血小板膜糖蛋白Ⅱb和Ⅲa 以及p-选择素在肾小球疾病中的变化
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中华内科杂志 2000年第9期第39卷
作者：胡海云 贾汝汉 程晖 邱昌建 刘铭球
单位：430060 武汉，湖北医科大学附属第一医院肾内科
关键词：
中华内科杂志000917 流行病学证实，肾病综合征、狼疮性肾炎、糖尿病肾病、高血压肾病中存在着高凝倾向，而慢性肾功能不全患者存在着明显出血倾向或凝血紊乱。我们早期的研究表明此与血小板聚集能力有关[1]。血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb、Ⅲa是血小板聚集的关键因素，在出血与凝血中起着重要作用。本研究系统观察了48例肾小球疾病不同肾功能状态及透析状态下GPⅡb、GPⅢa和p-选择素(p-140)以及血浆von Willebrane (vWF) 因子的变化，兹报告如下。
一、 材料与方法
1. 对象：48例住院及家庭透析患者，男32例，女16例，年龄17～73岁，平均(39.8±14.5)岁；其中慢性肾小球疾病25例，乙型肝炎病毒型肾病5例，系统性红斑狼疮性肾炎4例，糖尿病肾病2例，高血压肾病10例和多囊肾2例。按肾功能情况及透析与否分为4组。A组：18例，为原发性肾小球疾病肾功能正常组；B组：10例，为慢性肾功能不全非透析组；C组：20例，为慢性肾功能不全透析组；D组：20例，为健康成人对照组。
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2.ELISA法测定GPⅡb、GPⅢa、p-140。一抗为单克隆抗体SZ-22(GPⅡb)、SZ-21(GPⅢa)、SZ-51(p-140)，均为苏州医学院血栓研究室提供。
3.双抗体夹心固相酶免疫测定血浆vWF。 一抗SZ-29(vWF)亦为苏州医学院血栓研究室提供。
4.统计学处理：所有结果用均值±标准差(
±s)表示，采用方差分析，t检验(应用SPSS软件)。P<0.05为差别有显著性意义。
二、 结果
1.各组肾功能的生化指标：见表1。
表1 各组肾功能的生化指标测定结果 组别
, 百拇医药 尿素氮
(mmol/L)
血肌酐
(mmol/L)
肌酐清除率
(ml/L)
24 h尿蛋白
(g)
A
4.6± 2.1
100.3± 27.5
826±107
1.70±0.87*
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B
28.3±12.5*
1 210.4±526.4*
105± 77*
1.23±0.80*
C
15.9± 7.8*
934.6±324.1*……
D
6.0± 1.8
, 百拇医药 90.5± 23.1
905±300
0.14±0.10
注：各组与D比较，*P<0.01 2.各组GPⅡb、GPⅢa、p-140分子数/血小板及vWF的变化：见表2。
表2 各组GPⅡb、GPⅢa、P-140及vWF的变化 组别
GPⅡb
GPⅢa
p-140
vWF(%)
A
54.32± 3.65*△
, 百拇医药
46.21±4.03*△
3.72±1.10*△
127.9±52.10*
B
25.68±21.12△
18.92±2.54△
1.26±0.42△
158.7±11.50*
C
32.74± 2.01△
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23.11±2.30△
0.97±0.54△
142.1±23.4*
D
45.25± 5.08
39.14±3.62
2.78±0.20
100.0±00.0
