CD117在急性非淋巴细胞性白血病细胞的表达与患者生存时间的关系
作者：郭珲 杨林花 王椿 王宏伟 乔振华
单位：郭珲 杨林花 王宏伟 乔振华(山西医科大学第二医院血液研究所 太原，030001)；王椿(上海市第一人民医院血液科)
关键词：白血病,非淋巴细胞性,急性；原癌基因蛋白质c-kit；存活率
中华内科杂志000709 【摘要】目的 观察CD117在急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)细胞中的表达，评价其对白血病患者生存时间判断方面的价值。方法 采用流式细胞仪对66例ANLL患者的白血病细胞进行分析。观察CD117阳性和阴性患者的预后，并做多因素分析。结果 66例ANLL患者中 ，41例表达CD117 ，CD117在ANLL患者中各亚型的表达差异无显著性(P>0.05)。CD117阳性患者完全缓解(CR)率低(43.9%)，CD117阴性患者CR率高(72.0%)(P<0.05)。CD117阳性患者生存时间短(196 d)，CD117阴性患者生存时间长(302 d)(Log-Rank检验 P=0.001 2)。将年龄、性别、WBC、缓解、复发、CD117阳性分别引入Cox 模型和 logistic 回归进行多参数分析，结果显示CD117可能是影响ANLL患者预后的一个因素(P<0.05)。结论 在ANLL中CD117 阳性表达的患者有比较差的预后。
, 百拇医药
A study on the expression CD117 in acute nonlymphoid leukemia and its impacts on survial duration
GUO Hui,YANG Linhua,WANG Chun,et al.
(Institute of Hematology,The Second Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China)
【Abstract】Objective To explore the expression of CD117 on blasts of ANLL and its impacts on survial duration of patients with ANLL.Methods Single-color flow cytometry was performed to examine CD117 expression in 66 patients with ANLL.Prognosis of a CD117 positive and CD117 negative group was observed and prognostic factors were analysed.Results Of the 66 patients with ANLL,41 had CD117 expression.There was no correlation between CD117 expression and FAB subtypes.A lower complete remission (CR) rate (P<0.05) and shorter survival duration were found in the CD117 positive patients with ANLL (Log-Rank test P=0.001 2) than those in the CD117 negative.CD117 negative group had higher cumulative survival,lower cumulative hazard than CD117 positive group.Multivariation analysis,including age,sex,WBC count,CD117 expression,remission and relapse,demonstrated that the expression of CD117 in ANLL patients may be an independent prognostic factor.Conclusion ANLL patients with positive CD117 expression had a poor prognosis.
, 百拇医药
【Key words】Leukemia,nonlymphocytic,acute；Proto-oncogene proteins c-kit；Survial rate
