牛磺酸对大鼠被动型Heymann肾炎的疗效观察
作者：张静波 郭啸华 袁发焕 廖立生
单位：第三军医大学新桥医院肾内科 重庆，400037
关键词：
中华内科杂志000725 牛磺酸(Taurine,Tau)是广泛分布于动物组织细胞内的含硫β-氨基酸。近年研究发现其具有膜稳定作用、抗脂质过氧化损伤和免疫调节等广泛生物效应。至于牛磺酸对肾小球疾病的保护作用，目前国内尚未见报道。本研究以大鼠被动型Heymann肾炎(passive Heymann nephritis,PHN)为对象，初步观察了牛磺酸的治疗效果。
一、材料与方法
1.PHN模型制备： 参照Loton等[1]方法提取鉴定致Heymann肾炎的大鼠近曲小管刷状缘微绒毛(brush border membrane，BBM)，免疫新西兰大白兔制备兔抗鼠BBM抗血清。动物分组： 6～8周龄健康雄性Wistar大鼠40只，体重130～180 g，测定24 h尿蛋白无异常后随机分成3组：A组(正常对照组8只)经尾静脉注射正常兔血清；B组(PHN组16只)、C组(PHN+Tau组16只)经尾静脉注射兔抗鼠BBM抗血清；A、B组饮用自来水；C组饲以1%牛磺酸溶液。于14 d及28 d，A组4只，B、C组各8只置大鼠代谢笼收集24 h尿量后，以3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，心脏采血，冰冻生理盐水腹主动脉灌注后取肾。
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2.观察指标：(1)24 h尿蛋白定量(考马斯亮蓝法)。(2)血清肌酐、尿素氮、甘油三酯及胆固醇水平用全自动生化分析仪测定。(3)组织学检查：光镜(HE、PAS、PASM染色)以及透射电镜及免疫荧光检查。
3.统计学分析：所有计量资料以均数±标准差(
±s)表示。所有数据进行方差齐性检验后进行单因素方差分析。
二、结果
1.24 h尿蛋白总量：见表1。
表1 各组大鼠24 h尿蛋白量的变化(±s) 组别
尿蛋白量(mg)
, 百拇医药
14 d
28 d
正常对照
2.38±0.59
2.41±0.44
PHN
55.17±25.92*
56.03±31.42*
PHN+Tau
21.21±8.03*△
17.41±6.09*△
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注：与正常对照组比较，*P<0.001； 与PHN组比较，△P<0.01 2.各组间血清肌酐及尿素氮水平差异均无显著性(P>0.05)。甘油三酯及胆固醇水平：见表2。
3.组织学检查：(1)光镜： 28 d时B、C组肾小球基底膜增厚,B组甚于C组；B组PASM染色可见钉突形成及部分基底膜空泡变性，而C组无明显钉突形成及基底膜空泡变性，A组肾小球结构正常。(2) 电镜：B组14 d时出现上皮下电子致密物沉积，28 d时增多，被基底膜样物质包绕，足突融合，基底膜增厚。C组上述病变较B组明显减轻。A组肾小球结构正常。(3) 免疫荧光：14 d时B组肾小球毛细血管壁出现兔及大鼠IgG颗粒状沉积，28 d时兔IgG微弱而大鼠IgG增强。C组兔及大鼠IgG颗粒状沉积均分别弱于B组。C3的沉积C组亦弱于B组。A组无荧光颗粒沉积。
表2 各组大鼠血清甘油三酯及胆固醇含量的
, 百拇医药
变化(±s) 组别
甘油三酯(mmol/L)
胆固醇(mmol/L)
14 d
28 d
14 d
28 d
正常对照
0.78±0.34
0.75±0.21
1.39±0.36
, 百拇医药
1.40±0.21
PHN
1.40±0.55
2.08±0.46**
2.01±0.34*
2.35±0.42*
PHN+Tau
0.85±0.37
1.04±0.28▲
