泛昔洛韦及相关物质HPLC的测定方法
作者：陆润钟
单位：四川抗菌素工业研究所，成都 610051
关键词：泛昔洛韦；相关物质；高效液相色谱法
中国抗生素杂志000422
摘要：应用C18柱，乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(17∶83)为流动相，检测波长为305nm的色谱系统，对泛昔洛韦及其相关物质进行测定，方法专属性好，精密度高，可用于泛昔洛韦的质量和稳定性研究以及生产监控。
中图分类号：R917； R927.11 文献标识码：A
文章编号：1001-8689(2000)04-0312-02
The determination of famciclovir and its related substance by HPLC
, http://www.100md.com
Lu Run-zhong
(Sichuan Industrial Institute of Antibiotics， Chengdu 610051)
泛昔洛韦(famciclovir，BRL 42810)是近年开发的一种新型抗病毒药，化学上是喷昔洛韦(penciclovir，BLC 39123)的二乙酰-6-脱氧化合物，属喷昔洛韦的前药。临床上本品口服吸收快，体内在酶促条件下，经脱酯和嘌呤环的氧化作用，迅速转化为喷昔洛韦而发挥药效。近年仅有应用高效液相色谱(HPLC)梯度洗脱法进行体液分析的研究报道，尚未见到有关泛昔洛韦及其相关物质的质量分析研究的文献。本文报告一种简便的HPLC条件，能同时对泛昔洛韦及其相关物质进行检测，可用于本品的质量和稳定性研究以及生产监测。
1 实验方法
1.1 仪器与药品
, 百拇医药
仪器 岛津LC-6A高效液相色谱系统，带有SPD-6AV紫外分光光度检测器，SCL-6A系统控制器，C-R3A色谱数据处理机及Rbeodyne-7125 20μl进样阀。
药品 乙腈：色谱纯；磷酸二氢钾：分析纯。泛昔洛韦及相关物质对照品为本所自制。实验用水为双蒸馏水。
1.2 色谱条件
色谱柱为Sphersoil C18，4.6mm×150mm，10μm。流动相为乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(17∶83)，流速1ml/min，检测波长305nm，灵敏度0.08 AUFS(信号衰减为5)。柱温30℃，进样体积20μl。理论板数按泛昔洛韦峰计算，应不低于2500。
1.3 泛昔洛韦含量测定方法
分别精密称取泛昔洛韦适量，用流动相稀释制成每1ml中含50μg的溶液进行测定，按外标法以峰面积计算含量。
, http://www.100md.com
1.4 泛昔洛韦中有关物质的检查方法
取本品，加流动相分别制成每1ml中含0.1mg的供试液和每1ml中含25μg的预试液。取预试液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的高度达记录仪的满标度。精密量取供试液20μl，进样测定，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍，计算供试液色谱图中显示的各杂质峰面积及其总和分别占总峰面积的百分率，或取相应对照品，制成适当浓度，同法测定，按外标法以峰面积计算含量。
2 结果与讨论
2.1 泛昔洛韦与相关物质的分离度
泛昔洛韦与相关物质的混合溶液的HPLC见图1。图中：
1.7min峰为双脱乙酰基泛昔洛韦(BRL 42359)；
, 百拇医药 2.8min峰为单脱乙酰基泛昔洛韦(BRL 43594)；
5.4min峰为泛昔洛韦的7位取代异构体(BRL 48428)；
7.8min峰为泛昔洛韦(BRL 42810)；
14min峰为6-氯-泛昔洛韦(6-氯-BRL 42810)；
16min峰为6-氯-泛昔洛韦的7-位取代异构体(6-氯-BRL 48428)。
图1 泛昔洛韦与相关物质的混合溶液HPLC图谱
经试验显示，2-氨基-6-氯嘌呤峰位于2.1min附近。泛昔洛韦在酸性溶液中的主要降解产物峰位于2.8min；碱性溶液中主要降解产物峰位于1.7min，并伴有2.8min峰的次要降解物。泛昔洛韦经105℃ 3h强烈热解，可产生12.8min峰的未知杂质；而经30d的强光照射，HPLC谱未见明显变化。各项实验表明，介绍的色谱条件，对泛昔洛韦及其相关物质相互间均有很好的分离度，互不干扰检测。
, 百拇医药