CD117是能够识别一个由人类原癌基因c-kit编码的跨膜酪氨酸激酶的受体。c-kit的受体及其配体(SCF)是人类多种组织细胞生长发育的重要调控因素,它单独作用或与其他造血因子共同作用能够促进造血干细胞及各系祖细胞的增殖和分化，在人的造血过程中发挥了很大的作用。关于c-kit受体及其配体对白血病细胞生长所起的作用目前尚未定论。我们对66 例急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)患者白血病细胞应用流式细胞仪(FCM)进行CD117的检测，目的是观察CD117在ANLL细胞中的表达,评价其对白血病患者生存时间判断方面的价值。
资料和方法
1.病例来源：所有病例选自1998年1月至1999年3月30日我院收治的66例住院患者。男34例，女32例，年龄范围2～65岁，中位年龄32岁。诊断根据白血病诊断标准[1]确诊，并依据FAB的标准分为若干亚型，杂合型白血病(HAL)诊断根据艾辉胜法[2]，其中HAL 5例，M2 10例，M3 15例，M4 15例，M5 15例，M6 3例，M7 3例。根据急性白血病疗效标准[1]在ANLL患者化疗2个疗程后进行疗效判断。
, http://www.100md.com
2.流式细胞仪的检测：常规制备单个核细胞(MNC),取制备好的MNC悬液100 μl，加入CD117-PE 80 μl(Ancell公司)，在4℃避光孵育30 min，离心、去上清，加500 μl PBS制备成细胞悬液，采用流式细胞仪(Coulter Epics.Elite ESP)作单标记分析，每例样本均加入IgG-PE做阴性对照。每例样本至少读取5 000个细胞。以Listmode形式存入磁盘，由软件(Coulter公司)进行数据分析。
3.阳性标准：CD117-PE标记荧光阳性细胞百分数>30%。
4.治疗：ANLL患者的诱导缓解治疗采用标准DA(柔红霉素、阿糖胞苷)、HA(高三尖杉酯碱、阿糖胞苷)或MA(甲氨蝶呤、阿糖胞苷)方案,完全缓解(CR)， CR1 后原方案巩固1～2次，以后采用DA、HA、MA和HOAP(高三尖杉酯碱、长春新碱、阿糖胞苷、泼尼松)等方案交替巩固治疗，M3患者采用全反式维甲酸(ATRA)与化疗方案交替巩固治疗。
, 百拇医药
5.统计学处理：由于阳性细胞百分数非正态分布故采用非参数秩和检验，分类资料采用χ2检验，四格表精确概率法，生存时间分析比较采用Kaplan-Meier法和Log-Rank检验，多参数分析分别采用Cox风险比例模型和logistic回归法。
6.生存时间定义:为自确诊AL时间开始至无效事件或结尾期。无效事件定义为患者死亡。结尾期为1999年3月30日(最长观察时间为420 d)。
结果
1. CD117在ANLL中的表达率和阳性细胞百分数:ANLL患者中CD117阳性表达率为62%。CD117阳性例数和阳性细胞百分数(
±s),见表1。经非参数秩和检验P>0.05,说明各组之间差异无显著性。
, 百拇医药
2. CD117的表达与ANLL患者CR率及生存时间的关系：对患者生存时间采用Kaplan-Meier法结果，见表2。CD117表达阳性者CR率低于阴性者,χ2=4.95,P<0.05,差异有显著意义。两者生存时间比较,经Log-Rank检验，χ2=10.43，P=0.001 2,CD117表达阴性者生存时间长于阳性者。
表1 66例各型ANLL的CD117阳性例数及阳性细胞百分数 FAB分型
例数
CD117阳性
例数
CD117阳性细胞百分数(%)
, http://www.100md.com
M(中位数)
范围
HAL
5
3
83.70
44.57～122.83
M2
10
8
68.42
39.08～ 97.76
M3
, 百拇医药
15
8
39.46
22.46～ 50.46
M4
15
12
80.69
53.13～108.25
M5
15
8
, 百拇医药 41.31
5.60～ 77.02
M6
3
1
12.21
4.65～ 19.77
M7
3
1
20.11
9.33～ 30.89
, http://www.100md.com
表2 CD117阳性患者和阴性患者CR率及生存时间的比较 CD117
表达
例数
CR
生存时间
例数
率(%)±s
M
范围
阳性
41
, 百拇医药
18
43.9
196.10±18.48
160
115.80～204.20
阴性
25
18
72.0
302.78±32.02
280
250.25～309.75
, http://www.100md.com 3. CD117的表达与患者生存概率的关系：在ANLL患者累积生存概率(cum survival)中，CD117阳性患者累积生存概率较CD117阴性患者累积生存概率为低。
4. 生存时间多因素的分析：为了了解影响白血病患者生存时间的诸多因素的相互关系，我们以患者生存时间为因变量，以年龄、性别、WBC数、CD117+表达、是否复发、是否缓解为自变量,对41例ANLL患者采用Cox风险比例模型进行分析，结果显示入选的自变量包括CD117+表达，复发，缓解，同时又采用logistic回归进行统计分析，结果显示入选的自变量与前者一致(表3，4)。 表3 Cox模型对41例ANLL患者生存时间的分析 选用变量