1.41±0.29△
, http://www.100md.com 1.61±0.68△
注：与正常对照组比较，*P<0.01,**P<0.001；与PHN组比较， △P<0.05,▲P<0.01 讨论 PHN因表现大量蛋白尿及上皮下免疫复合物沉积而成为研究人类膜性肾病的经典模型。膜性肾病的治疗多采用细胞毒药物和激素，但缓解率低复发率高。迄今未发现疗效好，副反应小的方法。已有学者发现牛磺酸不仅能降低嘌呤霉素氨基核甙肾炎尿蛋白的产生，而且对灶性肾小球硬化及间质纤维化均有缓解作用，提示可能与牛磺酸的抗脂质过氧化作用、清除氧自由基并与金属蛋白酶形成螯合物有关。本研究发现，给予牛磺酸的大鼠尿蛋白排泄量明显低于PHN组，同时发现牛磺酸不仅能抑制异相期兔IgG沉积，而且能抑制自相期大鼠IgG沉积，表明牛磺酸能直接干扰抗体与肾小球上皮细胞固有抗原结合。由于减轻了抗原抗体反应，补体激活程度降低，C3沉积明显减少。形态学上，牛磺酸可以减轻肾小球的病理损害，提示牛磺酸可能通过改善肾小球基底膜的通透性，从而减轻蛋白尿的产生。 近年来研究表明，高脂血症是肾小球疾病进程中重要的损伤因子。本实验观察到给予牛磺酸的实验大鼠血清甘油三酯和胆固醇水平均有不同程度的下降(P<0.05)。这与何天培等[2]报道的牛磺酸能降低高脂膳大鼠胆固醇和甘油三酯水平的作用相似。以上结果证实：牛磺酸可在多种渠道对PHN具有保护作用。它作为内源性细胞保护剂，无毒副作用，具有很大的临床应用前景。
参考文献
1，Loton D,Fong SE.Reduction of protein excretion by dimethyl sulfoxide in rats with passive Heymann nephritis.Kidney Int,1984,25:778-788.
2，何天培，周毓平.牛磺酸对高脂饲料大鼠脂肪代谢及免疫作用的影响.营养学报,1997，19:7-10.
收稿日期：1999-09-21, 百拇医药
单位：第三军医大学新桥医院肾内科 重庆，400037
关键词：
中华内科杂志000725 牛磺酸(Taurine,Tau)是广泛分布于动物组织细胞内的含硫β-氨基酸。近年研究发现其具有膜稳定作用、抗脂质过氧化损伤和免疫调节等广泛生物效应。至于牛磺酸对肾小球疾病的保护作用，目前国内尚未见报道。本研究以大鼠被动型Heymann肾炎(passive Heymann nephritis,PHN)为对象，初步观察了牛磺酸的治疗效果。
一、材料与方法
1.PHN模型制备： 参照Loton等[1]方法提取鉴定致Heymann肾炎的大鼠近曲小管刷状缘微绒毛(brush border membrane，BBM)，免疫新西兰大白兔制备兔抗鼠BBM抗血清。动物分组： 6～8周龄健康雄性Wistar大鼠40只，体重130～180 g，测定24 h尿蛋白无异常后随机分成3组：A组(正常对照组8只)经尾静脉注射正常兔血清；B组(PHN组16只)、C组(PHN+Tau组16只)经尾静脉注射兔抗鼠BBM抗血清；A、B组饮用自来水；C组饲以1%牛磺酸溶液。于14 d及28 d，A组4只，B、C组各8只置大鼠代谢笼收集24 h尿量后，以3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，心脏采血，冰冻生理盐水腹主动脉灌注后取肾。
, http://www.100md.com
2.观察指标：(1)24 h尿蛋白定量(考马斯亮蓝法)。(2)血清肌酐、尿素氮、甘油三酯及胆固醇水平用全自动生化分析仪测定。(3)组织学检查：光镜(HE、PAS、PASM染色)以及透射电镜及免疫荧光检查。
3.统计学分析：所有计量资料以均数±标准差(
±s)表示。所有数据进行方差齐性检验后进行单因素方差分析。二、结果
