大黄浸液对感染根管内厌氧菌的作用
作者：冯坤 张国驰 童善庆
单位：冯坤(上海口腔病防治院口腔内科 上海市 200001)；张国驰 童善庆(上海第二医科大学微生物教验室)
关键词：大黄；厌氧菌；感染根管；根管消毒剂
华夏医学000305 摘 要 目的：观察大黄浸液对感染根管内厌氧菌的作用效果。方法：用 大黄浸液作为根管消毒剂，对感染根管进行消毒并与临床常用消毒剂甲醛甲酚进行比较，同时还进行了协同药敏试验。结果：大黄浸液具有较好的抗菌作用，与甲醛甲酚有较好的协同作用。结论：大黄浸液具有刺激性小、口感好、抗菌谱广泛、毒副作用甚低等优点，其价格低廉，易获得，易制备，不失为一种有待开发应用的良好根管消毒剂。
中图分类号 R781.33； R781.05
Effect of Rubarb Liquidextract on Anaerobes in Infectious Root Canal
, 百拇医药
Feng Kun1，(Department of Oral Medici n e,Shanghai Oral Disease Treating and Preventing Hospital)
Zhang Guochi2，Tong Shanqing2
(Department of Microbi ology,Shanghai No.2 Medical University,Shanghai 200001)
Abstract Objective:To observe the antibacterial effect of Rubarb li quiolextract on anaerobes in the infectious root canal.Methad:Applying Rubarb li quidextract as a disinfactant to disinfect the infectious canal and it effectire ness was campared to that of forma-cresol solution, a clinicaly common used dis in fections.The synergic drug sensitive test was also performed simultaneously.Resu lt:Rubarb liquidextract was shown to have a satifactorily antibacterial effect which was clearly synergized with formo cresol solution.Conclusion:The finding s hows that Rubarb liguidextract has properties of less irritation,good oral perce ption,broad spetrum of antibacterial effect and low toxic side effect,and low c ost as well as easy to obtain and prepare.It is proved a good disinfectant for i nfectious root canal and to have bright future of application.
, 百拇医药
Key words rubarb;anaerobes,infectious noot canal,root c anal disinfactant
临床上常见的根管感染多与厌氧菌有关，其在感染根管中检出率为93.3%。一些常用根管 消毒剂在抑制和杀灭厌氧菌的同时往往对人体局部组织刺激较大，并有较强的细胞毒性 。大黄浸液不仅具有较强的抗细菌和抗真菌的作用[1]，而且还具有较强的抗厌氧 菌作用[2]。但近年来此类研究报道较少，本实验观察了大黄浸液对感染根管内 厌氧菌的作用，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 药物及其配制
1.1.1 大黄浸液 称取大黄干粉20g，加蒸馏水100ml，隔水煮沸1h。两层 纱布过滤 后再用滤纸过滤，隔水煮沸30min以杀菌，待冷却后置4℃冰箱备用，此大黄浸液浓度在实验 时作为百分之百浓度计算。