(xj)
参数估
, 百拇医药
计值
估计值的
标准误
Wald检
验(χ2)
P值
CD117+
1.699 5
0.606 6
7.848 3
0.015 1
缓解
, http://www.100md.com
-2.708 6
0.607 2
19.900 1
0.004 7
复发
2.541 4
0.609 3
17.397 7
0.008 3
年龄
0.005 5
0.020 8
, 百拇医药
0.255 2
0.613 5
性别
-0.445 5
0.365 3
1.219 5
0.140 6
WBC
0.002 8
0.019 0
0.021 9
0.882 4
, http://www.100md.com
表4 logistic回归对41例ANLL患者生存时间的分析 选用变量
(xj)
参数估
计值
估计值的
标准误
Wald检
验(χ2)
P值
CD117+
1.967 1
, http://www.100md.com
0.677 8
7.848 3
0.033 7
WBC
0.016 0
0.030 3
0.278 84
0.597 2
缓解
-3.839 4
0.720 0
28.438 2
, http://www.100md.com
0.008 9
复发
3.097 5
0.685 8
20.398 7
0.009 3
年龄
0.016 8
0.014 9
1.269 8
0.259 8
性别
, 百拇医药 -0.068 8
0.074 0
0.929 6
0.324 1
讨论
本研究观察了CD117在66例患者的表达，发现62%的ANLL患者CD117表达阳性，与文献报道一致[3]。在M2患者中CD117的阳性细胞百分数与其他亚型相比较亦未见明显增高(P>0.05)，与文献报道CD117的表达主要集中于分化比较早期髓细胞系或亚型(M1,M2)不一致[4]，造成差别的原因可能与单克隆抗体和患者的选择不同有关。我们认为CD117对ANLL中FAB亚型的区分无明显意义。虽然公认SCF 是作用于造血最早阶段的细胞因子，本结果说明其作用的靶细胞比较多，既能作用于未分化的祖细胞，又能作用于分化的髓细胞,此有待进一步商榷。
, 百拇医药
由于白血病具有异质性的特点，对白血病细胞生物学特性的认识与鉴别，主要目的在于寻找影响白血病预后的危险因素，以设计出针对性的治疗策略，大量研究表明，白血病患者争取长期存活乃至治愈除了取决于治疗因素外，病人本身的特点和生物学特性对治疗亦有重要的影响。本研究在CD117阳性和CD117阴性ANLL患者的治疗强度基本相同的条件下，对66例ANLL患者进行了比较分析，发现CD117阳性患者CR率较CD117阴性患者CR率明显偏低(P<0.05)。本研究同时对CD117阳性的ANLL患者和CD117阴性的患者的生存时间采用Kaplan-Meier法进行分析，发现CD117阳性的患者生存时间较CD117阴性的患者生存时间明显缩短。由于影响白血病预后因素的不均一性和相互关联性，所以对预后因素的综合评价，更能准确的反映出各种因素的作用。本研究同时将多个影响其预后的因素引入Cox模型进行生存时间的统计分析，得出CD117阳性、患者复发、缓解对患者生存时间的影响具有显著意义(P<0.05)。又分别将上述几个因素引入logistic回归进行判断，亦得出同样的结论。CD117阳性的ANLL患者CR率低，治疗敏感性差，病死率高。本结果提示CD117可能是影响白血病患者预后的一个因素，CD117阳性ANLL患者预后不良，可能属于ANLL中一个具有高危特征的临床亚型。
, 百拇医药
参考文献
1，张之南，主编.血液病诊断及疗效标准.第1版.天津：天津科学技术出版社，1991.190-193.
2，艾辉胜,主编.现代白血病学.第1版.北京：人民军医出版社，1997.164-166.
3，Reuss-Borst MA,Buhring HJ,Schmidt H,et al.AML:immunophenotypic heterogeneity and prognostic significance of c-kit expression.Leukaemia,1994,8:258-263.
4，Di Noto R,Lo Pardo C,Schiavone E M,et al.Stem cell factor receptor (c-kit,CD117)is expressed on blast cells from most immature types of acute myeloid malignancies but is also a characteristic of a subset of acute promyelocytic leukaemia.Br J Haematol,1996,92:562-564.