对泛昔洛韦合成产品的质量跟踪监测显示，产品中主要不纯物为2.8min峰的6单脱乙酰基泛昔洛韦。
2.2 泛昔洛韦在流动相中的稳定性
流动相配制的0.1g/L泛昔洛韦溶液，室温放置7h，结果显示，主峰和2.8min杂质峰面积百分率几无变化，均很稳定。
2.3 线性关系和检测灵敏度
实验显示，泛昔洛韦在0.125～300mg/L供试浓度范围内，供试液浓度C(进样量)与峰面积Y有很好的线性关系，回归方程为：Y=12869.7C-29.1，相关系数r=0.9999，n=13。本品浓度在0.125mg/L时，进样20μl,即进样量为0.0025μg时，仍可清晰检出泛昔洛韦色谱峰。
6-氨基-6-氯嘌呤，在0.025～6.25mg/L供试浓度范围内，显示有很好的线性关系，Y=23379.3C+827.9，r=0.9999，n=7。按线性浓度范围最小值计算，20μl进样体积，最低检出量为5×10-4μg；0.1g/L的泛昔洛韦供试品检测溶液中，可检出的该杂质最低量为0.025%。经检查，本杂质在产品中很少存在。
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1.7min峰的双脱乙酰基泛昔洛韦(BRL 42359)是泛昔洛韦碱性溶液中的主要降解产物，在0.1～10mg/L供试浓度范围内，显示有很好的线性关系，Y=7583.6C+179.0，r=0.9999，n=7。最低检出量为2×10-3μg；0.1g/L的供试液中最低检出量0.1%。
2.8min峰的单脱乙酰基泛昔洛韦(BRL 43594)，是酸性溶液中主要降解产物，在0.07～5.6mg/L供试浓度范围内，显示有很好的线性关系，Y=8764.1C+17.9，r=0.9999，n=5。最低检出量为1.4×10-3μg；0.1g/L的供试液中最低检出量为0.07%。
5.4min峰的泛昔洛韦7位取代异构体(BRL 48428)，是化学合成的副产物。在0.1～10mg/L供试浓度范围内有很好的线性关系，Y=6337.2C+32.0，r=0.9999，n=8。最低检出量为2×10-3μg；0.1g/L的供试液中，最低检出量为0.1%。经检查，产品中很少存在。
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16min峰的6-氯-泛昔洛韦7位取代异构体(6-氯-BRL 48428)，是化学合成副产物，在0.2～10mg/L供试浓度范围内，有很好的线性关系，Y=6250.2C-464.2，r=0.9998，n=6。最低检出量为4×10-3μg；0.1g/L供试液中最低检测量为0.1%。经检查，产品中很少存在。
2.4 检测方法的精密度试验
泛昔洛韦含量测定方法 取同一供试品溶液进行数次测定，按峰面积计算，进行进样精密度试验，n=5，RSD为0.38%。同一样品当日数次称量或不同日期称量测定，按含量计算，进行日内和日间泛昔洛韦含量测定方法精密度试验，n=5，RSD分别为0.63%和1.2%。方法精密度能满足泛昔洛韦的含量测定要求。
相关物质检查方法 因泛昔洛韦药用产品中主要含有很少量的2.8min峰杂质，故以该杂质作为考察的指针化合物。取同一供试品溶液进行数次测定，按峰面积计算，进行进样精密度试验，n=5时，RSD为3.9%。同一样品，当日数次称量或不同日期称量测定，按峰面积百分率计算，进行日内和日间相关物质检查的方法学精密度试验，当样品中杂质含量在0.51%时，n=5，RSD分别为2.4%和3.2%；当样品中杂质含量在0.24%时，n=5，RSD分别为5.1%和5.7%。方法精密度能满足泛昔洛韦产品中低含量有关物质的检测要求。
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3 结语
(1)实验表明，本文介绍的HPLC色谱条件，对泛昔洛韦及其相关物质相互间均有很好的分离度，互不干扰检测；
(2)泛昔洛韦的含量测定法及其可能杂有的低浓度相关物质的HPLC检查法，进样量与峰面积有很好的线性相关性，色谱法进样精密度、测定方法的日内和日间精密度高。相关物质检出灵敏度，能满足泛昔洛韦产品中低含量杂质的检测要求；
(3)色谱方法简便，实用性强，可用于泛昔洛韦质量分析及生产过程监测。该方法亦是一个能指示泛昔洛韦稳定性的色谱分析法。
作者简介：陆润钟：男，生于1939年，研究员。
收稿日期：1999-08-16, http://www.100md.com
