不同保养液中库存血ATP的保存能力研究
作者：孙 兵 顾光煜 王以立 李跃松
单位：江苏省南京市鼓楼医院(南京 210008)
关键词：
右江民族医学院学报/9902108 库存血在保存过程中，由于红细胞本身的代谢需要，红细胞中三磷酸腺苷(ATP)和2,3-二磷酸甘油(2,3-DPG)会逐渐下降。而贮存血中的ATP和2,3-DPG是延长红细胞的保存期和红细胞血红蛋白的放氧能力的重要因素。ATP维持在一定水平有助于红细胞形态的维持、保存期的延长及输入体内的红细胞存活率提高，有报道当红细胞ATP的含量低于1.5μmol/L时，输血后24h红细胞的存活率显著下降[1]。从ACD保养液问世以来到CPD、CPDA保养液的研制，有效地提高了库存血红细胞ATP的含量。为了了解库存血中ATP的保存情况，以便于进一步的研究更适宜保存红细胞中ATP和2,3-DPG的保养液，我们对目前常用的三种血液保养液(ACD、CPD、CPDA)中红细胞ATP的保存情况进行了研究，现报道如下。
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1 材料与方法
1.1 各种血液保养液配制
1.1.1 ACD保养液 枸橼酸钠(Na3C6H5O7.2H2O)45.2mmol/L，枸橼酸(C6H8O7.H2O)22.4mmol/L，无水葡萄糖166.5mmol/L，pH5.0。
1.1.2 CPD保养液 枸橼酸钠(Na3C6H5O7.2H2O)89.4mmol/L，枸橼酸(C6H8O7.H2O)15.56mmol/L，无水葡萄糖141.5mmol/L，磷酸二氢钠(NaH2PO4.H2O)14.2mmol/L，pH5.5。
, 百拇医药
1.1.3 CPDA保养液 在CPD保养液中加入腺嘌呤5.46mmol/L，pH5.5。
1.2 仪器 美国IL 1400血气分析仪；721型分光光度计；日本日立UV-2201型紫外分光光度计；美国Coulter JT-IR血细胞分析仪。
1.3 方法 取3只100ml玻璃瓶，加塞，高压无菌后分别加入上述3种保养液8ml，同一血液无菌采血后每瓶分别加入全血65ml，混匀后4℃保存。于0、4、7、10、14、21、28、35、42天各无菌采血1次，分别测定ATP、pH。pH用IL1400血气分析仪测定。ATP用美国Sigma公司试剂盒，批号116H6058，按试剂盒操作说明，用日立UV-2201紫外分光光度计测定。用Coulter JT-IR血细胞分析仪测定库存血血红蛋白含量。根据血红蛋白及全血ATP含量，计算出每克血红蛋白ATP含量。绘制不同保养液的库存血ATP与pH的时间变化曲线图。
, 百拇医药 2 结果
2.1 如图1所示，在ACD、CPD及CPDA保养液中红细胞内的ATP含量。可见ACD与CPD中的红细胞ATP变化情况相仿，ATP水平迅速下降，到第21天已下降约50%，而CPDA中红细胞ATP基本维持在较高水平。
图1 3种保养液中库存血ATP的变化
2.2 如图2所示，各种保养液的库存血的pH值随保存天数而逐渐下降，到第6周时下降达0.4pH单位。ACD保养液库存血基础pH值较CPD和CPDA库存血低0.2pH单位。
图2 3种保养液中库存血pH的变化
, 百拇医药 3 讨论
3.1 延长血液保存红细胞的保存期的主要办法是提高库存血红细胞中的ATP含量，早年的ACD保养液的保存期为3周左右，其溶液的pH值较低，缓冲能力也较弱，其库存血ATP水平下降明显。CPD保养液中加入了磷酸盐，由于磷酸盐可参与红细胞的能量代谢产生ATP和2,3-DPG，我们的实验表明，加入磷酸盐可使其2,3-DPG的保存稍有延长(另文报道)，但并不能显著地提高ATP的保存期，另外，CPD液的pH值略高于ACD液，且具有较强的缓冲能力。CPDA液由于加入了腺嘌呤(属于生物能量物质)，能较好地维持红细胞内的ATP水平，明显提高红细胞的存活率。CPDA保养液的使用，使血液的有效保存期可延长到5～7周，红细胞的存活率仍可达80%～85%左右[2]。
3.2 在实验中我们还作了pH5.5和pH5.71的CPDA两种保养液的比较，结果显示：ATP的保存效果无明显差别，这可能是两者的pH差异较小而血液又是较强的缓冲体系，因而保养液pH的少量变化对ATP的保存效果影响不大。
, 百拇医药
3.3 CPDA保养液对ATP的保存效果虽然明显优于ACD和CPD保养液，但并未能有效地延长红细胞2,3-DPG的保存时间[3]。如何在ATP保存效果较好的前提下，通过改善CPDA保养液以延长细胞2,3-DPG的保存期，尚有待进一步研究。
参考文献
[1] 刘庆莹，陈文为.2,3-二磷酸甘油代谢和生理功能.生理学进展，1983；14(1)：78
[2] 杨国荣.血液保存液的研究进展.日本医学介绍，1992；13(1)：43
[3] 毕蕾.血液保存期间红细胞的一些变化.国外医学(输血及血液学分册)，1986；9(3)：166
(1998-09-22收稿), 百拇医药
单位：江苏省南京市鼓楼医院(南京 210008)
