中国树鼩下丘脑视上核和室旁核催产素能神经元的形态和神经纤维的分布
作者：刘能保 张敏海 刘少纯 李宏莲 戴晓莉 R Bock 周顺长
单位：
关键词：神经元；催产素；视上核；室旁核；下丘脑；树鼩；免疫组织化学
同济医科大学学报000114 摘要 为了证实中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内催产 素(oxytocin, OT)能神 经元的形态和神经纤维在神经垂体内的分布，采用ABC免疫组织化学技术进行了观察。结果发现，在各核团内， OT能胞体均散在分布，大多呈圆形或卵圆形，少数呈梭形或星形。核圆形，大多偏心位。免疫反应产物弥散分布于胞浆内。分布在正中隆起(ME)和垂体神经部内的OT能神经纤维直径微细，数目少，免疫反应性弱，但有数目较多，体积较大且大小不等的OT免疫反应凝聚体和赫令体。提示中国树鼩OT能的与加压素(VP)能的胞体及神经纤维免疫反应性存在差异。
中图法分类号 R322.8， Q575.31， R 392.31
, 百拇医药
Morphology of the OT-ergic Neurons in the SON a nd the PVN of the
Hypothalamus of the Tupaia Belangeri Chinensis and Distribut ion
of Their Nerve Fibres
Liu Nengbao Zhang Minhai Liu Shaochun et al
(Departmentof Histology and Embryology, School of Basi c Medical Sciences,Tongji Medical University, Wuhan430030)
Abstract Using ABC-immunohistochemical technique,the morpholo gy of the oxytocin (OT)-ergic neurons in the supraoptic (SON) and the paraventr icular nuclei (PVN) of thehypothalamus in Tupaia belangeri chinensis and distri bution of their OT-ergic fibres in neurohypophysis were demonstrated.The resul ts were as follows: The OT-ergic perikarya were scattered in the SON and PVN. T he great majority of themwere rounded or ovoid, and the minority fusiform or st arry in contour. The nucleus of the OT-ergic neuron were sphericaland the majo rity eccentrically located. The immunoreactive products were diffusely distribut ed in the cytoplasm. TheOT-ergic nerve fibres distributed in the median eminen ce (ME) and the pars nervosa were thin in diameter and few innumber. The OT-im munoreactivities were weak in intensity. But there were OT-immunoreactive concr etions and Herringbodies which were more in number and greater in volume in the ME and the pars nervosa, respectively. These resultssuggested that there were differences between OT-ergic perikaya and vasopressin (VP)-ergic one in the immunoreactivities and distribution of the nerve fibres.
, 百拇医药
Keywords neuron; oxytocin; supraoptic nucleus; parav entricularnucleus; hypothalamus; Tupaia; immunohistochemistry
我们曾采用过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物(PAP)法与碱性磷酸酶标A蛋白复合物法结合的双重免疫染色技术和PAP-DAB/镍(Ni)加强技术，分别研究了中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内加压素(v asopressin,VP)能和催产素(OT)能神经元的比较分布[1]、形态计量学分析[2]和VP能神经元的形态及神经纤维在神经垂体内的分布[3]。本研究旨在进一步研究中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内OT能神经元的形态和神经纤维在神经垂体内的分布。
1 材料与方法
1.1 取材与处理
, http://www.100md.com
取昆明动物研究所提供的6只(体重130～180 g，雌雄兼有)成年中国树鼩[1]。动物经戊巴比妥钠(70 mg/kg)腹腔注射麻醉后，开胸经左心室于主动脉推 注100 mlBouin固定液，取出连带脑垂体的全脑于上述固定液内4 ℃下继续固 定3d，接着于苦味酸-福尔马林溶液内37 ℃下再固定7 d，然后，以异丙醇脱水，苯甲酸甲酯透明，石蜡包埋，AO切片机冠状连续切片，片厚10 μm，常规 载片贴片。
1.2 免疫组织化学方法
