薄层扫描法测定洁阴洗液中苦参碱的含量
作者：谢东 路玫 蒙大平
单位：谢东(广西区药品检验所 南宁 530021)；路玫(广西区人民医院)；蒙大平(广西区人民医院)
关键词：洁阴洗液；薄层扫描法；苦参碱
中草药000715 摘 要 目的：采用双波长薄层扫法测定洁阴洗液中苦参碱的含量。方法：用反射式锯齿扫描法测定，测定波长λs=520 nm，参比波长 λR=640 nm；展开剂为：氯仿-甲醇-氨水(30∶1∶0.5)，显色剂为稀碘化铋钾试液。结果：点样量在 0.613～3.064 μg 范围内呈良好的线性关系，平均回收率为 99.54%，RSD 为 1.35% (n=6)。结论：该法分离效果好，简便、快速、结果准确，适用于该制剂的质量控制。
TLCS Determination of Matrine in Jieyin Xiye
, 百拇医药
Xie Dong
(Guangxi Institute for Drug Control Nanning 530021)
Lu Mei
(Department of Pharmacy, the People's Hospital of Guangxi)
Meng Daping
(Department of Pharmacy, the People's Hospital of Guangxi)
Abstract To determine the content of matrine in Jieyin Xiye, a lotion for cleaning the pudenda, by TLCS. Dual wavelength reflection zigzag scanning was performed at λS=520 nm, and λR=640 nm. A mixed solvent system of chloroform, methanol, and aqueous ammonia (30∶1∶0.5) was used as the developer； the visualizing agent was dilute potassium iodobismuthate TS. The average recovery was 99.54% with RSD=1.35%. This method was simple and accurate. It is suitable for the quality control of the preparation.
, 百拇医药
Key words Jieyin Xiye (a lotion for cleaning the pudenda) TLCS matrine
洁阴洗液是由苦参、地肤子、薄荷油、蛇床子等中药经加工而成的外用液体制剂，具有清热燥湿、杀虫止痒功能，临床上用于湿热带下，皮肤瘙痒症的治疗。为了有效控制洁阴洗液的内在质量，对其主药苦参中苦参碱的含量测定方法进行了研究。本文采用薄层扫描法对苦参碱含量进行了测定，方法重现性好，简便，可靠，为洁阴洗液的质量控制提供了实验依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器：薄层色谱扫描仪：CS-9301PC 双波长飞点扫描仪(岛津)；定量点样毛细管(岛津)；薄层自动铺板器(瑞士 CAMAG 公司)。
1.2 试药：硅胶G (青岛海洋化工厂)；苦参碱对照品(购于中国药品生物制品检定所)；洁阴洗液样品(广西右江制药厂)；中性氧化铝(上海新诚精细化工有限公司，层析用100～200目)；所用试剂均为分析纯。
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2 溶液制备
2.1 对照品溶液的配制：精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇制成 0.6 mg/mL 的溶液，作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液的配制：精密量取样品 20 mL，置分液漏斗中，加氨试液调 pH 值至 9～10，加氯仿提取4次，每次 20 mL，合并氯仿液，加在中性氧化铝柱上(内径 1.5 cm，装高 5 cm，流速 1～2滴/秒)，收集过柱氯仿液，再用氯仿-甲醇(7∶3) 20 mL洗脱，收集洗脱液，合并，置 60 ℃水浴上蒸干，残渣用无水乙醇使溶解并定容至 10 mL，摇匀，滤过。精密吸取续滤液 5 mL，置 25 mL 量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3 实验条件及考察
3.1 色谱条件：薄层板：硅胶 G-0.5% CMC-Na 板，105 ℃ 活化 1 h；展开剂：氯仿-甲醇-氨水(30∶1∶0.5)：显色方式：喷稀碘化铋钾试液。
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3.2 扫描参数的选定：将层析显色后的斑点于CS-9301 (PC)双波长薄层扫描仪上在可见光区进行光谱扫描，选定 λS=520 nm，λR=640 nm；灵敏度：中；狭缝： 0.4 mm×0.4 mm；线性化参数：SX＝3。
3.3 稳定性考察：对同一薄层板的同一斑点依法测定，每隔 20 min 测定一次，结果表明，斑点在 2 h内稳定，RSD 为 0.92 % (n=6)。
3.4 线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5 μL，点于同一硅胶 G 薄层板上，依法展开，显色，扫描测定。以点样量为横坐标，峰面积值为纵坐标绘制标准曲线。结果表明：苦参碱点样量在 0.623～3.064 μg 范围内，与峰面积值呈线性关系，其回归方程为：
