CDKN2、nm23基因产物的表达与卵巢上皮性肿瘤生物学行为的关系
作者：王丹波 姜彦多 马晓欣
单位：王丹波(中国医科大学第二临床学院妇产科，沈阳 110003)；姜彦多(沈阳军区第二○二医院病理科)；马晓欣(中国医科大学第二临床学院妇产科，沈阳 110003)
关键词：卵巢肿瘤；免疫组织化学；p16蛋白；nm23基因
中国医科大学学报000328 摘要 目的：p16蛋白和NDPK/nm23在不同类型、不同分期的卵巢上皮性肿瘤的表达情况。方法：采用S-P法免疫组化染色观察p16蛋白和NDPK/nm23在37例卵巢良性肿瘤、33例卵巢交界性肿瘤和69例卵巢上皮癌的表达情况。结果：在卵巢癌中，p16蛋白表达阳性率降低(50.7%，P<0.01)；NDPK/nm23表达阳性率增高(73.9%，P<0.05)。p16蛋白表达与组织学类型无关(P>0.05)；而NDPK/nm23在粘液性癌表达阳性率(54.5%)与浆液性癌(82.2%)和子宫内膜样癌(83.3%)比较，差异显著(P<0.05)。p16蛋白和NDPK/nm23在不同分化程度卵巢癌中的表达无显著差异。两基因产物在Ⅰ～Ⅱ期癌表达阳性率(p16蛋白：68.0%；NDPK/nm23：88.0%)均高于Ⅲ～Ⅳ期癌(p16蛋白：38.7%；NDPK/nm23：64.5%)(P<0.05)。结论： 抑癌基因CDKN2的基因产物p16蛋白表达缺失在卵巢癌的发生和发展中可能都起重要作用；而nm23基因的过度表达对卵巢癌的发生起重要作用，而对其发展可能不起主要作用。
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Relation of CDKN2、nm23 Gene Products Expression with Biologic Behavior
of Ovarian Epithelial Tumor
Wang Danbo Jiang Yanduo Ma Xiaoxin
(Department of Obsterics and Gynecology, The Second Clinical College, China Medical University, Shenyang,110003)
ABSTRACT Objective: Our purpose was to study the expression of p16 protein and NDPK/nm23 in ovarian epithelial tumor. Methods:Compared with normal ovary, the expression of p16 protein and NDPK/nm23 was observed immunohistochemically on formalin-fixed paraffin embedded sections in 37 cases of ovarian benign tumor, 33 cases of ovarian borderline tumor and 69 cases of ovarian epithelial carcinoma. Results:The positive rate of p16 protein was lower(50.7%,P<0.01) and that of NDPK/nm23 was higher(73.9%, P<0.05) in ovarian carcinoma. The present of p16 protein was not related to histological types of tumor. The mucous carcinoma (54.5%) differed significantly from serous (82.8%) and endometrioid (83.3%) carcinoma in positive rate of NDPK/nm23 (P<0.05). Among ovarian carcinoma,the expression of p16 protein and NDPK/nm23 was not related to differentiation of the tumor.The positive rates of both gene products were higher in stageⅠ to Ⅱcarcinoma (p16 protein: 68.0%; NDPK/nm23: 88.0%) than in stage Ⅲ to Ⅳ carcinoma (p16 protein: 38.7%; NDPK/nm23:64.5%) (P<0.05). Conclusion:Inactivation of tumor suppressor gene CDKN2 which leads to deletion of p16 protein expression are involved in the genesis and progression of ovarian carcinoma, nm23 gene might profit more with the genesis and less with the progression of ovarian carcinoma.
