肺癌发生发展中cJun、cFos的表达
作者：吴逸明 李卫民 陈琛
单位：河南医科大学劳动卫生学与卫生毒理学教研室 郑州 450052
关键词：cJun；cFos；肺肿瘤；癌
河南医科大学学报000309 摘要 目的：探讨肺癌发生发展过程中cJun、cFos表达水平。方法：收集42例人肺癌标本，其中10例可观察到肺癌癌前病变组织，运用免疫组织化学的方法，研究cJun、cFos在上述组织中的表达水平。结果：42例肺癌组织中cJun、cFos的阳性表达率分别为83.2%和59.5%，其中鳞癌为88.0%和56.0%，腺癌为69.2%和53.8%，小细胞肺癌均为100.0%。正常肺组织cJun、cFos表达阴性。在4例癌前组织中，cJun表达为75%；9例癌前病变组织中，cFos表达为77.8%。结论：在肺癌组织中，有cJun、cFos的高表达，同时，cJun的表达可能介导肺癌的促癌过程。
, http://www.100md.com
分类号 R363.2+1
Expression of cJun and cFos in process of occurring and developing in lung cancer
WU Yiming, LI Weimin, CHEN Chen
(Department of Occupational Health and Health Toxicology, Henan Medical University, Zhengzhou 450052)
Abstract Aim: The level of cJun and cFos were investigated in process of occurring and developing in lung cancer. Methods: The tissues were collected of 42 cases with lung cancer and 10 cases with pre-carcinoma. The expression levels of cJun and cFos were studied by immunohistochemistry. Results: In lung cancer, the positive rates of cJun and cFos were 83.2% and 59.5%, including: 88.0% and 56.0 % in squamous carcinoma, 69.2% and 53.8% in adenocarcinoma, both 100% in small cell lung cancer. The negative expression was in lung tissues. The cJun expressions were 3/4 in four pre-carcinoma tissues,the cFos expressions were 7/9 in nine pre-carcinoma tissues. Conclusion: There were high expressions of cJun and cFos in lung cancer tissues, and cJun expression may involve in the growth of lung cancer.
, 百拇医药
Key words cJun；cFos；lung neoplasms; carcinoma
肺癌的发病率在本世纪呈明显上升趋势，且预后较差，因此，探讨肺癌的发病机制非常必要。原癌基因cjun、cfos的蛋白表达产物cJun、cFos是转录因子，它们在转录水平调控mRNA，从而影响蛋白质的合成。cJun、cFos与细胞的生长和分化密切相关，cJun介导肿瘤的促癌过程，可检出cJun、cFos在人肺癌中高表达。近年针对cJun、 cFos在人肺癌癌前病变组织中表达的研究也有进展。作者收集了42例人肺癌，其中10例可观察到癌前病变组织，用免疫组化方法，对cJun、cFos在上述组织中的表达水平进行了研究。
1 材料与方法
1.1 标本来源 42例人肺癌标本全部取自河南省胸科医院，经该院临床病理科确诊，其中鳞癌25例，腺癌(包括腺鳞癌)13例，小细胞肺癌4例，有癌前病变组织10例。
, 百拇医药
1.2 实验试剂 cJun/AP-1(Ab-2)cat#pc07多克隆抗体，cFos(4): cat#sc-52多克隆抗体由美国明尼苏达大学董子刚博士提供。
1.3 免疫组织化学染色 石蜡标本切为4 μm厚的切片，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，体积百分数为3% H2O2甲醇溶液灭活，微波抗原修复法修复抗原，体积分数为10%山羊血清封闭，加入一抗，4 ℃湿盒过夜，加入生物素化兔抗兔免疫球蛋白，滴加过氧化物酶链酶卵白素复合物，DAB显色，镜下观察反应情况，苏木素复染，中性树胶封片。
1.4 实验对照 阳性对照：cFos为人食管鳞癌；cJun为人肺癌细胞株801D。
1.5 cJun、cFos免疫组化结果判断标准 人肺癌标本结果判断标准采用记数1 000个细胞，根据阳性细胞所占的比例及显色强度，参照1996年全国免疫组织化学技术与诊断标准化专题研讨会意见：25%以上的细胞着色，细胞浆或核内见淡黄色细颗粒，明显高于背景底色为阳性；小于25%的细胞着色或细胞浆和核着色与背景一致为阴性。
