结肠癌异位表达PS2蛋白的研究
作者：侯恒 马存根 李平 范宇涛 王保中 田秀娟
单位：侯恒 马存根 李平 范宇涛 王保中(037008 山西大同医学专科学校附属医院内科)；田秀娟(大同市第五人民医院病理科)
关键词：
中华内科杂志000521 PS2蛋白属于三叶草肽家族成员之一，又名PS2三叶草蛋白，其仅在正常胃黏膜上皮细胞和某些肿瘤组织中异位表达，在正常结肠上皮细胞不表达[1]。鉴于目前结肠癌的诊断尚无特异性较高的组织学指标，为此，我们研究了结肠癌和正常结肠黏膜组织中PS2蛋白和癌胚抗原(CEA)的表达，以了解PS2蛋白在结肠癌组织中异位表达的意义及其临床诊断价值。
一、资料和方法
1.研究对象：结肠癌和溃疡性结肠炎分别取自1997年6月至1998年6月和1995年1月至1998年6月经病理证实的标本。结肠癌29例，其中男14例，女15例，年龄35～81岁，平均年龄61.5岁。溃疡性结肠炎30例，其中男 14例，女16例，年龄18～68岁，平均年龄39.9岁。 正常对照组为结肠镜检和病理检查均正常的乙状结肠标本,共28例,其中男21例，女7例，年龄24～58岁，平均年龄40.6岁。
, 百拇医药
2.试剂及免疫组化染色： 鼠抗人PS2单抗、 过氧化物酶标记的抗鼠IgG单抗、SABC试剂、AEC检测试剂和多聚赖氨酸均购于武汉博士德生物工程公司；鼠抗人CEA单抗，过氧化物酶标记抗鼠IgG单抗和DAB 检测试剂购于北京中山生物试剂公司。 采用免疫组化SABC法。组织切片3～5 μm，60℃烤箱30 min，进行微波处理。3% H2O2阻断内源性过氧化物酶， 分别加入不同稀释度的一抗，37℃孵育1～2 h，加入生物素化二抗，37℃孵育1～2 h。DAB或AEC显色，苏木素复染核，脱水，透明，封片。用已知PS2表达阳性标本作阳性对照(厂家提供);用PBS液代替一抗、二抗分别作阴性对照。
3.结果判断：AEC染色的PS2组织片显红色，凡细胞染成红色，每高倍视野阳性细胞数大于10%，强度高于本底色者为阳性；CEA为DAB染色，凡染成棕黄色，强度高于本底色和每高倍视野阳性细胞数大于10%的为阳性片。
4.统计分析：用四格表法直接计算出检测的敏感性和特异性。
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二、结果
PS2和CEA在结肠癌和溃疡性结肠炎中都有表达。在结肠癌组织中PS2表达的敏感性为65.5%，明显低于CEA(96.8%)，但PS2 的特异性为86.3%，明显高于CEA的特异性(57.6%)。在溃疡性结肠炎中PS2仅在伴有不典型增生患者中表达，其阳性率较低(23.3%)，而CEA 在溃疡性结肠炎组织中表达的阳性率高达73.3%。
讨论 PS2三叶草蛋白在正常胃黏膜上皮细胞中表达和分泌，它具有增加黏液聚集度、从而增强胃黏膜表面黏液屏障的功能。在溃疡的修复过程中PS2表达较高，这有利于损伤周边黏膜细胞的移动、 加速损伤的修复作用[2]。胃黏膜细胞癌变时，PS2蛋白的表达消失，说明PS2 蛋白对胃黏膜具有保护作用和加速组织损伤修复的功能。由于它在胃癌组织中不存在，有人认为PS2是一种抑癌蛋白。而在其他肿瘤组织中有异位表达， 使其所处抑癌蛋白的地位有所动摇[3]。本研究结果表明， 在正常的结肠黏膜组织中PS2蛋白不表达，而结肠癌组织中表达水平较高， 伴不典型增生的溃疡性结肠炎组织中PS2蛋白表达。我们所发现的PS2蛋白在结肠癌组织中表达系一种异位表达现象，间接说明PS2可能并非抑癌蛋白。另外，其在伴不典型增生的溃疡性结肠炎组织中表达，从另一角度提示PS2蛋白可能参与了结肠黏膜细胞癌变的过程，其机制尚待进一步探讨。
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PS2在结肠癌组织中异位表达，而正常结肠黏膜和不伴有异常增生的溃疡性结肠炎组织中不表达[4]， 提示其可作为结肠癌的组织学诊断指标和溃疡性结肠炎患者的组织学检测指标，并作为观察疗效的指标。若能如此，可为溃疡性结肠炎的追踪观察提供检测标志物。 因此， 对上述组织进行了CEA的免疫组化检测，结果发现，CEA在结肠癌组织中表达率超过了70%，而PS2蛋白表达率在60%～70 %之间， 就结肠癌组织中表达的阳性率而言，CEA是较为敏感的指标。 仔细分析其在溃疡性结肠炎组织中的表达就不难发现，CEA在溃疡性结肠炎中的阳性率也相当高(73.3%)，而PS2的阳性率仅23.3%，并都在伴有不同程度的不典型增生患者中表达。说明PS2 蛋白的检测对结肠癌的诊断具有特异性强、敏感性较高的优点。此外，本研究结果也提示，PS2可作为溃疡性结肠炎追踪观察的指标。 如果溃疡性结肠炎组织中发现PS2蛋白，说明其有癌变倾向，要严密观察或进行手术治疗。