, 百拇医药
KEY WORDS ovarian tumor; immunohistochemistry; p16 protein; nm23 gene
CDKN2是定位于人染色体9p21的抑癌基因之一，其编码产物p16蛋白是周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)抑制因子。抑癌基因CDKN2的缺失和p16蛋白水平的下降与某些肿瘤的发生和发展有关。nm23基因定位于17号染色体长臂，其蛋白产物为17 Kd的核苷二磷酸激酶(NDPK)。nm23基因在某些肿瘤的作用也有文献报道。我们利用免疫组织化学方法，研究了p16蛋白、NDPK/nm23在卵巢癌的表达，报道如下。
1 材料与方法
1.1 标本 均为手术切除标本，正常对照卵巢标本取自22例非肿瘤患者。卵巢肿瘤标本139例，其中良性肿瘤37例，交界性肿瘤33例，卵巢癌69例。卵巢癌中包括浆液性癌29例，粘液性癌22例，子宫内膜样癌18例。标本用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，制成5 μm厚切片待检。
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1.2 免疫组织化学染色
采用链菌素生物素-过氧化物酶法(S-P法)。S-P试剂盒和兔抗p16多克隆抗体N-20、NDPK多克隆抗体分别为Zymed、Santa Cruz和Oncor公司产品，染色方法参照文献。
结果判定：p16和NDPK/nm23表达部位均在细胞浆，以细胞呈清晰棕色为表达阳性。在背景清晰情况下选择10个不同视野，每个视野选择100个细胞计数，表达阳性细胞数在20%以上为阳性，低于20%为阴性。
1.3 结果统计分析 采用χ2检验。
2 结果
2.1 p16蛋白和NDPK/nm23在卵巢上皮性肿瘤的表达
卵巢癌与正常卵巢组织、良性和交界性卵巢瘤比较，p16蛋白表达下降；NDPK/nm23表达增强，均有显著差异(P<0.01)，后三者之间无统计学意义，见表1。
, 百拇医药
表1 p16蛋白、NDPK/nm23表达情况
Tab.1 The expression of p16 protein and NDPK/nm23 类别
n
p16阳性
NDPK/nm23阳性
n
阳性率(%)
n
阳性率(%)
正常卵巢
22
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20
90.9
7
31.8
卵巢肿瘤
良性
37
32
86.5
13
35.1
交界性
33
, http://www.100md.com 26
78.8
16
48.5
恶性
69
35
50.7
51
73.9
2.2 p16蛋白、NDPK/nm23表达与卵巢癌组织学类型和病理分级的关系 表2 69例卵巢癌p16、NDPK/nm23表达与组织学
类型、病理分级的关系
, 百拇医药
Tab.2 The relation between the expression of p16 and NDPK/nm23,histological type，and pathologic grading 类别
n
p16阳性
NDPK/nm23阳性
n
阳性率(%)
n
阳性率(%)
组织学类型
浆液性癌
, 百拇医药
29
16
55.2
24
82.8
粘液性癌
22
9
40.9
12
54.5*
宫内膜样癌
18
, 百拇医药
10
55.6
15
83.3
病理分级
G1
22
14
63.6
17
77.3
G2
31
, 百拇医药 15
48.4
23
74.2
G3
16
6
37.5
11
68.8
* 粘液性癌与其它两型癌比较P<0.05
p16蛋白表达在不同组织学类型和分化程度的卵巢癌中无显著差异(P>0.05)；NDPK/nm23的表达中，粘液性癌与浆液性癌和子宫内膜样癌比较有显著差异(X=6.298,P<0.05)，后两者之间无统计学意义。在不同分化程度的卵巢癌中，NDPK/nm23表达无显著差异，见表2。
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2.3 p16蛋白、NDPK/nm23表达与卵巢癌分期的关系
69例卵巢癌中，按FIGO标准分期且临床和病理资料完整者56例。p16蛋白在不同分期的卵巢癌均有表达，而Ⅲ～Ⅳ期癌的表达阳性率(38.7%，12/31)低于Ⅰ～Ⅱ期癌(68.0%，17/25)，两者差异有显著意义(X=4.757，P<0.05)。NDPK/nm23在Ⅰ～Ⅱ期癌的表达阳性率(88.0%，22/25)高于Ⅲ～Ⅳ期癌(64.5%，20/31)，差异显著(X=4.073，P<0.05)。
3 讨论
3.1 p16蛋白是CDKN2的基因产物，其作用机理主要是与CDK4结合，抑制CDK4在细胞调节中的促进作用，从而抑制细胞增生和恶性转化。因此，CDKN2基因的缺失和p16蛋白的下降或缺失可能导致一些肿瘤的发生[1]。CDKN2的染色体位点9p21恰是卵巢癌高频杂合性丢失(LOH)区域[2]，推测位于该区域的CDKN2基因有可能是卵巢癌候选抑癌基因。本研究结果提示，卵巢癌p16蛋白表达阳性率显著低于正常卵巢、良性和交界性肿瘤(P<0.01)。而不同类型卵巢癌组织中p16蛋白阳性率无明显差异(P>0.05)。提示不同类型的卵巢上皮癌可能都存在CDKN2基因缺失和p16蛋白下降。另外，不同分期的卵巢癌中，p16蛋白在Ⅲ～Ⅳ期癌的表达阳性率低于Ⅰ～Ⅱ期癌(P<0.05)，即晚期卵巢癌p16蛋白表达阳性率下降更显著，由此可以推论为p16基因失活不但在卵巢癌的发生中起一定作用，而且对其发展也有一定作用。