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2 结果
2.1 cJun、cFos在人肺癌各病理分型中的阳性表达率 见表1和图1，2(见封三)。
表1 cJun、cFos在42例人肺癌各病理分型中的阳性表达率 组织学类型
n
cFos阳性数(%)
cJun阳性数(%)
鳞 癌
25
14(56.0)
22(88.0)
腺 癌
, 百拇医药
13
7(53.8)
9(69.2)
小细胞癌
4
4(100.0)
4(100.0)
合 计
42
25(59.5)
35(83.3)
2.2 cJun、cFos在人肺癌癌前病变组织中阳性表达情况 在42例人肺癌标本中，可观察到肺癌癌前病变组织10例，用其中4例行免疫组化分析，cJun阳性表达者占3/4(图3，见封三)，9例中cFos阳性表达者占7/9(图4，见封三)。
, 百拇医药
图1肺癌组织中cJun的阳性表达。×400，LSAB法
图2肺癌组织中cFun的阳性表达。×400，LSAB法
图3肺癌癌前组织中cJun的阳性表达。×400，SABC法
图4肺癌癌前组织中cFun的阳性表达。×400，LSAB法
3 讨论
3.1 cJun、cFos在人肺癌中的表达 原癌基因是一类编码关键性调控蛋白质的正常细胞基因，这些基因的异常表达和激活是肿瘤发生的重要分子学基础[1]。原癌基因cjun、cfos属于myc基因家族，是即时早期基因(Immediate Early Gene)，易受外界刺激而表达出cJun、cFos蛋白。cJun、cFos定位于细胞核，具有结合特异DNA序列和激活基因转录的功能，因而是转录因子。本实验用免疫组化法分析，发现cJun、cFos在正常肺组织中表达阴性，在42例人肺癌标本中，cFos阳性表达率为59.5%，其中鳞癌为56.0%，腺癌为53.8%，小细胞肺癌为100.0%；cJun的表达为83.3%，其中鳞癌为88.0%，腺癌为69.2%，小细胞癌为100.0%。本实验结果与贾心善等[1]报道的基本相近，而明显高于Manfred V等[2]、Eve S等[3]报道的结果。上述结果再次证实了Tabor等[4]的研究结果，即在人肺癌组织中，有cJun、cFos的高表达。
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3.2 cJun、cFos在人肺癌癌前病变组织中的表达
本实验已证明：在人肺癌中cJun有高表达。cJun、cFos本身无致癌性，cFos的表达与细胞的分化和增殖都有关，cJun在控制细胞生长和分化中有多种关键性的调节功能[5]，并且介导肿瘤的促癌过程。本实验对4例人肺癌癌前病变组织行cJun免疫组化分析，阳性表达情况为3/4；对9例人肺癌癌前病变组织行cFos免疫组化分析，阳性表达情况为7/9。与Eve S等[3]的报道基本相近，支持其“cJun的改变可能是肺癌发生的早期事件”的理论，提示cJun介导肺癌的促癌过程，同时亦为研究cFos在肺癌早期的表达提供了一些线索。
造成cJun在肺癌与癌前病变组织中高表达的原因是什么？有文献报道[3，6]：作为信号传导通路中的中介，cJun可被许多致癌物和生长因子诱导，并可通过多种癌基因产物介导的传递途径传至细胞，由cJun、cFos、AP-1转变为基因表达使细胞增殖[7]；CTP含有大量多环芳烃(PAHs)，其主要致癌机制是PAHs及其代谢产物最终结合于细胞DNA鸟苷N-7，诱导G-T颠换，这与ras点突变，ras被激活的机制相类似[8]。作者曾分别在3年间2次检测51名CTP接触者血清P21蛋白水平[9]，结果显示该人群有血清P21蛋白升高，可能由ras基因激活所致。据此作者认为，CTP引起ras突变，激活的ras通过这条信号传导通路，使cJun、cFos在大鼠肺癌癌前病变组织中高表达。也有报道在某些肺癌细胞系中，12-0-十四烷酰大戟二萜醇-13-乙醇(TPA)无法诱导cJun的高表达[10]。要验证上述信号通路在肺癌发生发展过程中的存在，还需作进一步的研究。总之，深入探讨cJun、cFos在肺癌发生发展过程中高表达的原因，将有益于深入研究肺癌的发病机制。
, http://www.100md.com
基金项目：河南省自然科学基金资助项目 984020300
研究方向：肺癌的病因学、预防、早期诊断和综合治疗，E-mail：ymwu@371.net
作者简介：吴逸明，男，55岁，教授，博士生导师，参考文献
[1]贾心善，张道荣，孙爱晶. 肺癌基因产物cJun、cFos、 Phosphotyrosine表达的研究.中华病理学杂志,1994,5(23):264
[2]Manfred V, Peter D, Werner W. Prognostic significance of the expression of cfos,cjun and c-erb B-1 oncogene products in human squamous cell lung carcinonmas. Cancer Res Clin Oncol,1993(119):509
, 百拇医药
[3]Eve S, Maura ER, Seth MS. Altered cJun expression: an early event in human lung carcinogenesis. Cancer Res, 1996(56):305