, 百拇医药
1.1.2 甲醛甲酚(FC)溶液 40%甲醛溶液10ml，甲酚10ml，95%乙醇5ml， 在以上述溶液20ml加入三甲酚35ml，加甘油至100ml。
上述药物在实验中做进一步稀释时，均以厌氧液体培养基作为稀释液。
1.2 培养基 实验所用厌氧运输培养基、厌氧基础培养基和厌氧生化发酵管均购自上海临床医学检验中心 。
1.2.1 厌氧运输培养基 在厌氧手套箱内将厌氧运输培养基以每瓶2ml分装 在青霉素小瓶内，用石蜡封口备用。
1.2.2 厌氧血平板 称取定量厌氧基础培养基于三角烧瓶中，加 入蒸馏水煮 沸溶解，调整pH至7.4，15磅高压灭菌15min，冷却至50℃时，加入经反复冻融的羊血至终 浓度为10%，混匀后浇平板.使用前24h，放入厌氧手套箱内预还原，在此基础上，加 入系列选择性试剂配成七种厌氧选择性培养基。
, http://www.100md.com
1.2.3 厌氧生化发酵管 每一株待测细菌均接种于10种生化发 酵管，放入湿盒内置厌氧手套箱中48h观察结果。
1.3 菌株及菌液的配制
1.3.1 菌株 4株国际标准菌株分别为产黑色素类杆菌(ATCC25845)、 韦荣氏球菌(ATCC17 745)、核梭杆菌(ATCC10953)、牙龈类杆菌(ATCC1312)。本室分离的两株参考菌为丙酸杆菌( SB1004)、消化链球菌(SL1012)。
1.3.2 菌液配制[3] 菌种打开后接种于厌氧血平板上 ，生长后挑取单菌落接种于2ml液体培养基，37℃48h孵育后加入无菌甘油2ml，震荡混匀 ，吸取10ml作系列10倍稀释，定量接种于血平板，培养后计数CFU/ml，菌液—甘油保 存管置-70℃保存备用。每次实验时将细菌调整到105CFU/ml。
, 百拇医药
1.4 标本采集及临床治疗
1.4.1 采样 选择20～45岁年龄组近2个月内未曾用过任何抗生素做局部或全身治疗的患者，选其单根或双根管患牙，消毒牙面并隔湿后开髓，用25号或30号扩大针取出标本，置厌氧运输培养基内送检。
1.4 .2 治疗 常规根管扩大，用无菌氯化苏打和双氧水交替冲洗，试干后封入浸有大黄的纸尖，3d后取标本培养。
1.5 细菌的培养和鉴定
1.5.1 细菌培养 将标本瓶放在震荡器上混匀30s，系列10倍稀释后从每一稀释度的小瓶中吸取100ml接种平板，手套箱内37℃，培养72h。
1.5.2 鉴定 将菌落特征相同的细菌一并计数，并挑取其中一种代表菌落接种生化管，手套箱内培养48h观察结果。另外，选择临床分离的5株菌落形态和生化特征典型的细菌和5株生化结果难以判断的细菌做代谢酸气相色谱分析。标准图谱制备和样品处理均参考陈聪敏法[4]。
, 百拇医药
1.6 细菌对抗菌药物的敏感试验[4]
1.6.1 纸片琼脂扩散法 用新华Ⅰ号定性滤纸制成直径6mm圆片 ，高压灭菌烘干后以每100片用药液1ml浸泡1h，真空干燥，用微量进样器吸取50μl菌液于平板上，用接种环或 L形玻棒密涂。平板中心贴大黄纸片，两边成直线贴FC纸片，置厌氧手套箱内37℃孵育48h后取出，用卡尺测量抑菌圈直径并观察大黄与FC联合药敏作用结果[5]。
1.6.2 微量稀释法 将96孔板用双蒸水作浸泡处理，烘干后用紫 外线照射30min以杀菌。用液体培养基将各种药物分别稀释成系列浓度，按孔序分别加入不同浓度药物100μl，菌液100μl。每次实验均设药物、菌液和培养基空白对照。本研究的联合药敏试验大黄浸液同FC以9∶1进行配伍，即每孔中大黄浸液加90μl，FC则加10μl。加样完毕，将板置微量振荡器上混匀3min，放入厌氧手套箱内37℃孵育48h。取出后将每孔取一环在平板上点种，并记录孔号，相同条件培养48h后观察细菌生长情况。以孔内无细菌生长的最低药物浓度定为最低杀菌浓度(MBC)，两相邻药物浓度较低，并有细菌生长的孔则定为最低抑菌浓度( MIC)。
, 百拇医药
2 结果
2.1 临床疗效 治疗前，10例患者开髓取样培养结果均 为混合感染，除厌氧菌为主外，尚包括需氧和微需氧菌。经治疗，无1例检出厌氧菌。
2.2 细菌对抗菌药物的敏感试验
2.2.1 纸片琼脂扩散法 结果见表1。
表1 不同药物下纸片琼脂扩散法抑菌圈直径(l/mm) 菌株
大黄浸液
甲醛甲酚
ATCC25845
24.5
28.0
, 百拇医药
ATCC17745
22.0
23.5
ATCC1312
24.0
23.0
ATCC10953
21.5
21.5