单位：四川抗菌素工业研究所，成都 610051
关键词：泛昔洛韦；相关物质；高效液相色谱法
中国抗生素杂志000422
摘要：应用C18柱，乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(17∶83)为流动相，检测波长为305nm的色谱系统，对泛昔洛韦及其相关物质进行测定，方法专属性好，精密度高，可用于泛昔洛韦的质量和稳定性研究以及生产监控。
中图分类号：R917； R927.11 文献标识码：A
文章编号：1001-8689(2000)04-0312-02
The determination of famciclovir and its related substance by HPLC
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Lu Run-zhong
(Sichuan Industrial Institute of Antibiotics， Chengdu 610051)
泛昔洛韦(famciclovir，BRL 42810)是近年开发的一种新型抗病毒药，化学上是喷昔洛韦(penciclovir，BLC 39123)的二乙酰-6-脱氧化合物，属喷昔洛韦的前药。临床上本品口服吸收快，体内在酶促条件下，经脱酯和嘌呤环的氧化作用，迅速转化为喷昔洛韦而发挥药效。近年仅有应用高效液相色谱(HPLC)梯度洗脱法进行体液分析的研究报道，尚未见到有关泛昔洛韦及其相关物质的质量分析研究的文献。本文报告一种简便的HPLC条件，能同时对泛昔洛韦及其相关物质进行检测，可用于本品的质量和稳定性研究以及生产监测。
1 实验方法
1.1 仪器与药品
, 百拇医药
仪器 岛津LC-6A高效液相色谱系统，带有SPD-6AV紫外分光光度检测器，SCL-6A系统控制器，C-R3A色谱数据处理机及Rbeodyne-7125 20μl进样阀。
药品 乙腈：色谱纯；磷酸二氢钾：分析纯。泛昔洛韦及相关物质对照品为本所自制。实验用水为双蒸馏水。
1.2 色谱条件
色谱柱为Sphersoil C18，4.6mm×150mm，10μm。流动相为乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(17∶83)，流速1ml/min，检测波长305nm，灵敏度0.08 AUFS(信号衰减为5)。柱温30℃，进样体积20μl。理论板数按泛昔洛韦峰计算，应不低于2500。
1.3 泛昔洛韦含量测定方法
分别精密称取泛昔洛韦适量，用流动相稀释制成每1ml中含50μg的溶液进行测定，按外标法以峰面积计算含量。
, http://www.100md.com
1.4 泛昔洛韦中有关物质的检查方法
取本品，加流动相分别制成每1ml中含0.1mg的供试液和每1ml中含25μg的预试液。取预试液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的高度达记录仪的满标度。精密量取供试液20μl，进样测定，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍，计算供试液色谱图中显示的各杂质峰面积及其总和分别占总峰面积的百分率，或取相应对照品，制成适当浓度，同法测定，按外标法以峰面积计算含量。
2 结果与讨论
2.1 泛昔洛韦与相关物质的分离度
泛昔洛韦与相关物质的混合溶液的HPLC见图1。图中：
1.7min峰为双脱乙酰基泛昔洛韦(BRL 42359)；
, 百拇医药 2.8min峰为单脱乙酰基泛昔洛韦(BRL 43594)；
5.4min峰为泛昔洛韦的7位取代异构体(BRL 48428)；
7.8min峰为泛昔洛韦(BRL 42810)；
14min峰为6-氯-泛昔洛韦(6-氯-BRL 42810)；
16min峰为6-氯-泛昔洛韦的7-位取代异构体(6-氯-BRL 48428)。
图1 泛昔洛韦与相关物质的混合溶液HPLC图谱
经试验显示，2-氨基-6-氯嘌呤峰位于2.1min附近。泛昔洛韦在酸性溶液中的主要降解产物峰位于2.8min；碱性溶液中主要降解产物峰位于1.7min，并伴有2.8min峰的次要降解物。泛昔洛韦经105℃ 3h强烈热解，可产生12.8min峰的未知杂质；而经30d的强光照射，HPLC谱未见明显变化。各项实验表明，介绍的色谱条件，对泛昔洛韦及其相关物质相互间均有很好的分离度，互不干扰检测。
, 百拇医药