, 百拇医药
3.2 nm23基因是1988年Steeg等首先分离鉴定，并认为其与肿瘤转移抑制相关[3]。而且相继有学者证明nm23基因在多种肿瘤中表达增高[4]。本研究显示，NDPK/nm23在卵巢癌表达阳性率高于正常卵巢、良性和交界性肿瘤(P<0.01)，在粘液性癌的表达与浆液性癌和子宫内膜样癌比较，差异显著(P<0.05)。 由此说明nm23在不同类型卵巢癌的发生过程中所起的作用可能不同。在肿瘤的发生和发展过程中，细胞的癌变是多基因、多步骤 在时间和空间上协同作用的结 果[5]。NDPK/nm23的表 达阳性 率在Ⅰ～Ⅱ期癌高于Ⅲ～Ⅳ期癌(P<0.05)，即NDPK/nm23的表达随着卵巢癌的病情进展而减弱。nm23基因表达只是卵巢癌相对早期事件，对卵巢癌的发展不起主要作用，这与文献报道的nm23基因在肿瘤的发生中表达增高，而在肿瘤远处转移中表达下降，与转移抑制关系较大[6]的理论相一致。
另外，本实验结果显示p16蛋白表达缺失、NDPK/nm23表达与卵巢癌分化程度无显著差异(P>0.05)，有待于今后扩大样本量进一步研究确定。
, 百拇医药
参考文献
1，姜彦多，夏书月，戴晓淳，等.肺癌CDKN2基因产物表达的研究.中华结核和呼吸杂志，1996，19(2)：81～83
2，姜彦多，何安光，夏书月，等.肺癌nm23 基因产物/核苷二磷酸激酶表达的研究.中华结核和呼吸杂志，1995，18(4)：209～211
3，Kamb A,Gruis NA,Weaver-Feldhaus J, et al. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science,1994, 264(5157):436-440
4，Campbell IG,Beynon G,Davis M, et al. LOH and mutation analysis of CDKN2 in primary human ovarian cancer. Int J Cancer, 1995,63(2): 222-225
5，Radinsky R,Weisberg HZ,Staroselsky AN, et al. Expression level of the nm23 gene clonal populations of metastatic murine and human neoplasms. Cancer Res,1992,52(20):5808-5814
6，骆成玉，祝学光. nm23基因的研究及其临床应用前景. 国外医学.外科学分册，1995，22(1)：24～27
收稿日期：1999-04-27, 百拇医药
单位：王丹波(中国医科大学第二临床学院妇产科，沈阳 110003)；姜彦多(沈阳军区第二○二医院病理科)；马晓欣(中国医科大学第二临床学院妇产科，沈阳 110003)
关键词：卵巢肿瘤；免疫组织化学；p16蛋白；nm23基因
中国医科大学学报000328 摘要 目的：p16蛋白和NDPK/nm23在不同类型、不同分期的卵巢上皮性肿瘤的表达情况。方法：采用S-P法免疫组化染色观察p16蛋白和NDPK/nm23在37例卵巢良性肿瘤、33例卵巢交界性肿瘤和69例卵巢上皮癌的表达情况。结果：在卵巢癌中，p16蛋白表达阳性率降低(50.7%，P<0.01)；NDPK/nm23表达阳性率增高(73.9%，P<0.05)。p16蛋白表达与组织学类型无关(P>0.05)；而NDPK/nm23在粘液性癌表达阳性率(54.5%)与浆液性癌(82.2%)和子宫内膜样癌(83.3%)比较，差异显著(P<0.05)。p16蛋白和NDPK/nm23在不同分化程度卵巢癌中的表达无显著差异。两基因产物在Ⅰ～Ⅱ期癌表达阳性率(p16蛋白：68.0%；NDPK/nm23：88.0%)均高于Ⅲ～Ⅳ期癌(p16蛋白：38.7%；NDPK/nm23：64.5%)(P<0.05)。结论： 抑癌基因CDKN2的基因产物p16蛋白表达缺失在卵巢癌的发生和发展中可能都起重要作用；而nm23基因的过度表达对卵巢癌的发生起重要作用，而对其发展可能不起主要作用。
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Relation of CDKN2、nm23 Gene Products Expression with Biologic Behavior
of Ovarian Epithelial Tumor
Wang Danbo Jiang Yanduo Ma Xiaoxin
(Department of Obsterics and Gynecology, The Second Clinical College, China Medical University, Shenyang,110003)