收稿日期：1999-11-22, 百拇医药
单位：郭珲 杨林花 王宏伟 乔振华(山西医科大学第二医院血液研究所 太原，030001)；王椿(上海市第一人民医院血液科)
关键词：白血病,非淋巴细胞性,急性；原癌基因蛋白质c-kit；存活率
中华内科杂志000709 【摘要】目的 观察CD117在急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)细胞中的表达，评价其对白血病患者生存时间判断方面的价值。方法 采用流式细胞仪对66例ANLL患者的白血病细胞进行分析。观察CD117阳性和阴性患者的预后，并做多因素分析。结果 66例ANLL患者中 ，41例表达CD117 ，CD117在ANLL患者中各亚型的表达差异无显著性(P>0.05)。CD117阳性患者完全缓解(CR)率低(43.9%)，CD117阴性患者CR率高(72.0%)(P<0.05)。CD117阳性患者生存时间短(196 d)，CD117阴性患者生存时间长(302 d)(Log-Rank检验 P=0.001 2)。将年龄、性别、WBC、缓解、复发、CD117阳性分别引入Cox 模型和 logistic 回归进行多参数分析，结果显示CD117可能是影响ANLL患者预后的一个因素(P<0.05)。结论 在ANLL中CD117 阳性表达的患者有比较差的预后。
, 百拇医药
A study on the expression CD117 in acute nonlymphoid leukemia and its impacts on survial duration
GUO Hui,YANG Linhua,WANG Chun,et al.
(Institute of Hematology,The Second Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China)
【Abstract】Objective To explore the expression of CD117 on blasts of ANLL and its impacts on survial duration of patients with ANLL.Methods Single-color flow cytometry was performed to examine CD117 expression in 66 patients with ANLL.Prognosis of a CD117 positive and CD117 negative group was observed and prognostic factors were analysed.Results Of the 66 patients with ANLL,41 had CD117 expression.There was no correlation between CD117 expression and FAB subtypes.A lower complete remission (CR) rate (P<0.05) and shorter survival duration were found in the CD117 positive patients with ANLL (Log-Rank test P=0.001 2) than those in the CD117 negative.CD117 negative group had higher cumulative survival,lower cumulative hazard than CD117 positive group.Multivariation analysis,including age,sex,WBC count,CD117 expression,remission and relapse,demonstrated that the expression of CD117 in ANLL patients may be an independent prognostic factor.Conclusion ANLL patients with positive CD117 expression had a poor prognosis.
, 百拇医药
【Key words】Leukemia,nonlymphocytic,acute；Proto-oncogene proteins c-kit；Survial rate