注：GPⅡb、GPⅢa、p-140的计量单位均为分子数×103/血小板 A组与B、C组比较，* P<0.01；各组与D组比较，△P<0.05 讨论 在病理或生理状态下，GPⅡb构成α链，GPⅢa构成β链，以1:1结合成GPⅡb-Ⅲa复合物，所以GPⅡb、GPⅢa能间接反映GPⅡb-Ⅲa状态。凝血初期，必需激活GPⅡb-Ⅲa。GPⅡb-Ⅲa与vWF因子、纤维连接蛋白(Fn)、纤维蛋白原(Fg)、血管连接素结合，可使GPⅡb-Ⅲa结构发生改变，导致血小板聚集和血栓形成。本研究表明，GPⅡb、GPⅢa在肾脏疾病中的变化不一，在肾功能正常的A组增加，肾功能不全的B组明显减少，透析后的C组变化不大。这与我们先前研究肾脏疾病时观察到的血小板的聚集变化一致[1]。GPⅡb、GPⅢa的量影响了患者的凝血功能。
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GPⅡb-Ⅲa与vWF结合可激活血小板[2]。vWF是血小板与内皮下层黏附的中介物。本实验研究表明，vWF在肾小球疾病中肾功能正常或其不全时均明显增加，表明血小板凝集的关键仍然是GPⅡb-Ⅲa。血小板膜上p-140是血小板活化的特异性标志，来源于血小板α-颗粒，作为黏附分子之一，其作用是介导内皮细胞与白细胞等黏附，并与免疫损伤、炎症、血栓形成密切相关，具有较强的白细胞趋化作用。而GPⅡb-Ⅲa活化是血小板α-颗粒释出的前提，提示GPⅡb-Ⅲa介导了最初的血小板凝集，同时诱发一系列生理或病理反应，如在血小板聚集后脱颗粒释放出的转化生长因子(TGF-β)、血小板源生长因子(PDGF)、p-140等细胞因子及活性物质，已证实对肾脏疾病有促进作用。所以A组GPⅡb、GPⅢa增多介导高凝及肾脏疾病发展。B组GPⅡb、GPⅢa减少则是导致出血的关键之一；尽管此时仍有vWF增高。这可能是GPⅡb-Ⅲa变化与血肌酐呈负相关[3]， GPⅡb-Ⅲa的结构变化以及与毒素等竞争性结合从而失去聚集功能有关。C组透析后GPⅡb-Ⅲa变化不明显， 血小板-白细胞的凝集是血液通过透析器人工膜相互作用而导致血小板活化和血小板功能损伤。尽管在透析前采血尽量排除了肝素的影响，但维持性的透析仍可使血小板不断活化并可能导致血小板破坏、血小板细胞因子的释放和血小板的功能减退。故血液透析仍不足以改善血小板的聚集能力[4，5]。本研究表明，GPⅡb-Ⅲa的变化可能与肾小球疾病中凝血功能紊乱有关。
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基金项目：本院科研基金资助(970012)
参考文献
1，胡海云, 贾汝汉, 王学玉，等. 肾小球肾炎血小板功能及血小板抗体. 中华肾脏病杂志，1994，10:292-293.
2，Peerschke EI. Recognition of platelet-associated fibrinogen by polyclonal antibodies: correlation with platelet aggregation . Blood， 1992，79:2028-2033.
3，Walkowiak B，Pawlowska Z，Michalak E，et al. Expression of fibrinogen receptors on platelets of uremic patients is correlated with the content of GPⅡb and plasma level of creatinine. Thromb Haemost， 1994，71:164-168.
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4，Sreedhara R，Itagaki I,Hakim RM. Uremic patients have decreased shear-induced platelet aggregation mediated by decreased availability of glycoprotein Ⅱb-Ⅲa receptors. Am J Kidney Dis， 1996，27:355-364.
5，Gawaz MP，Mujais SK，Schmidt B，et al. Platelet-leukocyte aggregation duing hemodialysis. Kidney Int， 1994，46:489-495.