ABSTRACT Objective: Our purpose was to study the expression of p16 protein and NDPK/nm23 in ovarian epithelial tumor. Methods:Compared with normal ovary, the expression of p16 protein and NDPK/nm23 was observed immunohistochemically on formalin-fixed paraffin embedded sections in 37 cases of ovarian benign tumor, 33 cases of ovarian borderline tumor and 69 cases of ovarian epithelial carcinoma. Results:The positive rate of p16 protein was lower(50.7%,P<0.01) and that of NDPK/nm23 was higher(73.9%, P<0.05) in ovarian carcinoma. The present of p16 protein was not related to histological types of tumor. The mucous carcinoma (54.5%) differed significantly from serous (82.8%) and endometrioid (83.3%) carcinoma in positive rate of NDPK/nm23 (P<0.05). Among ovarian carcinoma,the expression of p16 protein and NDPK/nm23 was not related to differentiation of the tumor.The positive rates of both gene products were higher in stageⅠ to Ⅱcarcinoma (p16 protein: 68.0%; NDPK/nm23: 88.0%) than in stage Ⅲ to Ⅳ carcinoma (p16 protein: 38.7%; NDPK/nm23:64.5%) (P<0.05). Conclusion:Inactivation of tumor suppressor gene CDKN2 which leads to deletion of p16 protein expression are involved in the genesis and progression of ovarian carcinoma, nm23 gene might profit more with the genesis and less with the progression of ovarian carcinoma.
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KEY WORDS ovarian tumor; immunohistochemistry; p16 protein; nm23 gene
CDKN2是定位于人染色体9p21的抑癌基因之一，其编码产物p16蛋白是周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)抑制因子。抑癌基因CDKN2的缺失和p16蛋白水平的下降与某些肿瘤的发生和发展有关。nm23基因定位于17号染色体长臂，其蛋白产物为17 Kd的核苷二磷酸激酶(NDPK)。nm23基因在某些肿瘤的作用也有文献报道。我们利用免疫组织化学方法，研究了p16蛋白、NDPK/nm23在卵巢癌的表达，报道如下。
1 材料与方法
1.1 标本 均为手术切除标本，正常对照卵巢标本取自22例非肿瘤患者。卵巢肿瘤标本139例，其中良性肿瘤37例，交界性肿瘤33例，卵巢癌69例。卵巢癌中包括浆液性癌29例，粘液性癌22例，子宫内膜样癌18例。标本用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，制成5 μm厚切片待检。
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1.2 免疫组织化学染色
采用链菌素生物素-过氧化物酶法(S-P法)。S-P试剂盒和兔抗p16多克隆抗体N-20、NDPK多克隆抗体分别为Zymed、Santa Cruz和Oncor公司产品，染色方法参照文献。
结果判定：p16和NDPK/nm23表达部位均在细胞浆，以细胞呈清晰棕色为表达阳性。在背景清晰情况下选择10个不同视野，每个视野选择100个细胞计数，表达阳性细胞数在20%以上为阳性，低于20%为阴性。
1.3 结果统计分析 采用χ2检验。
2 结果
2.1 p16蛋白和NDPK/nm23在卵巢上皮性肿瘤的表达
卵巢癌与正常卵巢组织、良性和交界性卵巢瘤比较，p16蛋白表达下降；NDPK/nm23表达增强，均有显著差异(P<0.01)，后三者之间无统计学意义，见表1。
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表1 p16蛋白、NDPK/nm23表达情况
Tab.1 The expression of p16 protein and NDPK/nm23 类别
n
p16阳性
NDPK/nm23阳性
n
阳性率(%)
n
阳性率(%)
正常卵巢
22
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20
90.9
7
31.8
卵巢肿瘤
良性
37
32
86.5
13
35.1
交界性
33
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78.8
16
48.5
恶性
69
35
50.7
51
73.9