[4]Tabor E. Tumor Suppressor genes, growth factor genes, and onco-genes in hepatitis B virus associated hepatocellular carcinoma. J Med Virol,1994(42):357
[5]Lamph WW, Wamsley P, Sassonecorsi P. Induction of proto-oncogene Jun/AP-1 SC serum and TPA. Nature,1998，(334): 625
, http://www.100md.com [6]Dong Z, Birrer MJ, Watts RG. Blocking of tumor promoter-induced AP-1 activity inhibits induced transformation in JB6 mouse epidermal cells. Proc Natl Acad Sci USA,1994，(94):609
[7]Tiliang D，Michael K. cFos trans criptional activity stimulated by H-Ras-activited protein kinase distinct from JNK and ERK. Nature，1994，371：171
[8]Balmain A，Brown K. Oncogene activation in chemical carcinogenesis. Adv Cancer Res，1988，51：147
[9]吴逸明，王新朝，贾定武等.多环芳烃类混合物接触者血清P21水平的追踪观察研究.中华劳动卫生职业病杂志,2000,18(1):49
[10]吴瑞英，姜槐，付一提.50Hz 磁场增强佛波酯对细胞c-fos基因转录的诱导作用.中华劳动卫生职业病杂志，1999，17(7)：327
2000-01-05收稿, 百拇医药
单位：河南医科大学劳动卫生学与卫生毒理学教研室 郑州 450052
关键词：cJun；cFos；肺肿瘤；癌
河南医科大学学报000309 摘要 目的：探讨肺癌发生发展过程中cJun、cFos表达水平。方法：收集42例人肺癌标本，其中10例可观察到肺癌癌前病变组织，运用免疫组织化学的方法，研究cJun、cFos在上述组织中的表达水平。结果：42例肺癌组织中cJun、cFos的阳性表达率分别为83.2%和59.5%，其中鳞癌为88.0%和56.0%，腺癌为69.2%和53.8%，小细胞肺癌均为100.0%。正常肺组织cJun、cFos表达阴性。在4例癌前组织中，cJun表达为75%；9例癌前病变组织中，cFos表达为77.8%。结论：在肺癌组织中，有cJun、cFos的高表达，同时，cJun的表达可能介导肺癌的促癌过程。
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分类号 R363.2+1
Expression of cJun and cFos in process of occurring and developing in lung cancer
WU Yiming, LI Weimin, CHEN Chen
(Department of Occupational Health and Health Toxicology, Henan Medical University, Zhengzhou 450052)
Abstract Aim: The level of cJun and cFos were investigated in process of occurring and developing in lung cancer. Methods: The tissues were collected of 42 cases with lung cancer and 10 cases with pre-carcinoma. The expression levels of cJun and cFos were studied by immunohistochemistry. Results: In lung cancer, the positive rates of cJun and cFos were 83.2% and 59.5%, including: 88.0% and 56.0 % in squamous carcinoma, 69.2% and 53.8% in adenocarcinoma, both 100% in small cell lung cancer. The negative expression was in lung tissues. The cJun expressions were 3/4 in four pre-carcinoma tissues,the cFos expressions were 7/9 in nine pre-carcinoma tissues. Conclusion: There were high expressions of cJun and cFos in lung cancer tissues, and cJun expression may involve in the growth of lung cancer.
