BACTEC法痰液抗酸菌培养前处理方法的探讨
作者：唐柳生
单位：广西壮族自治区龙潭医院 柳州545005
关键词：
广西预防医学000523
针对国内目前使用BACTECTB460系统检测抗酸杆菌，其培养 前处理方法尚未统一的情况，为了寻找痰液培养抗酸菌检出 率高、污染率低的前处理方法，本文为此进行了如下探讨。
1材料与方法
1.1标本来源为我院1999年5月至9月临床检痰液，患者已经 X线诊断为肺结核。
1.2试剂(1)12B培养基(美国BECTONDickinson公司提供)。(2)4%N aOH(自配)。(3)半胱氨酸(美国BECTONDickinson公司提供)。(4)2.94% 枸橼酸钠(自配)。(5)pH6.8的磷酸盐缓冲液(自配，主要成分为KH2 PO4及Na2HPO4。(6)PANTASuplemental(抑菌剂，内含多粘菌素、两性霉 素、甲氧卞氨嘧啶、萘咪唑青霉素，由美国BECTONDickinson公司 提供)。
, http://www.100md.com
1.3仪器BACTECTB460系统(美国BECTONDickinson公司出品，用于 检测抗酸杆菌生长指数)。
1.4前处理方法(1)取4%NaOH1ml加0.1g半胱氨酸，取1ml痰与 之混合5分钟后再加入1ml2.94%枸橼酸钠混合，振荡，静置10分 钟。(2)取事先配好的4%NaOH-NALC消化液(配法：4%NaOH1ml,半胱 氨酸0.1g,2.94%枸橼酸钠1ml)1ml,加等量痰液混合振荡后静置20分 钟。
1.5接种方法将消化后痰液倾入离心管，加入50mlpH6.8缓冲 液混匀，10000转/分离心10分钟，倒去上清液，再加入PH6.8缓冲 液1ml与离心管底部沉渣混匀，取0.5ml接种于12B培养基内，置37 ℃恒温箱培养，每天用BACTECTB460系统检测，GI值大于10为阳性 ,GI值大于100后进行涂片镜检并鉴定。
表1 两种前处理方法的检测结果比较
, 百拇医药
方法
检测数
阳性数
阳性率(%)
污染数
污染率(%)
(1)
245
80
32.65
11
4.5
(2)
, http://www.100md.com
330
79
23.9
35
10.6
2结果与讨论
两种前处理方法检测痰液的结果见表1，可见方法1的阳 性率明显高于方法2(P<0.05),而污染率又显著低于方法2(P<0.01)。 这可能是方法1中有5分钟4%NaOH消化可将痰液所含的大部分杂 菌杀死，而后加入2.94%枸橼酸钠再消化10分钟，恰好能将痰内 杂菌杀死，又不影响抗酸杆菌的生长能力。方法2直接用2%Na OH消化痰液，大大减弱NaOH的杀菌能力，对于含杂菌量很大的痰 液很难在一定时间内完全杀菌，因此，很容易造成培养基的 污染，以致于影响培养阳性率。叶惠芬等[1]报道402份标本培养 ，使用4%NaOH直接消化痰液20分钟前处理，污染率可控制在4% 以下，但其阳性率仅为17.9%，明显低于本文的阳性率。吴龙 章报道[2]用4%NaOH消化痰液10分钟作前处理，结果阳性率为34.0 9%，与本文报道基本相符，但其污染率为6.68%，略高于本文 报道。方法1具有独特的优越性，它能克服湿热、发霉季节时 霉菌污染，这是酸处理很难做到的(霉菌在酸性时易繁殖)，故 方法1具有一定的实用价值，值得广大医务人员验证或推广。
参考文献
1，叶惠芬，陈蕃.用BACTEC460TB系统快速检测分枝杆菌.上海医学检验杂志，1993，8(1)：29-31
2，吴龙章.BACTEC系统在结核快速培养中的应用.中华结核和呼吸系疾杂志，1991，15(4)：245-246
1999-11-25收稿, 百拇医药
单位：广西壮族自治区龙潭医院 柳州545005
关键词：
广西预防医学000523