1.24 h尿蛋白总量：见表1。
表1 各组大鼠24 h尿蛋白量的变化(
±s) 组别尿蛋白量(mg)
, 百拇医药
14 d
28 d
正常对照
2.38±0.59
2.41±0.44
PHN
55.17±25.92*
56.03±31.42*
PHN+Tau
21.21±8.03*△
17.41±6.09*△
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注：与正常对照组比较，*P<0.001； 与PHN组比较，△P<0.01 2.各组间血清肌酐及尿素氮水平差异均无显著性(P>0.05)。甘油三酯及胆固醇水平：见表2。
3.组织学检查：(1)光镜： 28 d时B、C组肾小球基底膜增厚,B组甚于C组；B组PASM染色可见钉突形成及部分基底膜空泡变性，而C组无明显钉突形成及基底膜空泡变性，A组肾小球结构正常。(2) 电镜：B组14 d时出现上皮下电子致密物沉积，28 d时增多，被基底膜样物质包绕，足突融合，基底膜增厚。C组上述病变较B组明显减轻。A组肾小球结构正常。(3) 免疫荧光：14 d时B组肾小球毛细血管壁出现兔及大鼠IgG颗粒状沉积，28 d时兔IgG微弱而大鼠IgG增强。C组兔及大鼠IgG颗粒状沉积均分别弱于B组。C3的沉积C组亦弱于B组。A组无荧光颗粒沉积。
表2 各组大鼠血清甘油三酯及胆固醇含量的
, 百拇医药
变化(
±s) 组别甘油三酯(mmol/L)
胆固醇(mmol/L)
14 d
28 d
14 d
28 d
正常对照
0.78±0.34
0.75±0.21
1.39±0.36
, 百拇医药
1.40±0.21
PHN
1.40±0.55
2.08±0.46**
2.01±0.34*
2.35±0.42*
PHN+Tau
0.85±0.37
1.04±0.28▲
1.41±0.29△
, http://www.100md.com 1.61±0.68△
注：与正常对照组比较，*P<0.01,**P<0.001；与PHN组比较， △P<0.05,▲P<0.01 讨论 PHN因表现大量蛋白尿及上皮下免疫复合物沉积而成为研究人类膜性肾病的经典模型。膜性肾病的治疗多采用细胞毒药物和激素，但缓解率低复发率高。迄今未发现疗效好，副反应小的方法。已有学者发现牛磺酸不仅能降低嘌呤霉素氨基核甙肾炎尿蛋白的产生，而且对灶性肾小球硬化及间质纤维化均有缓解作用，提示可能与牛磺酸的抗脂质过氧化作用、清除氧自由基并与金属蛋白酶形成螯合物有关。本研究发现，给予牛磺酸的大鼠尿蛋白排泄量明显低于PHN组，同时发现牛磺酸不仅能抑制异相期兔IgG沉积，而且能抑制自相期大鼠IgG沉积，表明牛磺酸能直接干扰抗体与肾小球上皮细胞固有抗原结合。由于减轻了抗原抗体反应，补体激活程度降低，C3沉积明显减少。形态学上，牛磺酸可以减轻肾小球的病理损害，提示牛磺酸可能通过改善肾小球基底膜的通透性，从而减轻蛋白尿的产生。 近年来研究表明，高脂血症是肾小球疾病进程中重要的损伤因子。本实验观察到给予牛磺酸的实验大鼠血清甘油三酯和胆固醇水平均有不同程度的下降(P<0.05)。这与何天培等[2]报道的牛磺酸能降低高脂膳大鼠胆固醇和甘油三酯水平的作用相似。以上结果证实：牛磺酸可在多种渠道对PHN具有保护作用。它作为内源性细胞保护剂，无毒副作用，具有很大的临床应用前景。
参考文献
1，Loton D,Fong SE.Reduction of protein excretion by dimethyl sulfoxide in rats with passive Heymann nephritis.Kidney Int,1984,25:778-788.
2，何天培，周毓平.牛磺酸对高脂饲料大鼠脂肪代谢及免疫作用的影响.营养学报,1997，19:7-10.
收稿日期：1999-09-21, 百拇医药