血脂康对家兔血管平滑肌细胞增殖迁移的抑制作用
作者：曾定尹 于波 郑晓伟 齐国先 王晓静 陈燕 宋继谒 石玉秀
单位：110001 沈阳，中国医科大学第一临床学院心内科(曾定尹、于波、郑晓伟、齐国先、王晓静)，检验科(陈燕)；中国医科大学基础医学院(宋继谒、石玉秀)
关键词：
中华内科杂志980614 血脂康的主要成分系羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，并含有多种必需氨基酸和不饱和脂肪酸。本研究旨在观察血脂康对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖迁移的影响。
一、材料与方法
1.动物试验：健康纯种新西兰白兔30只，体重2.57±0.17 kg，随机分层分组法分为三组：对照组(普通饲料)、高脂组(普通饲料+1.5%胆固醇)、治疗组(普通饲料+1.5%胆固醇+血脂康0.8 g*kg-1*d-1)。单笼饲养，每日每只进食150 g饲料，平行试验12周。实验前及后4、8、12周清晨空腹从耳中央动脉采血测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量，由Friedewald公式计算血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。实验12周末放血后处死动物，取主动脉弓标本，2.5%戊二醛固定后制作透视电镜标本。
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2.体外实验：取家兔胸主动脉SMC行贴块法原代细胞培养，在5% CO2浓度下用15%小牛血清RPMI 1640培养液静置培养3周，用0.1% EDTA和0.25%胰酶消化液消化后传代，取生态良好的3～6代SMC试验。将SMC消化后制成2×105/ml细胞悬液，加入24孔板中孵育24小时后换0.5%小牛血清和不同浓度血脂康的RPMI 1640培养液孵育24小时，终止反应前6小时每孔加入0.5 μg/ml的3H-TdR，用细胞刮将细胞刮下，并经微孔滤膜收集细胞、用PBS反复冲洗滤膜并分瓶置70℃烤箱中供烤，用Beckman 6500液闪仪行3H-TdR掺入率测定。将RPMI 1640孵育24小时的细胞悬液，再用15%小牛血清和不同浓度血脂康孵育72小时，用血细胞计数板行VSMC计数。
附表 不同浓度血脂康对体外培养血管平滑肌细胞增殖的影响
浓度(μg/ml)
, 百拇医药
0
25
50
100
200
72小时后计数×104
51.6±10.5
35.3±8.9
23.5±8.7
14.1±5.1
9.2±3.6
3H-TdR掺入率(cpm)
, 百拇医药
657.42±160.18
327.67±71.18
141.92±32.74
114.92±42.93
90.92±13.97
注：随血脂康浓度的增加，血管平滑肌细胞计数逐渐减少，3H-TdR掺入率逐渐下降(P< 0.05) 二、结果
1.血脂测定结果：实验前各组间无明显差异；实验后高脂组、治疗组血清TC、TG、LDL-C比对照组明显升高(P<0.05)，但治疗组明显低于高脂组(P<0.05)；实验后高脂组、治疗组血清HDL-C与对照组相比差异无显著性(P>0.05)，但高脂组有明显下降趋势。
, 百拇医药
2.不同浓度血脂康对体外培养VSMC增殖的影响(见附表)。
3.透射电镜观察：对照组内弹力板完整平直厚薄均匀，中膜SMC为收缩表型，与弹力板相间平行排列；高脂组内皮下间隙显著扩张，内弹力板厚薄不均，断裂甚至呈虫蚀状，可见中膜SMC胞体突起通过破损的内弹力板伸入内皮下间隙，SMC以合成表型为主，内质网增多扩张，线粒体增生肿胀、嵴减少或消失甚至空泡化，胞浆内出现数量和大小不等的脂滴，部分胞质密度降低或浓缩，肌丝密体模糊不清甚至消失；治疗组上述改变轻微甚至接近正常。
讨论 本实验证实血脂康不仅是一种高效的调脂药物，而且具有显著的抑制血管平滑肌细胞增殖迁移的作用，这可能是其预防动脉粥样硬化形成及血管成形术和血管内膜切除术后再狭窄发生发展的重要机制之一[1]。HMG-CoA还原酶抑制剂是胆固醇合成的限速酶，甲羟戊酸是HMG-CoA还原酶催化反应的产物，甲羟戊酸代谢是DNA合成和细胞增生所必需的[2]。血脂康可能通过抑制甲羟戊酸代谢直接抑制SMC的增殖迁移及表型转换，或通过调整脂质代谢、改善血管内皮细胞功能，降低血浆ET-1、血栓素A2含量，提高血浆前列腺环素(PGI2)、NO水平，减少血小板源性生长因子的释放，从而间接抑制VSMC的增殖迁移。
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参考文献
1 Ip JH, Fuster V, Badimon L. Syndromes of accelerated atherosclerosis: role of vascular injury and smooth muscle cell proliferation. J Am Coll Cardiol, 1990,15：1667-1687.
2 Gorsini A. Relationship between mevalonate pathway and arterial myocyte proliferation: in vitro studied with inhibition of HMG-CoA reductase. Atherosclerosis, 1993,101：117-125.