针对国内目前使用BACTECTB460系统检测抗酸杆菌，其培养 前处理方法尚未统一的情况，为了寻找痰液培养抗酸菌检出 率高、污染率低的前处理方法，本文为此进行了如下探讨。
1材料与方法
1.1标本来源为我院1999年5月至9月临床检痰液，患者已经 X线诊断为肺结核。
1.2试剂(1)12B培养基(美国BECTONDickinson公司提供)。(2)4%N aOH(自配)。(3)半胱氨酸(美国BECTONDickinson公司提供)。(4)2.94% 枸橼酸钠(自配)。(5)pH6.8的磷酸盐缓冲液(自配，主要成分为KH2 PO4及Na2HPO4。(6)PANTASuplemental(抑菌剂，内含多粘菌素、两性霉 素、甲氧卞氨嘧啶、萘咪唑青霉素，由美国BECTONDickinson公司 提供)。
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1.3仪器BACTECTB460系统(美国BECTONDickinson公司出品，用于 检测抗酸杆菌生长指数)。
1.4前处理方法(1)取4%NaOH1ml加0.1g半胱氨酸，取1ml痰与 之混合5分钟后再加入1ml2.94%枸橼酸钠混合，振荡，静置10分 钟。(2)取事先配好的4%NaOH-NALC消化液(配法：4%NaOH1ml,半胱 氨酸0.1g,2.94%枸橼酸钠1ml)1ml,加等量痰液混合振荡后静置20分 钟。
1.5接种方法将消化后痰液倾入离心管，加入50mlpH6.8缓冲 液混匀，10000转/分离心10分钟，倒去上清液，再加入PH6.8缓冲 液1ml与离心管底部沉渣混匀，取0.5ml接种于12B培养基内，置37 ℃恒温箱培养，每天用BACTECTB460系统检测，GI值大于10为阳性 ,GI值大于100后进行涂片镜检并鉴定。
表1 两种前处理方法的检测结果比较
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方法
检测数
阳性数
阳性率(%)
污染数
污染率(%)
(1)
245
80
32.65
11
4.5
(2)
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330
79
23.9
35
10.6
2结果与讨论
两种前处理方法检测痰液的结果见表1，可见方法1的阳 性率明显高于方法2(P<0.05),而污染率又显著低于方法2(P<0.01)。 这可能是方法1中有5分钟4%NaOH消化可将痰液所含的大部分杂 菌杀死，而后加入2.94%枸橼酸钠再消化10分钟，恰好能将痰内 杂菌杀死，又不影响抗酸杆菌的生长能力。方法2直接用2%Na OH消化痰液，大大减弱NaOH的杀菌能力，对于含杂菌量很大的痰 液很难在一定时间内完全杀菌，因此，很容易造成培养基的 污染，以致于影响培养阳性率。叶惠芬等[1]报道402份标本培养 ，使用4%NaOH直接消化痰液20分钟前处理，污染率可控制在4% 以下，但其阳性率仅为17.9%，明显低于本文的阳性率。吴龙 章报道[2]用4%NaOH消化痰液10分钟作前处理，结果阳性率为34.0 9%，与本文报道基本相符，但其污染率为6.68%，略高于本文 报道。方法1具有独特的优越性，它能克服湿热、发霉季节时 霉菌污染，这是酸处理很难做到的(霉菌在酸性时易繁殖)，故 方法1具有一定的实用价值，值得广大医务人员验证或推广。
参考文献
1，叶惠芬，陈蕃.用BACTEC460TB系统快速检测分枝杆菌.上海医学检验杂志，1993，8(1)：29-31
2，吴龙章.BACTEC系统在结核快速培养中的应用.中华结核和呼吸系疾杂志，1991，15(4)：245-246
1999-11-25收稿, 百拇医药