CD117是能够识别一个由人类原癌基因c-kit编码的跨膜酪氨酸激酶的受体。c-kit的受体及其配体(SCF)是人类多种组织细胞生长发育的重要调控因素,它单独作用或与其他造血因子共同作用能够促进造血干细胞及各系祖细胞的增殖和分化，在人的造血过程中发挥了很大的作用。关于c-kit受体及其配体对白血病细胞生长所起的作用目前尚未定论。我们对66 例急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)患者白血病细胞应用流式细胞仪(FCM)进行CD117的检测，目的是观察CD117在ANLL细胞中的表达,评价其对白血病患者生存时间判断方面的价值。
资料和方法
1.病例来源：所有病例选自1998年1月至1999年3月30日我院收治的66例住院患者。男34例，女32例，年龄范围2～65岁，中位年龄32岁。诊断根据白血病诊断标准[1]确诊，并依据FAB的标准分为若干亚型，杂合型白血病(HAL)诊断根据艾辉胜法[2]，其中HAL 5例，M2 10例，M3 15例，M4 15例，M5 15例，M6 3例，M7 3例。根据急性白血病疗效标准[1]在ANLL患者化疗2个疗程后进行疗效判断。
, http://www.100md.com
2.流式细胞仪的检测：常规制备单个核细胞(MNC),取制备好的MNC悬液100 μl，加入CD117-PE 80 μl(Ancell公司)，在4℃避光孵育30 min，离心、去上清，加500 μl PBS制备成细胞悬液，采用流式细胞仪(Coulter Epics.Elite ESP)作单标记分析，每例样本均加入IgG-PE做阴性对照。每例样本至少读取5 000个细胞。以Listmode形式存入磁盘，由软件(Coulter公司)进行数据分析。
3.阳性标准：CD117-PE标记荧光阳性细胞百分数>30%。
4.治疗：ANLL患者的诱导缓解治疗采用标准DA(柔红霉素、阿糖胞苷)、HA(高三尖杉酯碱、阿糖胞苷)或MA(甲氨蝶呤、阿糖胞苷)方案,完全缓解(CR)， CR1 后原方案巩固1～2次，以后采用DA、HA、MA和HOAP(高三尖杉酯碱、长春新碱、阿糖胞苷、泼尼松)等方案交替巩固治疗，M3患者采用全反式维甲酸(ATRA)与化疗方案交替巩固治疗。
, 百拇医药
5.统计学处理：由于阳性细胞百分数非正态分布故采用非参数秩和检验，分类资料采用χ2检验，四格表精确概率法，生存时间分析比较采用Kaplan-Meier法和Log-Rank检验，多参数分析分别采用Cox风险比例模型和logistic回归法。
6.生存时间定义:为自确诊AL时间开始至无效事件或结尾期。无效事件定义为患者死亡。结尾期为1999年3月30日(最长观察时间为420 d)。
结果
1. CD117在ANLL中的表达率和阳性细胞百分数:ANLL患者中CD117阳性表达率为62%。CD117阳性例数和阳性细胞百分数(
±s),见表1。经非参数秩和检验P>0.05,说明各组之间差异无显著性。, 百拇医药
2. CD117的表达与ANLL患者CR率及生存时间的关系：对患者生存时间采用Kaplan-Meier法结果，见表2。CD117表达阳性者CR率低于阴性者,χ2=4.95,P<0.05,差异有显著意义。两者生存时间比较,经Log-Rank检验，χ2=10.43，P=0.001 2,CD117表达阴性者生存时间长于阳性者。
表1 66例各型ANLL的CD117阳性例数及阳性细胞百分数 FAB分型
例数
CD117阳性
例数
CD117阳性细胞百分数(%)
, http://www.100md.com
M(中位数)
范围
HAL
5
3
83.70
44.57～122.83
M2
10
8
68.42
39.08～ 97.76
M3
, 百拇医药
15
8
39.46
22.46～ 50.46
M4
15
12
80.69
53.13～108.25
M5
15
8
, 百拇医药 41.31
5.60～ 77.02
M6
3
1
12.21
4.65～ 19.77
M7
3
1
20.11
9.33～ 30.89
, http://www.100md.com
表2 CD117阳性患者和阴性患者CR率及生存时间的比较 CD117
表达
例数
CR
生存时间
例数
率(%)
±sM
范围
阳性
41
, 百拇医药
18
43.9
196.10±18.48
160
115.80～204.20
阴性
25
18
72.0
302.78±32.02
280
250.25～309.75
, http://www.100md.com 3. CD117的表达与患者生存概率的关系：在ANLL患者累积生存概率(cum survival)中，CD117阳性患者累积生存概率较CD117阴性患者累积生存概率为低。
4. 生存时间多因素的分析：为了了解影响白血病患者生存时间的诸多因素的相互关系，我们以患者生存时间为因变量，以年龄、性别、WBC数、CD117+表达、是否复发、是否缓解为自变量,对41例ANLL患者采用Cox风险比例模型进行分析，结果显示入选的自变量包括CD117+表达，复发，缓解，同时又采用logistic回归进行统计分析，结果显示入选的自变量与前者一致(表3，4)。 表3 Cox模型对41例ANLL患者生存时间的分析 选用变量