SB1004
21.5
21.0
SL1012
, http://www.100md.com
22.5
21.0
2.2.2 微量稀释法 大黄浸液与FC的结果分别见表2、表3。 表2 不同浓度大黄浸液中各种菌株生长情况 菌株
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0.1
0.05
ATCC25845
-
, http://www.100md.com
-
-
-
-
+
+
ATCC17745
-
-
-
-
+
+
+
, 百拇医药
ATCC1312
-
-
-
-
-
+
+
ATCC10953
-
-
-
-
+
, http://www.100md.com
+
+
SB1004
-
-
-
-
+
+
+
SL1012
-
-
-
, 百拇医药
-
+
+
+
注“-”表示阴性，“+’表示阳性。表3 不同浓度甲醛甲酚中各菌株生长情况 菌株
0.4
0.2
0.1
0.05
0.025
0.0125
0.00625
, 百拇医药
ATCC25845
-
-
-
-
-
+
+
ATCC17745
-
-
-
-
+
, 百拇医药
+
+
ATCC1312
-
-
-
-
+
+
+
ATCC10953
-
-
-
, 百拇医药
-
+
+
+
SB 1004
-
-
-
-
+
+
+
SL 1012
-
, 百拇医药
-
-
-
+
+
+
注“-”表示阴性，“+’表示阳性。
2.2.3 微量稀释联合药敏法 结果见表4。
表4 不同浓度大黄浸液联合甲醛甲酚中各菌株生长情况 菌株
0.02
0.01
0.005
, http://www.100md.com
0.0025
0.00125
0.000625
0.0003125
ATCC25845
-
-
-
-
-
-
+
ATCC17745
, http://www.100md.com
-
-
-
-
-
+
+
ATCC1312
-
-
-
-
-
+
, 百拇医药
+
ATCC10953
-
-
-
-
-
+
+
SB1004
-
-
-
-
, http://www.100md.com
-
+
+
SL1012
-
-
-
-
-
+
+
注“-”表示阴性，“+’表示阳性。
3 讨论
, 百拇医药
大黄具有诸多的治疗作用，其中包括治疗感染性疾病[6，7]。由于它的抗菌谱广，杀菌力强，副作用小，历来受到医学界的重视。本实验将大黄浸液用于感染根管的消毒，以期寻找一种抗菌效果好，而毒副作用小的药物替代目前使用的根管消毒药物。从实验结果看出，在微量稀释法中，对6株厌氧菌，大黄浸液的MIC基本在0.2%左右， MBC在0.4%左右， FC的MIC在0.025%左右，MBC在0.05%左右。在微量稀释联合药敏法中，大黄浸液与 FC协同作用，则MIC显著下降为0.00065%，MBC降低为0.00125%。因此，大黄浸液虽然在微量稀释法中对厌氧菌的抑制程度比FC稍低，但在实际应用中，由于FC对口腔粘膜刺激性较大，故其作用浓度受到限制，而大黄浸液对厌氧菌的抑制能力虽逊于FC，但其浓度在制备时尚可进一步提高，并且它对口腔粘膜无刺激，无明显毒副作用。若在临床实际应用时将大黄浸液与 FC适当配伍，不仅可以降低FC药物的浓度以减轻其刺激性或毒副作用，而且能大幅度提高其抗菌能力。因此，大黄浸液不失为一种良好的根管消毒药物，值得在临床上推广应用。
, 百拇医药
作者简介：冯坤(1964-)，男。1988年毕业于上海第二医科大学 口腔系，现任上海口腔病防治院口腔内科主治医师。
参考文献
1，刘国声.中药抗生素研究.中华新医学报，1950，(2)：95
2，陈聪敏，王文风，赵汉儒，等.中药抗厌氧菌的系列研究I.抗厌氧菌中草 药的体外筛选.中国微生物学杂志，1989，1(2)：5
3，张国驰，刘正.常用口腔菌斑抑制剂对口腔粘性放线菌和内氏放线菌的作用.口腔医学纵横，1991，7(2)：73
4，陈聪敏主编.厌氧菌及其感染.上海：上海医科大学出版社，1989.26 1～276
5，刘恭植主编.微生物学和微生物学检验——高等医学院校教材.北京：人 民卫生出版社，1987.100～110
6，高晓山.大黄.第1版.北京：中国医药科技出版社，1988.154～116，184～207
7，焦东海.大黄的药理和临床应用.第1版.兰州：甘肃科技出版社，1986.60～ 62，145～153