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Key words cJun；cFos；lung neoplasms; carcinoma
肺癌的发病率在本世纪呈明显上升趋势，且预后较差，因此，探讨肺癌的发病机制非常必要。原癌基因cjun、cfos的蛋白表达产物cJun、cFos是转录因子，它们在转录水平调控mRNA，从而影响蛋白质的合成。cJun、cFos与细胞的生长和分化密切相关，cJun介导肿瘤的促癌过程，可检出cJun、cFos在人肺癌中高表达。近年针对cJun、 cFos在人肺癌癌前病变组织中表达的研究也有进展。作者收集了42例人肺癌，其中10例可观察到癌前病变组织，用免疫组化方法，对cJun、cFos在上述组织中的表达水平进行了研究。
1 材料与方法
1.1 标本来源 42例人肺癌标本全部取自河南省胸科医院，经该院临床病理科确诊，其中鳞癌25例，腺癌(包括腺鳞癌)13例，小细胞肺癌4例，有癌前病变组织10例。
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1.2 实验试剂 cJun/AP-1(Ab-2)cat#pc07多克隆抗体，cFos(4): cat#sc-52多克隆抗体由美国明尼苏达大学董子刚博士提供。
1.3 免疫组织化学染色 石蜡标本切为4 μm厚的切片，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，体积百分数为3% H2O2甲醇溶液灭活，微波抗原修复法修复抗原，体积分数为10%山羊血清封闭，加入一抗，4 ℃湿盒过夜，加入生物素化兔抗兔免疫球蛋白，滴加过氧化物酶链酶卵白素复合物，DAB显色，镜下观察反应情况，苏木素复染，中性树胶封片。
1.4 实验对照 阳性对照：cFos为人食管鳞癌；cJun为人肺癌细胞株801D。
1.5 cJun、cFos免疫组化结果判断标准 人肺癌标本结果判断标准采用记数1 000个细胞，根据阳性细胞所占的比例及显色强度，参照1996年全国免疫组织化学技术与诊断标准化专题研讨会意见：25%以上的细胞着色，细胞浆或核内见淡黄色细颗粒，明显高于背景底色为阳性；小于25%的细胞着色或细胞浆和核着色与背景一致为阴性。
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2 结果
2.1 cJun、cFos在人肺癌各病理分型中的阳性表达率 见表1和图1，2(见封三)。
表1 cJun、cFos在42例人肺癌各病理分型中的阳性表达率 组织学类型
n
cFos阳性数(%)
cJun阳性数(%)
鳞 癌
25
14(56.0)
22(88.0)
腺 癌
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13
7(53.8)
9(69.2)
小细胞癌
4
4(100.0)
4(100.0)
合 计
42
25(59.5)
35(83.3)
2.2 cJun、cFos在人肺癌癌前病变组织中阳性表达情况 在42例人肺癌标本中，可观察到肺癌癌前病变组织10例，用其中4例行免疫组化分析，cJun阳性表达者占3/4(图3，见封三)，9例中cFos阳性表达者占7/9(图4，见封三)。
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图1肺癌组织中cJun的阳性表达。×400，LSAB法
图2肺癌组织中cFun的阳性表达。×400，LSAB法
图3肺癌癌前组织中cJun的阳性表达。×400，SABC法
图4肺癌癌前组织中cFun的阳性表达。×400，LSAB法
3 讨论
3.1 cJun、cFos在人肺癌中的表达 原癌基因是一类编码关键性调控蛋白质的正常细胞基因，这些基因的异常表达和激活是肿瘤发生的重要分子学基础[1]。原癌基因cjun、cfos属于myc基因家族，是即时早期基因(Immediate Early Gene)，易受外界刺激而表达出cJun、cFos蛋白。cJun、cFos定位于细胞核，具有结合特异DNA序列和激活基因转录的功能，因而是转录因子。本实验用免疫组化法分析，发现cJun、cFos在正常肺组织中表达阴性，在42例人肺癌标本中，cFos阳性表达率为59.5%，其中鳞癌为56.0%，腺癌为53.8%，小细胞肺癌为100.0%；cJun的表达为83.3%，其中鳞癌为88.0%，腺癌为69.2%，小细胞癌为100.0%。本实验结果与贾心善等[1]报道的基本相近，而明显高于Manfred V等[2]、Eve S等[3]报道的结果。上述结果再次证实了Tabor等[4]的研究结果，即在人肺癌组织中，有cJun、cFos的高表达。
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3.2 cJun、cFos在人肺癌癌前病变组织中的表达