Y=3.9456×10-4 X+0.1642,r=0.999 3，直线不通过原点，因此用外标两点法计算含量。
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3.5 精密度试验：精密吸取苦参碱对照品溶液 1 μg，点于同一薄层板上，共6点，依法展开，显色，扫描测定，6个点测定结果的 RSD 为1.40 %。
3.6 重现性试验：取同一批号的样品，按上述方法测定苦参碱的含量，共测定6次，平均为 1.82 mg/mL，RSD 为0.64%。
3.7 干扰因素的考察：取缺苦参的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制成空白对照液，依法点样，展开，显色，扫描测定。结果在苦参碱相应的色谱位置处无吸收，表明其它组分对苦参碱的测定无干扰。
3.8 加样回收率试验：精密量取已测定含量的样品 20 mL，精密加入适量苦参碱对照品，依法提取测定，计算回收率，平均回收率为 99.54 %，RSD 为 1.35 %。
3.9 样品测定：精密吸取供试品溶液 2 μL与对照品溶液 1 μL，2 μL，分别交叉点于同一薄层板上，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，在薄层板上面覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，依法扫描测定，依据外标二点法公式计算，结果3批样品中苦参碱的含量为2.03 mg/mL，2.01 mg/mL，1.82 mg/mL。
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4 讨论
4.1 苦参碱的测定方法近年来有采用薄层扫描法[1，2]、气相色谱法[3]和HPLC法[4]。本文用薄层扫描法，比较了在硅胶 G-0.5%CMC-Na 薄层板各种展开系统，最后选用氯仿-甲醇-氨水，经试验多种比例，以30∶1∶0.5的混合溶液展开的分离效果好，斑点清晰。
4.2 本试验用氯仿提取后过中性氧化铝柱，杂质少，效率高，展开显色后色谱清晰。
4.3 显色时应注意显色均匀，实验时以喷湿整块板为宜。显色前，要将板用热风吹干或置烘箱中烘 10 min，以尽可能除去板中的氨，否则在喷显色剂后易发生褪色现象，导致显色不稳定，影响测定。
4.4 展开剂应临用时配制，展开前应饱和展开缸约 30 min，并应在缸壁贴滤纸，以使展开缸较快饱和，并减少边缘效应，使得展开较平，斑点圆整。
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谢东 男，大学本科，理学学士，主管药师，主要从事药品检验与中药质量控制和药品质 量标准研究及新药开发研究。
参考文献
1，陈 勇，甄汉深，石勇新，等.中成药，1998，20(7)：13
2，张 斌，王丽娜，肖延斌，等.中国实验方剂学杂志，1998，4(2)：38
3，刘丛威，刘文英，盛龙生，等.中草药，1993，24(8)：405
4，许家鸾，王京霞.中国现代应用药学，1998，15(5)：56
(1999-08-17收稿), http://www.100md.com
单位：谢东(广西区药品检验所 南宁 530021)；路玫(广西区人民医院)；蒙大平(广西区人民医院)
关键词：洁阴洗液；薄层扫描法；苦参碱
中草药000715 摘 要 目的：采用双波长薄层扫法测定洁阴洗液中苦参碱的含量。方法：用反射式锯齿扫描法测定，测定波长λs=520 nm，参比波长 λR=640 nm；展开剂为：氯仿-甲醇-氨水(30∶1∶0.5)，显色剂为稀碘化铋钾试液。结果：点样量在 0.613～3.064 μg 范围内呈良好的线性关系，平均回收率为 99.54%，RSD 为 1.35% (n=6)。结论：该法分离效果好，简便、快速、结果准确，适用于该制剂的质量控制。
TLCS Determination of Matrine in Jieyin Xiye
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Xie Dong
(Guangxi Institute for Drug Control Nanning 530021)
Lu Mei
(Department of Pharmacy, the People's Hospital of Guangxi)
Meng Daping
(Department of Pharmacy, the People's Hospital of Guangxi)
Abstract To determine the content of matrine in Jieyin Xiye, a lotion for cleaning the pudenda, by TLCS. Dual wavelength reflection zigzag scanning was performed at λS=520 nm, and λR=640 nm. A mixed solvent system of chloroform, methanol, and aqueous ammonia (30∶1∶0.5) was used as the developer； the visualizing agent was dilute potassium iodobismuthate TS. The average recovery was 99.54% with RSD=1.35%. This method was simple and accurate. It is suitable for the quality control of the preparation.
