±9
患儿
23
48±14*
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24±10*
25± 7**
20±6
rIFN-γ组
13
46±11
55±15
21± 9
27±13
26±8
27±6
21±7
, 百拇医药
18±7
生理盐水组
10
51±16
62±10
28±12
34±11
25±7
26±7
26±5
20±5
与健康儿比较，*P<0.01，**P<0.05表4 两组患儿治疗前后血清总IgE值测定结果及比较 组别
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例
数
几何均数
(kIU/L)
Lg
±S1gx前后
比较
t值
疗前
疗后
疗前
疗后
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rIFN-γ组
14
6.250
5.560
1.22±0.26
1.19±0.24
0.27
生理盐水组
14
3.583
2.025
1.11±0.09
1.08±0.07
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1.66
两组比较t值
1.42
1.69
注:因IgE原始数据呈偏态分布，将数据x以(原始数据+10)作对数置换：其平均数为相应几何均数,lg
=lg(原始数据+10)均数, Slgx为相应标准差目前，在RSV疫苗的研究方面，抗IL-4及IL-10抗体及基因重组IL-12等已被用做研究RSV疫苗的免疫佐剂。但至今为止，我们尚未发现国内外用rIFN-γ治疗RSV毛细支气管炎的报道。所以本研究为该方面的研究进展提供了一定的理论依据。
本组患儿接受rIFN-γ的治疗过程中，除1例在用药期间出现低热，1例出现全身皮疹外，未发现其它副作用。Colo等[13]曾用rIFN-γ治疗儿科类风湿性关节炎，在长达两年的治疗过程中发现其副作用包括：发热，头痛，高血压，粒细胞减少症，呕吐等。本次研究中的两组患儿，出院时白细胞总数均正常，且无显著差异。
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在研究过程中,对临床病例特征性症状及体征的评分,我们采取了Lowell氏评分法。我们在既往及本次研究中都体会到，这种方法集中体现了本病的临床特点[14]。
总结上述工作，我们认为RSV感染毛细支气管炎患儿可能存在Th2型优势反应。在我们的研究中主要表现为CD+8 T细胞减少，血清中总IgE值升高；而rIFN-γ治疗RSV感染毛细支气管炎在临床症状及体征的缓解方面有较显著的疗效。rIFN-γ治疗后的长期随访研究及其他有关研究有待进一步进行。
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收稿日期：2000-02-03, http://www.100md.com