(收稿 1999-12-01), 百拇医药
单位：冯坤(上海口腔病防治院口腔内科 上海市 200001)；张国驰 童善庆(上海第二医科大学微生物教验室)
关键词：大黄；厌氧菌；感染根管；根管消毒剂
华夏医学000305 摘 要 目的：观察大黄浸液对感染根管内厌氧菌的作用效果。方法：用 大黄浸液作为根管消毒剂，对感染根管进行消毒并与临床常用消毒剂甲醛甲酚进行比较，同时还进行了协同药敏试验。结果：大黄浸液具有较好的抗菌作用，与甲醛甲酚有较好的协同作用。结论：大黄浸液具有刺激性小、口感好、抗菌谱广泛、毒副作用甚低等优点，其价格低廉，易获得，易制备，不失为一种有待开发应用的良好根管消毒剂。
中图分类号 R781.33； R781.05
Effect of Rubarb Liquidextract on Anaerobes in Infectious Root Canal
, 百拇医药
Feng Kun1，(Department of Oral Medici n e,Shanghai Oral Disease Treating and Preventing Hospital)
Zhang Guochi2，Tong Shanqing2
(Department of Microbi ology,Shanghai No.2 Medical University,Shanghai 200001)
Abstract Objective:To observe the antibacterial effect of Rubarb li quiolextract on anaerobes in the infectious root canal.Methad:Applying Rubarb li quidextract as a disinfactant to disinfect the infectious canal and it effectire ness was campared to that of forma-cresol solution, a clinicaly common used dis in fections.The synergic drug sensitive test was also performed simultaneously.Resu lt:Rubarb liquidextract was shown to have a satifactorily antibacterial effect which was clearly synergized with formo cresol solution.Conclusion:The finding s hows that Rubarb liguidextract has properties of less irritation,good oral perce ption,broad spetrum of antibacterial effect and low toxic side effect,and low c ost as well as easy to obtain and prepare.It is proved a good disinfectant for i nfectious root canal and to have bright future of application.
, 百拇医药
Key words rubarb;anaerobes,infectious noot canal,root c anal disinfactant
临床上常见的根管感染多与厌氧菌有关，其在感染根管中检出率为93.3%。一些常用根管 消毒剂在抑制和杀灭厌氧菌的同时往往对人体局部组织刺激较大，并有较强的细胞毒性 。大黄浸液不仅具有较强的抗细菌和抗真菌的作用[1]，而且还具有较强的抗厌氧 菌作用[2]。但近年来此类研究报道较少，本实验观察了大黄浸液对感染根管内 厌氧菌的作用，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 药物及其配制
1.1.1 大黄浸液 称取大黄干粉20g，加蒸馏水100ml，隔水煮沸1h。两层 纱布过滤 后再用滤纸过滤，隔水煮沸30min以杀菌，待冷却后置4℃冰箱备用，此大黄浸液浓度在实验 时作为百分之百浓度计算。
, 百拇医药