(xj)
参数估
, 百拇医药
计值
估计值的
标准误
Wald检
验(χ2)
P值
CD117+
1.699 5
0.606 6
7.848 3
0.015 1
缓解
, http://www.100md.com
-2.708 6
0.607 2
19.900 1
0.004 7
复发
2.541 4
0.609 3
17.397 7
0.008 3
年龄
0.005 5
0.020 8
, 百拇医药
0.255 2
0.613 5
性别
-0.445 5
0.365 3
1.219 5
0.140 6
WBC
0.002 8
0.019 0
0.021 9
0.882 4
, http://www.100md.com
表4 logistic回归对41例ANLL患者生存时间的分析 选用变量
(xj)
参数估
计值
估计值的
标准误
Wald检
验(χ2)
P值
CD117+
1.967 1
, http://www.100md.com
0.677 8
7.848 3
0.033 7
WBC
0.016 0
0.030 3
0.278 84
0.597 2
缓解
-3.839 4
0.720 0
28.438 2
, http://www.100md.com
0.008 9
复发
3.097 5
0.685 8
20.398 7
0.009 3
年龄
0.016 8
0.014 9
1.269 8
0.259 8
性别
, 百拇医药 -0.068 8
0.074 0
0.929 6
0.324 1
讨论
本研究观察了CD117在66例患者的表达，发现62%的ANLL患者CD117表达阳性，与文献报道一致[3]。在M2患者中CD117的阳性细胞百分数与其他亚型相比较亦未见明显增高(P>0.05)，与文献报道CD117的表达主要集中于分化比较早期髓细胞系或亚型(M1,M2)不一致[4]，造成差别的原因可能与单克隆抗体和患者的选择不同有关。我们认为CD117对ANLL中FAB亚型的区分无明显意义。虽然公认SCF 是作用于造血最早阶段的细胞因子，本结果说明其作用的靶细胞比较多，既能作用于未分化的祖细胞，又能作用于分化的髓细胞,此有待进一步商榷。
, 百拇医药
由于白血病具有异质性的特点，对白血病细胞生物学特性的认识与鉴别，主要目的在于寻找影响白血病预后的危险因素，以设计出针对性的治疗策略，大量研究表明，白血病患者争取长期存活乃至治愈除了取决于治疗因素外，病人本身的特点和生物学特性对治疗亦有重要的影响。本研究在CD117阳性和CD117阴性ANLL患者的治疗强度基本相同的条件下，对66例ANLL患者进行了比较分析，发现CD117阳性患者CR率较CD117阴性患者CR率明显偏低(P<0.05)。本研究同时对CD117阳性的ANLL患者和CD117阴性的患者的生存时间采用Kaplan-Meier法进行分析，发现CD117阳性的患者生存时间较CD117阴性的患者生存时间明显缩短。由于影响白血病预后因素的不均一性和相互关联性，所以对预后因素的综合评价，更能准确的反映出各种因素的作用。本研究同时将多个影响其预后的因素引入Cox模型进行生存时间的统计分析，得出CD117阳性、患者复发、缓解对患者生存时间的影响具有显著意义(P<0.05)。又分别将上述几个因素引入logistic回归进行判断，亦得出同样的结论。CD117阳性的ANLL患者CR率低，治疗敏感性差，病死率高。本结果提示CD117可能是影响白血病患者预后的一个因素，CD117阳性ANLL患者预后不良，可能属于ANLL中一个具有高危特征的临床亚型。
, 百拇医药
参考文献
1，张之南，主编.血液病诊断及疗效标准.第1版.天津：天津科学技术出版社，1991.190-193.
2，艾辉胜,主编.现代白血病学.第1版.北京：人民军医出版社，1997.164-166.
3，Reuss-Borst MA,Buhring HJ,Schmidt H,et al.AML:immunophenotypic heterogeneity and prognostic significance of c-kit expression.Leukaemia,1994,8:258-263.
4，Di Noto R,Lo Pardo C,Schiavone E M,et al.Stem cell factor receptor (c-kit,CD117)is expressed on blast cells from most immature types of acute myeloid malignancies but is also a characteristic of a subset of acute promyelocytic leukaemia.Br J Haematol,1996,92:562-564.
收稿日期：1999-11-22, 百拇医药