自每个动物视上核主部、视上核交叉后部、室旁核和神经垂体所在各区段分别依次选取5～8张切片，采用免疫组织化学ABC-DAB/Ni加强技术进行OT能神经元和神经纤维免疫组织化学显色。所用第一抗血清为兔抗OT血清(简 称抗-OT；Batch 1288,UCB-Bioproducts SA)。主要步骤：切片常规脱蜡到 水后滴加10 ml/L正常羊血清孵育1h，以封闭组织内非特异性基团，接着滴加 抗-OT(1∶1000)置4 ℃冰箱内孵育48h左右，再先后滴加生物素化羊抗兔IgG(1∶50, SA2002,Boster)和链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC; 1∶50; SA2002, Boster)室温下各孵育1h，然后用DAB-H2O2-Ni加强液显色，最后切片经常 规脱水、透明、树胶封片。
, http://www.100md.com
树胶封片后的免疫组织化学法显色的组织切片在Nikon照相显微镜下观察 并显微照相。
2 结果
2.1 OT免疫反应性
经ABC-DAB/Ni加强技术免疫组织化学染色的免疫反应阳性OT能神经元的核周体和神经纤维呈深灰蓝色，细胞核不显色。但本实验尽管采用了较之PAP技术敏感的SABC技术，其免疫反应性仍然比经PAP技术处理的VP能神经元的免疫反应性[3]弱。
2.2 OT能神经元胞体的形态
在视上核主部(图1)OT能神经元胞体散在分布，大多呈圆形或卵圆形，少数呈梭形，可见少数胞体上有突起。细胞核呈圆形，免疫反应阴性，多位于胞体的一侧或一端，少数位于中央，许多胞体未切到细胞核。OT免疫反应产物呈小块状或细颗粒状，弥散分布在胞浆内。胞体间可见少数免疫反应点状结构，有的靠近或附着于胞体的表面；在视上核交叉后部(图2)，OT能神经元胞体分布更稀疏，大多数胞体呈圆形或卵圆形，可见少数胞体呈星形，部分胞体上有突起，个别胞体发出极细的轴突样突起，呈串珠状。细胞核呈圆形，无免疫反应着色，位于胞体的一侧或一端，少数胞体未切到细胞核。免疫反应产物呈粗、细颗粒状弥散分布在胞浆内。胞体间免疫反应点状结构极少见，但偶见此点状结构似附着在非免疫反应细胞体的表面；在室旁核(图3)，OT能胞体亦散在分布，大多呈圆形或卵圆形，少数呈梭形或星形，部分胞体上可见突起。细胞核呈圆形不着色，多位于胞体的一侧或一端，也见部分胞体未切到细胞核。免疫反应产物亦呈小块状和细颗粒状充填于胞浆内。胞体间可见少数免疫反应点状结构和许多呈节段的突起样结构。
, 百拇医药
2.3 OT能神经纤维在神经垂体内的分布
OT能神经纤维直径极细，免疫反应着色较弱，也可见极少数较粗，着色较深的纤维，但可能为多根细纤维构成的纤维束。在ME(图4)，OT能纤维分布在内带部分，外带纤维极少。这些纤维呈现出自两侧的视上核交叉后部背内侧向中间的ME汇集的分布模式。在这些纤维间散在分布许多体积大小不一的免疫反应产物聚集体和一些免疫反应点状结构。在垂体神经部(图5)，OT能纤维的免疫反应着色更弱，可见大小不等的赫令体，其内有的结构致密，着色深，有的结构较疏松，着色较浅。与VP免疫反应神经纤维的(图6)相比，ME和垂体神经部内的OT免疫反应纤维的着色要浅得多。
3 讨论
与我们以前研究[3]所显示的中国树鼩下丘脑-神经垂体系统中VP能神经元胞体和神经纤维的免疫反应性相比，OT能神经元胞体和神经纤维的免疫反应性要弱得多，尽管本研究采用了较之PAP技术敏感一些的ABC免疫组织化学技术，而且采用了比通常ABC复合物更敏感的SABC复合物试剂。这种情形与大鼠的[4]不太一致，这可能主要是由于因某些原因所致的神经元胞体和突起内OT的含量较低的缘故。
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无论在视上核主部、视上核交叉后部或室旁核，星形OT能胞体很少，这与人的[5]不一致，这或许是因免疫反应性弱，有些突起未被显示，因此，可能部分圆形胞体就是突起未能显示的星形胞体。在ME和垂体神经部，OT能神经纤维的免疫反应着色较之VP能纤维的弱得多的另一个原因可能与豚鼠的相似，而与大鼠的则不同，即OT能纤维的数量比VP的明显地少，特别是在垂体神经部。有人报道[6]，在豚鼠90 %为VP能纤维，而OT能纤维只占10 %。而在大鼠，VP能和OT能纤维数目几乎相等[7]。然而浓聚有OT免疫反应产物的凝聚体和赫令体的数目之多和体积之大却又较之VP的突出得多，这与大鼠的情形[7]正好相反，其原因尚不清楚。
图1 中国树鼩下丘脑视上核主部OT能神经元。OC：视交叉 ×200
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图2 中国树鼩下丘脑视上核交叉后部OT能神经元。OT：视束 ×200
图3 中国树鼩下丘脑室旁核OT能神经元。3V：第Ⅲ脑室 ×200
图4 中国树鼩下丘 脑MEOT能神经纤维分布。→：OT-免疫反应 产物聚集体，3V：第Ⅲ
脑室 ×100
图5 中国树鼩垂体神经部(HN)内OT能神经纤维的分布。→：OT-免疫反应Herring体
×100
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图6 中国树鼩下丘脑与图4相邻切片的ME内VP能神经纤维的分布。3V：第Ⅲ脑室 ×100
德国大众汽车公司基金会资助项目(China-Programm-Az. 1/63663)
刘能保，男，1943年生，教授
刘能保(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
张敏海(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
刘少纯(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
李宏莲(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
戴晓莉(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
, 百拇医药
R Bock(德国萨尔州大学解剖学研究所， 洪堡/萨尔 66421)
周顺长(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
参 考 文 献
1，刘能保，张敏海，刘少纯等. 中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内加压素和催产素能神经元的比较分布. 中国组织化学与细胞化学杂志，1993，2(3)：202
2，刘能保，张敏海，刘少纯等.中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内加压素和催产素能神经元的形态计量学分析. 中国组织化学与细胞化学杂志，1995，4(1)：64