总之，PS2蛋白可在结肠组织中异位表达，其对结肠癌的组织学诊断有特异性强和敏感性高的优点，并可用于追踪观察溃疡性结肠炎病变是否有癌变倾向。但能否作为癌前病变的标志，尚待进一步临床研究。
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基金项目：山西省归国留学人员科研基金资助 〔晋教计财(1997)93号〕
参考文献
1，Lefebvre O,Wolf C, Kédinger M, et al. The mouse one P-domain (PS2) and two P-domain (mSP) genes exhibit distinct patterns of expression. J Cell Biol, 1993,122:191-198.
2，Hauser F, Hoffmann W. xP1 and xP4 P-domain peptides expressed in Xenopus laevis stomach mucosa. J Biol Chem, 1991,266:21306-21309.
3，Rio MC, Chenard MP, Wolf C, et al. Induction of pS2 and hSP genes as markers of mucosal ulceration of the digestive tract.Gastroenterology,1991,100:375-379.
4，Ribieras S, Tomasetto C , Rio MC. The pS2/TFF1 trefoil factor,from basic research to clinical applications. Biochim Biophys Acta,1998,1378:F61-F77.
(收稿日期：1999-10-21), http://www.100md.com
单位：侯恒 马存根 李平 范宇涛 王保中(037008 山西大同医学专科学校附属医院内科)；田秀娟(大同市第五人民医院病理科)
关键词：
中华内科杂志000521 PS2蛋白属于三叶草肽家族成员之一，又名PS2三叶草蛋白，其仅在正常胃黏膜上皮细胞和某些肿瘤组织中异位表达，在正常结肠上皮细胞不表达[1]。鉴于目前结肠癌的诊断尚无特异性较高的组织学指标，为此，我们研究了结肠癌和正常结肠黏膜组织中PS2蛋白和癌胚抗原(CEA)的表达，以了解PS2蛋白在结肠癌组织中异位表达的意义及其临床诊断价值。
一、资料和方法
1.研究对象：结肠癌和溃疡性结肠炎分别取自1997年6月至1998年6月和1995年1月至1998年6月经病理证实的标本。结肠癌29例，其中男14例，女15例，年龄35～81岁，平均年龄61.5岁。溃疡性结肠炎30例，其中男 14例，女16例，年龄18～68岁，平均年龄39.9岁。 正常对照组为结肠镜检和病理检查均正常的乙状结肠标本,共28例,其中男21例，女7例，年龄24～58岁，平均年龄40.6岁。
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2.试剂及免疫组化染色： 鼠抗人PS2单抗、 过氧化物酶标记的抗鼠IgG单抗、SABC试剂、AEC检测试剂和多聚赖氨酸均购于武汉博士德生物工程公司；鼠抗人CEA单抗，过氧化物酶标记抗鼠IgG单抗和DAB 检测试剂购于北京中山生物试剂公司。 采用免疫组化SABC法。组织切片3～5 μm，60℃烤箱30 min，进行微波处理。3% H2O2阻断内源性过氧化物酶， 分别加入不同稀释度的一抗，37℃孵育1～2 h，加入生物素化二抗，37℃孵育1～2 h。DAB或AEC显色，苏木素复染核，脱水，透明，封片。用已知PS2表达阳性标本作阳性对照(厂家提供);用PBS液代替一抗、二抗分别作阴性对照。
3.结果判断：AEC染色的PS2组织片显红色，凡细胞染成红色，每高倍视野阳性细胞数大于10%，强度高于本底色者为阳性；CEA为DAB染色，凡染成棕黄色，强度高于本底色和每高倍视野阳性细胞数大于10%的为阳性片。
4.统计分析：用四格表法直接计算出检测的敏感性和特异性。