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Key words Jieyin Xiye (a lotion for cleaning the pudenda) TLCS matrine
洁阴洗液是由苦参、地肤子、薄荷油、蛇床子等中药经加工而成的外用液体制剂，具有清热燥湿、杀虫止痒功能，临床上用于湿热带下，皮肤瘙痒症的治疗。为了有效控制洁阴洗液的内在质量，对其主药苦参中苦参碱的含量测定方法进行了研究。本文采用薄层扫描法对苦参碱含量进行了测定，方法重现性好，简便，可靠，为洁阴洗液的质量控制提供了实验依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器：薄层色谱扫描仪：CS-9301PC 双波长飞点扫描仪(岛津)；定量点样毛细管(岛津)；薄层自动铺板器(瑞士 CAMAG 公司)。
1.2 试药：硅胶G (青岛海洋化工厂)；苦参碱对照品(购于中国药品生物制品检定所)；洁阴洗液样品(广西右江制药厂)；中性氧化铝(上海新诚精细化工有限公司，层析用100～200目)；所用试剂均为分析纯。
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2 溶液制备
2.1 对照品溶液的配制：精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇制成 0.6 mg/mL 的溶液，作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液的配制：精密量取样品 20 mL，置分液漏斗中，加氨试液调 pH 值至 9～10，加氯仿提取4次，每次 20 mL，合并氯仿液，加在中性氧化铝柱上(内径 1.5 cm，装高 5 cm，流速 1～2滴/秒)，收集过柱氯仿液，再用氯仿-甲醇(7∶3) 20 mL洗脱，收集洗脱液，合并，置 60 ℃水浴上蒸干，残渣用无水乙醇使溶解并定容至 10 mL，摇匀，滤过。精密吸取续滤液 5 mL，置 25 mL 量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3 实验条件及考察
3.1 色谱条件：薄层板：硅胶 G-0.5% CMC-Na 板，105 ℃ 活化 1 h；展开剂：氯仿-甲醇-氨水(30∶1∶0.5)：显色方式：喷稀碘化铋钾试液。
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3.2 扫描参数的选定：将层析显色后的斑点于CS-9301 (PC)双波长薄层扫描仪上在可见光区进行光谱扫描，选定 λS=520 nm，λR=640 nm；灵敏度：中；狭缝： 0.4 mm×0.4 mm；线性化参数：SX＝3。
3.3 稳定性考察：对同一薄层板的同一斑点依法测定，每隔 20 min 测定一次，结果表明，斑点在 2 h内稳定，RSD 为 0.92 % (n=6)。
3.4 线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5 μL，点于同一硅胶 G 薄层板上，依法展开，显色，扫描测定。以点样量为横坐标，峰面积值为纵坐标绘制标准曲线。结果表明：苦参碱点样量在 0.623～3.064 μg 范围内，与峰面积值呈线性关系，其回归方程为：
Y=3.9456×10-4 X+0.1642,r=0.999 3，直线不通过原点，因此用外标两点法计算含量。
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3.5 精密度试验：精密吸取苦参碱对照品溶液 1 μg，点于同一薄层板上，共6点，依法展开，显色，扫描测定，6个点测定结果的 RSD 为1.40 %。
3.6 重现性试验：取同一批号的样品，按上述方法测定苦参碱的含量，共测定6次，平均为 1.82 mg/mL，RSD 为0.64%。
3.7 干扰因素的考察：取缺苦参的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制成空白对照液，依法点样，展开，显色，扫描测定。结果在苦参碱相应的色谱位置处无吸收，表明其它组分对苦参碱的测定无干扰。
3.8 加样回收率试验：精密量取已测定含量的样品 20 mL，精密加入适量苦参碱对照品，依法提取测定，计算回收率，平均回收率为 99.54 %，RSD 为 1.35 %。
3.9 样品测定：精密吸取供试品溶液 2 μL与对照品溶液 1 μL，2 μL，分别交叉点于同一薄层板上，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，在薄层板上面覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，依法扫描测定，依据外标二点法公式计算，结果3批样品中苦参碱的含量为2.03 mg/mL，2.01 mg/mL，1.82 mg/mL。
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4 讨论
4.1 苦参碱的测定方法近年来有采用薄层扫描法[1，2]、气相色谱法[3]和HPLC法[4]。本文用薄层扫描法，比较了在硅胶 G-0.5%CMC-Na 薄层板各种展开系统，最后选用氯仿-甲醇-氨水，经试验多种比例，以30∶1∶0.5的混合溶液展开的分离效果好，斑点清晰。
4.2 本试验用氯仿提取后过中性氧化铝柱，杂质少，效率高，展开显色后色谱清晰。
4.3 显色时应注意显色均匀，实验时以喷湿整块板为宜。显色前，要将板用热风吹干或置烘箱中烘 10 min，以尽可能除去板中的氨，否则在喷显色剂后易发生褪色现象，导致显色不稳定，影响测定。
4.4 展开剂应临用时配制，展开前应饱和展开缸约 30 min，并应在缸壁贴滤纸，以使展开缸较快饱和，并减少边缘效应，使得展开较平，斑点圆整。
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谢东 男，大学本科，理学学士，主管药师，主要从事药品检验与中药质量控制和药品质 量标准研究及新药开发研究。
参考文献
1，陈 勇，甄汉深，石勇新，等.中成药，1998，20(7)：13
2，张 斌，王丽娜，肖延斌，等.中国实验方剂学杂志，1998，4(2)：38
3，刘丛威，刘文英，盛龙生，等.中草药，1993，24(8)：405
4，许家鸾，王京霞.中国现代应用药学，1998，15(5)：56
(1999-08-17收稿), http://www.100md.com