3，刘能保，张敏海，刘少纯等.中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内加压素能神经元的形态和神经纤维的分布. 神经解剖学杂志，1997，13(4)：379
, http://www.100md.com
4，Hou-Yu A, Lamme A T, Zimmerman E A et al. Comparativedistribu tion of vasopressin and oxytocin neurons in the rat brain using a double-label proc edure. Neuroendocrinology,1986, 44: 235
5，Caverson M M, Ciriello J, Calaresu P R et al. Distribution and morp hologyof vasopressin-, neurophysin II-, and oxytocin-immunoreactive cell bo dies in the forebrain of the cat. J Comp Neurol,1987, 259: 211
6，欧可群，保天然，吴良芳. 下丘脑与脑垂体. 见: 成令忠主编. 组织学.第2 版. 北京：人民卫生出版社，1993. 718～762
7，Vandesande F, Dierickx K. Identificationof the vasopressin producin g and of the oxytocin producing neurons in the hypothalamic magnocellular neuros ecretory systemof the rat. Cell Tiss Res, 1975, 164:153
(1998-11-03 收稿), http://www.100md.com
单位：
关键词：神经元；催产素；视上核；室旁核；下丘脑；树鼩；免疫组织化学
同济医科大学学报000114 摘要 为了证实中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内催产 素(oxytocin, OT)能神 经元的形态和神经纤维在神经垂体内的分布，采用ABC免疫组织化学技术进行了观察。结果发现，在各核团内， OT能胞体均散在分布，大多呈圆形或卵圆形，少数呈梭形或星形。核圆形，大多偏心位。免疫反应产物弥散分布于胞浆内。分布在正中隆起(ME)和垂体神经部内的OT能神经纤维直径微细，数目少，免疫反应性弱，但有数目较多，体积较大且大小不等的OT免疫反应凝聚体和赫令体。提示中国树鼩OT能的与加压素(VP)能的胞体及神经纤维免疫反应性存在差异。
中图法分类号 R322.8， Q575.31， R 392.31
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Morphology of the OT-ergic Neurons in the SON a nd the PVN of the
Hypothalamus of the Tupaia Belangeri Chinensis and Distribut ion
of Their Nerve Fibres
Liu Nengbao Zhang Minhai Liu Shaochun et al
(Departmentof Histology and Embryology, School of Basi c Medical Sciences,Tongji Medical University, Wuhan430030)
Abstract Using ABC-immunohistochemical technique,the morpholo gy of the oxytocin (OT)-ergic neurons in the supraoptic (SON) and the paraventr icular nuclei (PVN) of thehypothalamus in Tupaia belangeri chinensis and distri bution of their OT-ergic fibres in neurohypophysis were demonstrated.The resul ts were as follows: The OT-ergic perikarya were scattered in the SON and PVN. T he great majority of themwere rounded or ovoid, and the minority fusiform or st arry in contour. The nucleus of the OT-ergic neuron were sphericaland the majo rity eccentrically located. The immunoreactive products were diffusely distribut ed in the cytoplasm. TheOT-ergic nerve fibres distributed in the median eminen ce (ME) and the pars nervosa were thin in diameter and few innumber. The OT-im munoreactivities were weak in intensity. But there were OT-immunoreactive concr etions and Herringbodies which were more in number and greater in volume in the ME and the pars nervosa, respectively. These resultssuggested that there were differences between OT-ergic perikaya and vasopressin (VP)-ergic one in the immunoreactivities and distribution of the nerve fibres.