1.1.2 甲醛甲酚(FC)溶液 40%甲醛溶液10ml，甲酚10ml，95%乙醇5ml， 在以上述溶液20ml加入三甲酚35ml，加甘油至100ml。
上述药物在实验中做进一步稀释时，均以厌氧液体培养基作为稀释液。
1.2 培养基 实验所用厌氧运输培养基、厌氧基础培养基和厌氧生化发酵管均购自上海临床医学检验中心 。
1.2.1 厌氧运输培养基 在厌氧手套箱内将厌氧运输培养基以每瓶2ml分装 在青霉素小瓶内，用石蜡封口备用。
1.2.2 厌氧血平板 称取定量厌氧基础培养基于三角烧瓶中，加 入蒸馏水煮 沸溶解，调整pH至7.4，15磅高压灭菌15min，冷却至50℃时，加入经反复冻融的羊血至终 浓度为10%，混匀后浇平板.使用前24h，放入厌氧手套箱内预还原，在此基础上，加 入系列选择性试剂配成七种厌氧选择性培养基。
, http://www.100md.com
1.2.3 厌氧生化发酵管 每一株待测细菌均接种于10种生化发 酵管，放入湿盒内置厌氧手套箱中48h观察结果。
1.3 菌株及菌液的配制
1.3.1 菌株 4株国际标准菌株分别为产黑色素类杆菌(ATCC25845)、 韦荣氏球菌(ATCC17 745)、核梭杆菌(ATCC10953)、牙龈类杆菌(ATCC1312)。本室分离的两株参考菌为丙酸杆菌( SB1004)、消化链球菌(SL1012)。
1.3.2 菌液配制[3] 菌种打开后接种于厌氧血平板上 ，生长后挑取单菌落接种于2ml液体培养基，37℃48h孵育后加入无菌甘油2ml，震荡混匀 ，吸取10ml作系列10倍稀释，定量接种于血平板，培养后计数CFU/ml，菌液—甘油保 存管置-70℃保存备用。每次实验时将细菌调整到105CFU/ml。
, 百拇医药
1.4 标本采集及临床治疗
1.4.1 采样 选择20～45岁年龄组近2个月内未曾用过任何抗生素做局部或全身治疗的患者，选其单根或双根管患牙，消毒牙面并隔湿后开髓，用25号或30号扩大针取出标本，置厌氧运输培养基内送检。
1.4 .2 治疗 常规根管扩大，用无菌氯化苏打和双氧水交替冲洗，试干后封入浸有大黄的纸尖，3d后取标本培养。
1.5 细菌的培养和鉴定
1.5.1 细菌培养 将标本瓶放在震荡器上混匀30s，系列10倍稀释后从每一稀释度的小瓶中吸取100ml接种平板，手套箱内37℃，培养72h。
1.5.2 鉴定 将菌落特征相同的细菌一并计数，并挑取其中一种代表菌落接种生化管，手套箱内培养48h观察结果。另外，选择临床分离的5株菌落形态和生化特征典型的细菌和5株生化结果难以判断的细菌做代谢酸气相色谱分析。标准图谱制备和样品处理均参考陈聪敏法[4]。
, 百拇医药
1.6 细菌对抗菌药物的敏感试验[4]
1.6.1 纸片琼脂扩散法 用新华Ⅰ号定性滤纸制成直径6mm圆片 ，高压灭菌烘干后以每100片用药液1ml浸泡1h，真空干燥，用微量进样器吸取50μl菌液于平板上，用接种环或 L形玻棒密涂。平板中心贴大黄纸片，两边成直线贴FC纸片，置厌氧手套箱内37℃孵育48h后取出，用卡尺测量抑菌圈直径并观察大黄与FC联合药敏作用结果[5]。
1.6.2 微量稀释法 将96孔板用双蒸水作浸泡处理，烘干后用紫 外线照射30min以杀菌。用液体培养基将各种药物分别稀释成系列浓度，按孔序分别加入不同浓度药物100μl，菌液100μl。每次实验均设药物、菌液和培养基空白对照。本研究的联合药敏试验大黄浸液同FC以9∶1进行配伍，即每孔中大黄浸液加90μl，FC则加10μl。加样完毕，将板置微量振荡器上混匀3min，放入厌氧手套箱内37℃孵育48h。取出后将每孔取一环在平板上点种，并记录孔号，相同条件培养48h后观察细菌生长情况。以孔内无细菌生长的最低药物浓度定为最低杀菌浓度(MBC)，两相邻药物浓度较低，并有细菌生长的孔则定为最低抑菌浓度( MIC)。
, 百拇医药
2 结果
2.1 临床疗效 治疗前，10例患者开髓取样培养结果均 为混合感染，除厌氧菌为主外，尚包括需氧和微需氧菌。经治疗，无1例检出厌氧菌。
2.2 细菌对抗菌药物的敏感试验
2.2.1 纸片琼脂扩散法 结果见表1。
表1 不同药物下纸片琼脂扩散法抑菌圈直径(l/mm) 菌株
大黄浸液
甲醛甲酚
ATCC25845
24.5
28.0
, 百拇医药
ATCC17745
22.0
23.5
ATCC1312
24.0
23.0
ATCC10953
21.5
21.5
SB1004
21.5
21.0