对泛昔洛韦合成产品的质量跟踪监测显示，产品中主要不纯物为2.8min峰的6单脱乙酰基泛昔洛韦。
2.2 泛昔洛韦在流动相中的稳定性
流动相配制的0.1g/L泛昔洛韦溶液，室温放置7h，结果显示，主峰和2.8min杂质峰面积百分率几无变化，均很稳定。
2.3 线性关系和检测灵敏度
实验显示，泛昔洛韦在0.125～300mg/L供试浓度范围内，供试液浓度C(进样量)与峰面积Y有很好的线性关系，回归方程为：Y=12869.7C-29.1，相关系数r=0.9999，n=13。本品浓度在0.125mg/L时，进样20μl,即进样量为0.0025μg时，仍可清晰检出泛昔洛韦色谱峰。
6-氨基-6-氯嘌呤，在0.025～6.25mg/L供试浓度范围内，显示有很好的线性关系，Y=23379.3C+827.9，r=0.9999，n=7。按线性浓度范围最小值计算，20μl进样体积，最低检出量为5×10-4μg；0.1g/L的泛昔洛韦供试品检测溶液中，可检出的该杂质最低量为0.025%。经检查，本杂质在产品中很少存在。
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1.7min峰的双脱乙酰基泛昔洛韦(BRL 42359)是泛昔洛韦碱性溶液中的主要降解产物，在0.1～10mg/L供试浓度范围内，显示有很好的线性关系，Y=7583.6C+179.0，r=0.9999，n=7。最低检出量为2×10-3μg；0.1g/L的供试液中最低检出量0.1%。
2.8min峰的单脱乙酰基泛昔洛韦(BRL 43594)，是酸性溶液中主要降解产物，在0.07～5.6mg/L供试浓度范围内，显示有很好的线性关系，Y=8764.1C+17.9，r=0.9999，n=5。最低检出量为1.4×10-3μg；0.1g/L的供试液中最低检出量为0.07%。
5.4min峰的泛昔洛韦7位取代异构体(BRL 48428)，是化学合成的副产物。在0.1～10mg/L供试浓度范围内有很好的线性关系，Y=6337.2C+32.0，r=0.9999，n=8。最低检出量为2×10-3μg；0.1g/L的供试液中，最低检出量为0.1%。经检查，产品中很少存在。
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16min峰的6-氯-泛昔洛韦7位取代异构体(6-氯-BRL 48428)，是化学合成副产物，在0.2～10mg/L供试浓度范围内，有很好的线性关系，Y=6250.2C-464.2，r=0.9998，n=6。最低检出量为4×10-3μg；0.1g/L供试液中最低检测量为0.1%。经检查，产品中很少存在。
2.4 检测方法的精密度试验
泛昔洛韦含量测定方法 取同一供试品溶液进行数次测定，按峰面积计算，进行进样精密度试验，n=5，RSD为0.38%。同一样品当日数次称量或不同日期称量测定，按含量计算，进行日内和日间泛昔洛韦含量测定方法精密度试验，n=5，RSD分别为0.63%和1.2%。方法精密度能满足泛昔洛韦的含量测定要求。
相关物质检查方法 因泛昔洛韦药用产品中主要含有很少量的2.8min峰杂质，故以该杂质作为考察的指针化合物。取同一供试品溶液进行数次测定，按峰面积计算，进行进样精密度试验，n=5时，RSD为3.9%。同一样品，当日数次称量或不同日期称量测定，按峰面积百分率计算，进行日内和日间相关物质检查的方法学精密度试验，当样品中杂质含量在0.51%时，n=5，RSD分别为2.4%和3.2%；当样品中杂质含量在0.24%时，n=5，RSD分别为5.1%和5.7%。方法精密度能满足泛昔洛韦产品中低含量有关物质的检测要求。
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3 结语
(1)实验表明，本文介绍的HPLC色谱条件，对泛昔洛韦及其相关物质相互间均有很好的分离度，互不干扰检测；
(2)泛昔洛韦的含量测定法及其可能杂有的低浓度相关物质的HPLC检查法，进样量与峰面积有很好的线性相关性，色谱法进样精密度、测定方法的日内和日间精密度高。相关物质检出灵敏度，能满足泛昔洛韦产品中低含量杂质的检测要求；
(3)色谱方法简便，实用性强，可用于泛昔洛韦质量分析及生产过程监测。该方法亦是一个能指示泛昔洛韦稳定性的色谱分析法。
作者简介：陆润钟：男，生于1939年，研究员。
收稿日期：1999-08-16, http://www.100md.com