, 百拇医药
Keywords neuron; oxytocin; supraoptic nucleus; parav entricularnucleus; hypothalamus; Tupaia; immunohistochemistry
我们曾采用过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物(PAP)法与碱性磷酸酶标A蛋白复合物法结合的双重免疫染色技术和PAP-DAB/镍(Ni)加强技术，分别研究了中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内加压素(v asopressin,VP)能和催产素(OT)能神经元的比较分布[1]、形态计量学分析[2]和VP能神经元的形态及神经纤维在神经垂体内的分布[3]。本研究旨在进一步研究中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内OT能神经元的形态和神经纤维在神经垂体内的分布。
1 材料与方法
1.1 取材与处理
, http://www.100md.com
取昆明动物研究所提供的6只(体重130～180 g，雌雄兼有)成年中国树鼩[1]。动物经戊巴比妥钠(70 mg/kg)腹腔注射麻醉后，开胸经左心室于主动脉推 注100 mlBouin固定液，取出连带脑垂体的全脑于上述固定液内4 ℃下继续固 定3d，接着于苦味酸-福尔马林溶液内37 ℃下再固定7 d，然后，以异丙醇脱水，苯甲酸甲酯透明，石蜡包埋，AO切片机冠状连续切片，片厚10 μm，常规 载片贴片。
1.2 免疫组织化学方法
自每个动物视上核主部、视上核交叉后部、室旁核和神经垂体所在各区段分别依次选取5～8张切片，采用免疫组织化学ABC-DAB/Ni加强技术进行OT能神经元和神经纤维免疫组织化学显色。所用第一抗血清为兔抗OT血清(简 称抗-OT；Batch 1288,UCB-Bioproducts SA)。主要步骤：切片常规脱蜡到 水后滴加10 ml/L正常羊血清孵育1h，以封闭组织内非特异性基团，接着滴加 抗-OT(1∶1000)置4 ℃冰箱内孵育48h左右，再先后滴加生物素化羊抗兔IgG(1∶50, SA2002,Boster)和链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC; 1∶50; SA2002, Boster)室温下各孵育1h，然后用DAB-H2O2-Ni加强液显色，最后切片经常 规脱水、透明、树胶封片。
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树胶封片后的免疫组织化学法显色的组织切片在Nikon照相显微镜下观察 并显微照相。
2 结果
2.1 OT免疫反应性
经ABC-DAB/Ni加强技术免疫组织化学染色的免疫反应阳性OT能神经元的核周体和神经纤维呈深灰蓝色，细胞核不显色。但本实验尽管采用了较之PAP技术敏感的SABC技术，其免疫反应性仍然比经PAP技术处理的VP能神经元的免疫反应性[3]弱。
2.2 OT能神经元胞体的形态
在视上核主部(图1)OT能神经元胞体散在分布，大多呈圆形或卵圆形，少数呈梭形，可见少数胞体上有突起。细胞核呈圆形，免疫反应阴性，多位于胞体的一侧或一端，少数位于中央，许多胞体未切到细胞核。OT免疫反应产物呈小块状或细颗粒状，弥散分布在胞浆内。胞体间可见少数免疫反应点状结构，有的靠近或附着于胞体的表面；在视上核交叉后部(图2)，OT能神经元胞体分布更稀疏，大多数胞体呈圆形或卵圆形，可见少数胞体呈星形，部分胞体上有突起，个别胞体发出极细的轴突样突起，呈串珠状。细胞核呈圆形，无免疫反应着色，位于胞体的一侧或一端，少数胞体未切到细胞核。免疫反应产物呈粗、细颗粒状弥散分布在胞浆内。胞体间免疫反应点状结构极少见，但偶见此点状结构似附着在非免疫反应细胞体的表面；在室旁核(图3)，OT能胞体亦散在分布，大多呈圆形或卵圆形，少数呈梭形或星形，部分胞体上可见突起。细胞核呈圆形不着色，多位于胞体的一侧或一端，也见部分胞体未切到细胞核。免疫反应产物亦呈小块状和细颗粒状充填于胞浆内。胞体间可见少数免疫反应点状结构和许多呈节段的突起样结构。
, 百拇医药
2.3 OT能神经纤维在神经垂体内的分布
OT能神经纤维直径极细，免疫反应着色较弱，也可见极少数较粗，着色较深的纤维，但可能为多根细纤维构成的纤维束。在ME(图4)，OT能纤维分布在内带部分，外带纤维极少。这些纤维呈现出自两侧的视上核交叉后部背内侧向中间的ME汇集的分布模式。在这些纤维间散在分布许多体积大小不一的免疫反应产物聚集体和一些免疫反应点状结构。在垂体神经部(图5)，OT能纤维的免疫反应着色更弱，可见大小不等的赫令体，其内有的结构致密，着色深，有的结构较疏松，着色较浅。与VP免疫反应神经纤维的(图6)相比，ME和垂体神经部内的OT免疫反应纤维的着色要浅得多。
3 讨论
与我们以前研究[3]所显示的中国树鼩下丘脑-神经垂体系统中VP能神经元胞体和神经纤维的免疫反应性相比，OT能神经元胞体和神经纤维的免疫反应性要弱得多，尽管本研究采用了较之PAP技术敏感一些的ABC免疫组织化学技术，而且采用了比通常ABC复合物更敏感的SABC复合物试剂。这种情形与大鼠的[4]不太一致，这可能主要是由于因某些原因所致的神经元胞体和突起内OT的含量较低的缘故。