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二、结果
PS2和CEA在结肠癌和溃疡性结肠炎中都有表达。在结肠癌组织中PS2表达的敏感性为65.5%，明显低于CEA(96.8%)，但PS2 的特异性为86.3%，明显高于CEA的特异性(57.6%)。在溃疡性结肠炎中PS2仅在伴有不典型增生患者中表达，其阳性率较低(23.3%)，而CEA 在溃疡性结肠炎组织中表达的阳性率高达73.3%。
讨论 PS2三叶草蛋白在正常胃黏膜上皮细胞中表达和分泌，它具有增加黏液聚集度、从而增强胃黏膜表面黏液屏障的功能。在溃疡的修复过程中PS2表达较高，这有利于损伤周边黏膜细胞的移动、 加速损伤的修复作用[2]。胃黏膜细胞癌变时，PS2蛋白的表达消失，说明PS2 蛋白对胃黏膜具有保护作用和加速组织损伤修复的功能。由于它在胃癌组织中不存在，有人认为PS2是一种抑癌蛋白。而在其他肿瘤组织中有异位表达， 使其所处抑癌蛋白的地位有所动摇[3]。本研究结果表明， 在正常的结肠黏膜组织中PS2蛋白不表达，而结肠癌组织中表达水平较高， 伴不典型增生的溃疡性结肠炎组织中PS2蛋白表达。我们所发现的PS2蛋白在结肠癌组织中表达系一种异位表达现象，间接说明PS2可能并非抑癌蛋白。另外，其在伴不典型增生的溃疡性结肠炎组织中表达，从另一角度提示PS2蛋白可能参与了结肠黏膜细胞癌变的过程，其机制尚待进一步探讨。
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PS2在结肠癌组织中异位表达，而正常结肠黏膜和不伴有异常增生的溃疡性结肠炎组织中不表达[4]， 提示其可作为结肠癌的组织学诊断指标和溃疡性结肠炎患者的组织学检测指标，并作为观察疗效的指标。若能如此，可为溃疡性结肠炎的追踪观察提供检测标志物。 因此， 对上述组织进行了CEA的免疫组化检测，结果发现，CEA在结肠癌组织中表达率超过了70%，而PS2蛋白表达率在60%～70 %之间， 就结肠癌组织中表达的阳性率而言，CEA是较为敏感的指标。 仔细分析其在溃疡性结肠炎组织中的表达就不难发现，CEA在溃疡性结肠炎中的阳性率也相当高(73.3%)，而PS2的阳性率仅23.3%，并都在伴有不同程度的不典型增生患者中表达。说明PS2 蛋白的检测对结肠癌的诊断具有特异性强、敏感性较高的优点。此外，本研究结果也提示，PS2可作为溃疡性结肠炎追踪观察的指标。 如果溃疡性结肠炎组织中发现PS2蛋白，说明其有癌变倾向，要严密观察或进行手术治疗。
总之，PS2蛋白可在结肠组织中异位表达，其对结肠癌的组织学诊断有特异性强和敏感性高的优点，并可用于追踪观察溃疡性结肠炎病变是否有癌变倾向。但能否作为癌前病变的标志，尚待进一步临床研究。
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基金项目：山西省归国留学人员科研基金资助 〔晋教计财(1997)93号〕
参考文献
1，Lefebvre O,Wolf C, Kédinger M, et al. The mouse one P-domain (PS2) and two P-domain (mSP) genes exhibit distinct patterns of expression. J Cell Biol, 1993,122:191-198.
2，Hauser F, Hoffmann W. xP1 and xP4 P-domain peptides expressed in Xenopus laevis stomach mucosa. J Biol Chem, 1991,266:21306-21309.
3，Rio MC, Chenard MP, Wolf C, et al. Induction of pS2 and hSP genes as markers of mucosal ulceration of the digestive tract.Gastroenterology,1991,100:375-379.
4，Ribieras S, Tomasetto C , Rio MC. The pS2/TFF1 trefoil factor,from basic research to clinical applications. Biochim Biophys Acta,1998,1378:F61-F77.
(收稿日期：1999-10-21), http://www.100md.com