(收稿：1997-12-03 修回：1998-02-18), http://www.100md.com
单位：110001 沈阳，中国医科大学第一临床学院心内科(曾定尹、于波、郑晓伟、齐国先、王晓静)，检验科(陈燕)；中国医科大学基础医学院(宋继谒、石玉秀)
关键词：
中华内科杂志980614 血脂康的主要成分系羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，并含有多种必需氨基酸和不饱和脂肪酸。本研究旨在观察血脂康对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖迁移的影响。
一、材料与方法
1.动物试验：健康纯种新西兰白兔30只，体重2.57±0.17 kg，随机分层分组法分为三组：对照组(普通饲料)、高脂组(普通饲料+1.5%胆固醇)、治疗组(普通饲料+1.5%胆固醇+血脂康0.8 g*kg-1*d-1)。单笼饲养，每日每只进食150 g饲料，平行试验12周。实验前及后4、8、12周清晨空腹从耳中央动脉采血测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量，由Friedewald公式计算血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。实验12周末放血后处死动物，取主动脉弓标本，2.5%戊二醛固定后制作透视电镜标本。
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2.体外实验：取家兔胸主动脉SMC行贴块法原代细胞培养，在5% CO2浓度下用15%小牛血清RPMI 1640培养液静置培养3周，用0.1% EDTA和0.25%胰酶消化液消化后传代，取生态良好的3～6代SMC试验。将SMC消化后制成2×105/ml细胞悬液，加入24孔板中孵育24小时后换0.5%小牛血清和不同浓度血脂康的RPMI 1640培养液孵育24小时，终止反应前6小时每孔加入0.5 μg/ml的3H-TdR，用细胞刮将细胞刮下，并经微孔滤膜收集细胞、用PBS反复冲洗滤膜并分瓶置70℃烤箱中供烤，用Beckman 6500液闪仪行3H-TdR掺入率测定。将RPMI 1640孵育24小时的细胞悬液，再用15%小牛血清和不同浓度血脂康孵育72小时，用血细胞计数板行VSMC计数。
附表 不同浓度血脂康对体外培养血管平滑肌细胞增殖的影响
浓度(μg/ml)
, 百拇医药
0
25
50
100
200
72小时后计数×104
51.6±10.5
35.3±8.9
23.5±8.7
14.1±5.1
9.2±3.6
3H-TdR掺入率(cpm)
, 百拇医药
657.42±160.18
327.67±71.18
141.92±32.74
114.92±42.93
90.92±13.97
注：随血脂康浓度的增加，血管平滑肌细胞计数逐渐减少，3H-TdR掺入率逐渐下降(P< 0.05) 二、结果
1.血脂测定结果：实验前各组间无明显差异；实验后高脂组、治疗组血清TC、TG、LDL-C比对照组明显升高(P<0.05)，但治疗组明显低于高脂组(P<0.05)；实验后高脂组、治疗组血清HDL-C与对照组相比差异无显著性(P>0.05)，但高脂组有明显下降趋势。
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2.不同浓度血脂康对体外培养VSMC增殖的影响(见附表)。
3.透射电镜观察：对照组内弹力板完整平直厚薄均匀，中膜SMC为收缩表型，与弹力板相间平行排列；高脂组内皮下间隙显著扩张，内弹力板厚薄不均，断裂甚至呈虫蚀状，可见中膜SMC胞体突起通过破损的内弹力板伸入内皮下间隙，SMC以合成表型为主，内质网增多扩张，线粒体增生肿胀、嵴减少或消失甚至空泡化，胞浆内出现数量和大小不等的脂滴，部分胞质密度降低或浓缩，肌丝密体模糊不清甚至消失；治疗组上述改变轻微甚至接近正常。
讨论 本实验证实血脂康不仅是一种高效的调脂药物，而且具有显著的抑制血管平滑肌细胞增殖迁移的作用，这可能是其预防动脉粥样硬化形成及血管成形术和血管内膜切除术后再狭窄发生发展的重要机制之一[1]。HMG-CoA还原酶抑制剂是胆固醇合成的限速酶，甲羟戊酸是HMG-CoA还原酶催化反应的产物，甲羟戊酸代谢是DNA合成和细胞增生所必需的[2]。血脂康可能通过抑制甲羟戊酸代谢直接抑制SMC的增殖迁移及表型转换，或通过调整脂质代谢、改善血管内皮细胞功能，降低血浆ET-1、血栓素A2含量，提高血浆前列腺环素(PGI2)、NO水平，减少血小板源性生长因子的释放，从而间接抑制VSMC的增殖迁移。
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参考文献
1 Ip JH, Fuster V, Badimon L. Syndromes of accelerated atherosclerosis: role of vascular injury and smooth muscle cell proliferation. J Am Coll Cardiol, 1990,15：1667-1687.
2 Gorsini A. Relationship between mevalonate pathway and arterial myocyte proliferation: in vitro studied with inhibition of HMG-CoA reductase. Atherosclerosis, 1993,101：117-125.
(收稿：1997-12-03 修回：1998-02-18), http://www.100md.com