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无论在视上核主部、视上核交叉后部或室旁核，星形OT能胞体很少，这与人的[5]不一致，这或许是因免疫反应性弱，有些突起未被显示，因此，可能部分圆形胞体就是突起未能显示的星形胞体。在ME和垂体神经部，OT能神经纤维的免疫反应着色较之VP能纤维的弱得多的另一个原因可能与豚鼠的相似，而与大鼠的则不同，即OT能纤维的数量比VP的明显地少，特别是在垂体神经部。有人报道[6]，在豚鼠90 %为VP能纤维，而OT能纤维只占10 %。而在大鼠，VP能和OT能纤维数目几乎相等[7]。然而浓聚有OT免疫反应产物的凝聚体和赫令体的数目之多和体积之大却又较之VP的突出得多，这与大鼠的情形[7]正好相反，其原因尚不清楚。
图1 中国树鼩下丘脑视上核主部OT能神经元。OC：视交叉 ×200
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图2 中国树鼩下丘脑视上核交叉后部OT能神经元。OT：视束 ×200
图3 中国树鼩下丘脑室旁核OT能神经元。3V：第Ⅲ脑室 ×200
图4 中国树鼩下丘 脑MEOT能神经纤维分布。→：OT-免疫反应 产物聚集体，3V：第Ⅲ
脑室 ×100
图5 中国树鼩垂体神经部(HN)内OT能神经纤维的分布。→：OT-免疫反应Herring体
×100
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图6 中国树鼩下丘脑与图4相邻切片的ME内VP能神经纤维的分布。3V：第Ⅲ脑室 ×100
德国大众汽车公司基金会资助项目(China-Programm-Az. 1/63663)
刘能保，男，1943年生，教授
刘能保(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
张敏海(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
刘少纯(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
李宏莲(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
戴晓莉(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
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R Bock(德国萨尔州大学解剖学研究所， 洪堡/萨尔 66421)
周顺长(同济医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，武汉 430030)
参 考 文 献
1，刘能保，张敏海，刘少纯等. 中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内加压素和催产素能神经元的比较分布. 中国组织化学与细胞化学杂志，1993，2(3)：202
2，刘能保，张敏海，刘少纯等.中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内加压素和催产素能神经元的形态计量学分析. 中国组织化学与细胞化学杂志，1995，4(1)：64
3，刘能保，张敏海，刘少纯等.中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内加压素能神经元的形态和神经纤维的分布. 神经解剖学杂志，1997，13(4)：379
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4，Hou-Yu A, Lamme A T, Zimmerman E A et al. Comparativedistribu tion of vasopressin and oxytocin neurons in the rat brain using a double-label proc edure. Neuroendocrinology,1986, 44: 235
5，Caverson M M, Ciriello J, Calaresu P R et al. Distribution and morp hologyof vasopressin-, neurophysin II-, and oxytocin-immunoreactive cell bo dies in the forebrain of the cat. J Comp Neurol,1987, 259: 211
6，欧可群，保天然，吴良芳. 下丘脑与脑垂体. 见: 成令忠主编. 组织学.第2 版. 北京：人民卫生出版社，1993. 718～762
7，Vandesande F, Dierickx K. Identificationof the vasopressin producin g and of the oxytocin producing neurons in the hypothalamic magnocellular neuros ecretory systemof the rat. Cell Tiss Res, 1975, 164:153
(1998-11-03 收稿), http://www.100md.com