SL1012
, http://www.100md.com
22.5
21.0
2.2.2 微量稀释法 大黄浸液与FC的结果分别见表2、表3。 表2 不同浓度大黄浸液中各种菌株生长情况 菌株
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0.1
0.05
ATCC25845
-
, http://www.100md.com
-
-
-
-
+
+
ATCC17745
-
-
-
-
+
+
+
, 百拇医药
ATCC1312
-
-
-
-
-
+
+
ATCC10953
-
-
-
-
+
, http://www.100md.com
+
+
SB1004
-
-
-
-
+
+
+
SL1012
-
-
-
, 百拇医药
-
+
+
+
注“-”表示阴性，“+’表示阳性。表3 不同浓度甲醛甲酚中各菌株生长情况 菌株
0.4
0.2
0.1
0.05
0.025
0.0125
0.00625
, 百拇医药
ATCC25845
-
-
-
-
-
+
+
ATCC17745
-
-
-
-
+
, 百拇医药
+
+
ATCC1312
-
-
-
-
+
+
+
ATCC10953
-
-
-
, 百拇医药
-
+
+
+
SB 1004
-
-
-
-
+
+
+
SL 1012
-
, 百拇医药
-
-
-
+
+
+
注“-”表示阴性，“+’表示阳性。
2.2.3 微量稀释联合药敏法 结果见表4。
表4 不同浓度大黄浸液联合甲醛甲酚中各菌株生长情况 菌株
0.02
0.01
0.005
, http://www.100md.com
0.0025
0.00125
0.000625
0.0003125
ATCC25845
-
-
-
-
-
-
+
ATCC17745
, http://www.100md.com
-
-
-
-
-
+
+
ATCC1312
-
-
-
-
-
+
, 百拇医药
+
ATCC10953
-
-
-
-
-
+
+
SB1004
-
-
-
-
, http://www.100md.com
-
+
+
SL1012
-
-
-
-
-
+
+
注“-”表示阴性，“+’表示阳性。
3 讨论
, 百拇医药
大黄具有诸多的治疗作用，其中包括治疗感染性疾病[6，7]。由于它的抗菌谱广，杀菌力强，副作用小，历来受到医学界的重视。本实验将大黄浸液用于感染根管的消毒，以期寻找一种抗菌效果好，而毒副作用小的药物替代目前使用的根管消毒药物。从实验结果看出，在微量稀释法中，对6株厌氧菌，大黄浸液的MIC基本在0.2%左右， MBC在0.4%左右， FC的MIC在0.025%左右，MBC在0.05%左右。在微量稀释联合药敏法中，大黄浸液与 FC协同作用，则MIC显著下降为0.00065%，MBC降低为0.00125%。因此，大黄浸液虽然在微量稀释法中对厌氧菌的抑制程度比FC稍低，但在实际应用中，由于FC对口腔粘膜刺激性较大，故其作用浓度受到限制，而大黄浸液对厌氧菌的抑制能力虽逊于FC，但其浓度在制备时尚可进一步提高，并且它对口腔粘膜无刺激，无明显毒副作用。若在临床实际应用时将大黄浸液与 FC适当配伍，不仅可以降低FC药物的浓度以减轻其刺激性或毒副作用，而且能大幅度提高其抗菌能力。因此，大黄浸液不失为一种良好的根管消毒药物，值得在临床上推广应用。
, 百拇医药
作者简介：冯坤(1964-)，男。1988年毕业于上海第二医科大学 口腔系，现任上海口腔病防治院口腔内科主治医师。
参考文献
1，刘国声.中药抗生素研究.中华新医学报，1950，(2)：95
2，陈聪敏，王文风，赵汉儒，等.中药抗厌氧菌的系列研究I.抗厌氧菌中草 药的体外筛选.中国微生物学杂志，1989，1(2)：5
3，张国驰，刘正.常用口腔菌斑抑制剂对口腔粘性放线菌和内氏放线菌的作用.口腔医学纵横，1991，7(2)：73
4，陈聪敏主编.厌氧菌及其感染.上海：上海医科大学出版社，1989.26 1～276
5，刘恭植主编.微生物学和微生物学检验——高等医学院校教材.北京：人 民卫生出版社，1987.100～110
6，高晓山.大黄.第1版.北京：中国医药科技出版社，1988.154～116，184～207
7，焦东海.大黄的药理和临床应用.第1版.兰州：甘肃科技出版社，1986.60～ 62，145～153
(收稿 1999-12-01), 百拇医药