2.2 p16蛋白、NDPK/nm23表达与卵巢癌组织学类型和病理分级的关系 表2 69例卵巢癌p16、NDPK/nm23表达与组织学
类型、病理分级的关系
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Tab.2 The relation between the expression of p16 and NDPK/nm23,histological type，and pathologic grading 类别
n
p16阳性
NDPK/nm23阳性
n
阳性率(%)
n
阳性率(%)
组织学类型
浆液性癌
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29
16
55.2
24
82.8
粘液性癌
22
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40.9
12
54.5*
宫内膜样癌
18
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10
55.6
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83.3
病理分级
G1
22
14
63.6
17
77.3
G2
31
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48.4
23
74.2
G3
16
6
37.5
11
68.8
* 粘液性癌与其它两型癌比较P<0.05
p16蛋白表达在不同组织学类型和分化程度的卵巢癌中无显著差异(P>0.05)；NDPK/nm23的表达中，粘液性癌与浆液性癌和子宫内膜样癌比较有显著差异(X=6.298,P<0.05)，后两者之间无统计学意义。在不同分化程度的卵巢癌中，NDPK/nm23表达无显著差异，见表2。
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2.3 p16蛋白、NDPK/nm23表达与卵巢癌分期的关系
69例卵巢癌中，按FIGO标准分期且临床和病理资料完整者56例。p16蛋白在不同分期的卵巢癌均有表达，而Ⅲ～Ⅳ期癌的表达阳性率(38.7%，12/31)低于Ⅰ～Ⅱ期癌(68.0%，17/25)，两者差异有显著意义(X=4.757，P<0.05)。NDPK/nm23在Ⅰ～Ⅱ期癌的表达阳性率(88.0%，22/25)高于Ⅲ～Ⅳ期癌(64.5%，20/31)，差异显著(X=4.073，P<0.05)。
3 讨论
3.1 p16蛋白是CDKN2的基因产物，其作用机理主要是与CDK4结合，抑制CDK4在细胞调节中的促进作用，从而抑制细胞增生和恶性转化。因此，CDKN2基因的缺失和p16蛋白的下降或缺失可能导致一些肿瘤的发生[1]。CDKN2的染色体位点9p21恰是卵巢癌高频杂合性丢失(LOH)区域[2]，推测位于该区域的CDKN2基因有可能是卵巢癌候选抑癌基因。本研究结果提示，卵巢癌p16蛋白表达阳性率显著低于正常卵巢、良性和交界性肿瘤(P<0.01)。而不同类型卵巢癌组织中p16蛋白阳性率无明显差异(P>0.05)。提示不同类型的卵巢上皮癌可能都存在CDKN2基因缺失和p16蛋白下降。另外，不同分期的卵巢癌中，p16蛋白在Ⅲ～Ⅳ期癌的表达阳性率低于Ⅰ～Ⅱ期癌(P<0.05)，即晚期卵巢癌p16蛋白表达阳性率下降更显著，由此可以推论为p16基因失活不但在卵巢癌的发生中起一定作用，而且对其发展也有一定作用。
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另外，本实验结果显示p16蛋白表达缺失、NDPK/nm23表达与卵巢癌分化程度无显著差异(P>0.05)，有待于今后扩大样本量进一步研究确定。
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参考文献
1，姜彦多，夏书月，戴晓淳，等.肺癌CDKN2基因产物表达的研究.中华结核和呼吸杂志，1996，19(2)：81～83
2，姜彦多，何安光，夏书月，等.肺癌nm23 基因产物/核苷二磷酸激酶表达的研究.中华结核和呼吸杂志，1995，18(4)：209～211
3，Kamb A,Gruis NA,Weaver-Feldhaus J, et al. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science,1994, 264(5157):436-440
4，Campbell IG,Beynon G,Davis M, et al. LOH and mutation analysis of CDKN2 in primary human ovarian cancer. Int J Cancer, 1995,63(2): 222-225
5，Radinsky R,Weisberg HZ,Staroselsky AN, et al. Expression level of the nm23 gene clonal populations of metastatic murine and human neoplasms. Cancer Res,1992,52(20):5808-5814
6，骆成玉，祝学光. nm23基因的研究及其临床应用前景. 国外医学.外科学分册，1995，22(1)：24～27
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