本实验已证明：在人肺癌中cJun有高表达。cJun、cFos本身无致癌性，cFos的表达与细胞的分化和增殖都有关，cJun在控制细胞生长和分化中有多种关键性的调节功能[5]，并且介导肿瘤的促癌过程。本实验对4例人肺癌癌前病变组织行cJun免疫组化分析，阳性表达情况为3/4；对9例人肺癌癌前病变组织行cFos免疫组化分析，阳性表达情况为7/9。与Eve S等[3]的报道基本相近，支持其“cJun的改变可能是肺癌发生的早期事件”的理论，提示cJun介导肺癌的促癌过程，同时亦为研究cFos在肺癌早期的表达提供了一些线索。
造成cJun在肺癌与癌前病变组织中高表达的原因是什么？有文献报道[3，6]：作为信号传导通路中的中介，cJun可被许多致癌物和生长因子诱导，并可通过多种癌基因产物介导的传递途径传至细胞，由cJun、cFos、AP-1转变为基因表达使细胞增殖[7]；CTP含有大量多环芳烃(PAHs)，其主要致癌机制是PAHs及其代谢产物最终结合于细胞DNA鸟苷N-7，诱导G-T颠换，这与ras点突变，ras被激活的机制相类似[8]。作者曾分别在3年间2次检测51名CTP接触者血清P21蛋白水平[9]，结果显示该人群有血清P21蛋白升高，可能由ras基因激活所致。据此作者认为，CTP引起ras突变，激活的ras通过这条信号传导通路，使cJun、cFos在大鼠肺癌癌前病变组织中高表达。也有报道在某些肺癌细胞系中，12-0-十四烷酰大戟二萜醇-13-乙醇(TPA)无法诱导cJun的高表达[10]。要验证上述信号通路在肺癌发生发展过程中的存在，还需作进一步的研究。总之，深入探讨cJun、cFos在肺癌发生发展过程中高表达的原因，将有益于深入研究肺癌的发病机制。
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基金项目：河南省自然科学基金资助项目 984020300
研究方向：肺癌的病因学、预防、早期诊断和综合治疗，E-mail：ymwu@371.net
作者简介：吴逸明，男，55岁，教授，博士生导师，参考文献
[1]贾心善，张道荣，孙爱晶. 肺癌基因产物cJun、cFos、 Phosphotyrosine表达的研究.中华病理学杂志,1994,5(23):264
[2]Manfred V, Peter D, Werner W. Prognostic significance of the expression of cfos,cjun and c-erb B-1 oncogene products in human squamous cell lung carcinonmas. Cancer Res Clin Oncol,1993(119):509
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[3]Eve S, Maura ER, Seth MS. Altered cJun expression: an early event in human lung carcinogenesis. Cancer Res, 1996(56):305
[4]Tabor E. Tumor Suppressor genes, growth factor genes, and onco-genes in hepatitis B virus associated hepatocellular carcinoma. J Med Virol,1994(42):357
[5]Lamph WW, Wamsley P, Sassonecorsi P. Induction of proto-oncogene Jun/AP-1 SC serum and TPA. Nature,1998，(334): 625
, http://www.100md.com [6]Dong Z, Birrer MJ, Watts RG. Blocking of tumor promoter-induced AP-1 activity inhibits induced transformation in JB6 mouse epidermal cells. Proc Natl Acad Sci USA,1994，(94):609
[7]Tiliang D，Michael K. cFos trans criptional activity stimulated by H-Ras-activited protein kinase distinct from JNK and ERK. Nature，1994，371：171
[8]Balmain A，Brown K. Oncogene activation in chemical carcinogenesis. Adv Cancer Res，1988，51：147
[9]吴逸明，王新朝，贾定武等.多环芳烃类混合物接触者血清P21水平的追踪观察研究.中华劳动卫生职业病杂志,2000,18(1):49
[10]吴瑞英，姜槐，付一提.50Hz 磁场增强佛波酯对细胞c-fos基因转录的诱导作用.中华劳动卫生职业病杂志，1999，17(7)：327
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