关键词：
右江民族医学院学报/9902108 库存血在保存过程中，由于红细胞本身的代谢需要，红细胞中三磷酸腺苷(ATP)和2,3-二磷酸甘油(2,3-DPG)会逐渐下降。而贮存血中的ATP和2,3-DPG是延长红细胞的保存期和红细胞血红蛋白的放氧能力的重要因素。ATP维持在一定水平有助于红细胞形态的维持、保存期的延长及输入体内的红细胞存活率提高，有报道当红细胞ATP的含量低于1.5μmol/L时，输血后24h红细胞的存活率显著下降[1]。从ACD保养液问世以来到CPD、CPDA保养液的研制，有效地提高了库存血红细胞ATP的含量。为了了解库存血中ATP的保存情况，以便于进一步的研究更适宜保存红细胞中ATP和2,3-DPG的保养液，我们对目前常用的三种血液保养液(ACD、CPD、CPDA)中红细胞ATP的保存情况进行了研究，现报道如下。
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1 材料与方法
1.1 各种血液保养液配制
1.1.1 ACD保养液 枸橼酸钠(Na3C6H5O7.2H2O)45.2mmol/L，枸橼酸(C6H8O7.H2O)22.4mmol/L，无水葡萄糖166.5mmol/L，pH5.0。
1.1.2 CPD保养液 枸橼酸钠(Na3C6H5O7.2H2O)89.4mmol/L，枸橼酸(C6H8O7.H2O)15.56mmol/L，无水葡萄糖141.5mmol/L，磷酸二氢钠(NaH2PO4.H2O)14.2mmol/L，pH5.5。
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1.1.3 CPDA保养液 在CPD保养液中加入腺嘌呤5.46mmol/L，pH5.5。
1.2 仪器 美国IL 1400血气分析仪；721型分光光度计；日本日立UV-2201型紫外分光光度计；美国Coulter JT-IR血细胞分析仪。
1.3 方法 取3只100ml玻璃瓶，加塞，高压无菌后分别加入上述3种保养液8ml，同一血液无菌采血后每瓶分别加入全血65ml，混匀后4℃保存。于0、4、7、10、14、21、28、35、42天各无菌采血1次，分别测定ATP、pH。pH用IL1400血气分析仪测定。ATP用美国Sigma公司试剂盒，批号116H6058，按试剂盒操作说明，用日立UV-2201紫外分光光度计测定。用Coulter JT-IR血细胞分析仪测定库存血血红蛋白含量。根据血红蛋白及全血ATP含量，计算出每克血红蛋白ATP含量。绘制不同保养液的库存血ATP与pH的时间变化曲线图。
, 百拇医药 2 结果
2.1 如图1所示，在ACD、CPD及CPDA保养液中红细胞内的ATP含量。可见ACD与CPD中的红细胞ATP变化情况相仿，ATP水平迅速下降，到第21天已下降约50%，而CPDA中红细胞ATP基本维持在较高水平。
图1 3种保养液中库存血ATP的变化
2.2 如图2所示，各种保养液的库存血的pH值随保存天数而逐渐下降，到第6周时下降达0.4pH单位。ACD保养液库存血基础pH值较CPD和CPDA库存血低0.2pH单位。
图2 3种保养液中库存血pH的变化
, 百拇医药 3 讨论
3.1 延长血液保存红细胞的保存期的主要办法是提高库存血红细胞中的ATP含量，早年的ACD保养液的保存期为3周左右，其溶液的pH值较低，缓冲能力也较弱，其库存血ATP水平下降明显。CPD保养液中加入了磷酸盐，由于磷酸盐可参与红细胞的能量代谢产生ATP和2,3-DPG，我们的实验表明，加入磷酸盐可使其2,3-DPG的保存稍有延长(另文报道)，但并不能显著地提高ATP的保存期，另外，CPD液的pH值略高于ACD液，且具有较强的缓冲能力。CPDA液由于加入了腺嘌呤(属于生物能量物质)，能较好地维持红细胞内的ATP水平，明显提高红细胞的存活率。CPDA保养液的使用，使血液的有效保存期可延长到5～7周，红细胞的存活率仍可达80%～85%左右[2]。
3.2 在实验中我们还作了pH5.5和pH5.71的CPDA两种保养液的比较，结果显示：ATP的保存效果无明显差别，这可能是两者的pH差异较小而血液又是较强的缓冲体系，因而保养液pH的少量变化对ATP的保存效果影响不大。
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3.3 CPDA保养液对ATP的保存效果虽然明显优于ACD和CPD保养液，但并未能有效地延长红细胞2,3-DPG的保存时间[3]。如何在ATP保存效果较好的前提下，通过改善CPDA保养液以延长细胞2,3-DPG的保存期，尚有待进一步研究。
参考文献
[1] 刘庆莹，陈文为.2,3-二磷酸甘油代谢和生理功能.生理学进展，1983；14(1)：78
[2] 杨国荣.血液保存液的研究进展.日本医学介绍，1992；13(1)：43
[3] 毕蕾.血液保存期间红细胞的一些变化.国外医学(输血及血液学分册)，1986；9(3)：166
(1998-09-22收稿), 百拇医药