(收稿日期：2000-02-01), http://www.100md.com
单位：430060 武汉，湖北医科大学附属第一医院肾内科
关键词：
中华内科杂志000917 流行病学证实，肾病综合征、狼疮性肾炎、糖尿病肾病、高血压肾病中存在着高凝倾向，而慢性肾功能不全患者存在着明显出血倾向或凝血紊乱。我们早期的研究表明此与血小板聚集能力有关[1]。血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb、Ⅲa是血小板聚集的关键因素，在出血与凝血中起着重要作用。本研究系统观察了48例肾小球疾病不同肾功能状态及透析状态下GPⅡb、GPⅢa和p-选择素(p-140)以及血浆von Willebrane (vWF) 因子的变化，兹报告如下。
一、 材料与方法
1. 对象：48例住院及家庭透析患者，男32例，女16例，年龄17～73岁，平均(39.8±14.5)岁；其中慢性肾小球疾病25例，乙型肝炎病毒型肾病5例，系统性红斑狼疮性肾炎4例，糖尿病肾病2例，高血压肾病10例和多囊肾2例。按肾功能情况及透析与否分为4组。A组：18例，为原发性肾小球疾病肾功能正常组；B组：10例，为慢性肾功能不全非透析组；C组：20例，为慢性肾功能不全透析组；D组：20例，为健康成人对照组。
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2.ELISA法测定GPⅡb、GPⅢa、p-140。一抗为单克隆抗体SZ-22(GPⅡb)、SZ-21(GPⅢa)、SZ-51(p-140)，均为苏州医学院血栓研究室提供。
3.双抗体夹心固相酶免疫测定血浆vWF。 一抗SZ-29(vWF)亦为苏州医学院血栓研究室提供。
4.统计学处理：所有结果用均值±标准差(
±s)表示，采用方差分析，t检验(应用SPSS软件)。P<0.05为差别有显著性意义。二、 结果
1.各组肾功能的生化指标：见表1。
表1 各组肾功能的生化指标测定结果 组别
, 百拇医药 尿素氮
(mmol/L)
血肌酐
(mmol/L)
肌酐清除率
(ml/L)
24 h尿蛋白
(g)
A
4.6± 2.1
100.3± 27.5
826±107
1.70±0.87*
, http://www.100md.com
B
28.3±12.5*
1 210.4±526.4*
105± 77*
1.23±0.80*
C
15.9± 7.8*
934.6±324.1*……
D
6.0± 1.8
, 百拇医药 90.5± 23.1
905±300
0.14±0.10
注：各组与D比较，*P<0.01 2.各组GPⅡb、GPⅢa、p-140分子数/血小板及vWF的变化：见表2。
表2 各组GPⅡb、GPⅢa、P-140及vWF的变化 组别
GPⅡb
GPⅢa
p-140
vWF(%)
A
54.32± 3.65*△
, 百拇医药
46.21±4.03*△
3.72±1.10*△
127.9±52.10*
B
25.68±21.12△
18.92±2.54△
1.26±0.42△
158.7±11.50*
C
32.74± 2.01△
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23.11±2.30△
0.97±0.54△
142.1±23.4*
D
45.25± 5.08
39.14±3.62
2.78±0.20
100.0±00.0
注：GPⅡb、GPⅢa、p-140的计量单位均为分子数×103/血小板 A组与B、C组比较，* P<0.01；各组与D组比较，△P<0.05 讨论 在病理或生理状态下，GPⅡb构成α链，GPⅢa构成β链，以1:1结合成GPⅡb-Ⅲa复合物，所以GPⅡb、GPⅢa能间接反映GPⅡb-Ⅲa状态。凝血初期，必需激活GPⅡb-Ⅲa。GPⅡb-Ⅲa与vWF因子、纤维连接蛋白(Fn)、纤维蛋白原(Fg)、血管连接素结合，可使GPⅡb-Ⅲa结构发生改变，导致血小板聚集和血栓形成。本研究表明，GPⅡb、GPⅢa在肾脏疾病中的变化不一，在肾功能正常的A组增加，肾功能不全的B组明显减少，透析后的C组变化不大。这与我们先前研究肾脏疾病时观察到的血小板的聚集变化一致[1]。GPⅡb、GPⅢa的量影响了患者的凝血功能。
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GPⅡb-Ⅲa与vWF结合可激活血小板[2]。vWF是血小板与内皮下层黏附的中介物。本实验研究表明，vWF在肾小球疾病中肾功能正常或其不全时均明显增加，表明血小板凝集的关键仍然是GPⅡb-Ⅲa。血小板膜上p-140是血小板活化的特异性标志，来源于血小板α-颗粒，作为黏附分子之一，其作用是介导内皮细胞与白细胞等黏附，并与免疫损伤、炎症、血栓形成密切相关，具有较强的白细胞趋化作用。而GPⅡb-Ⅲa活化是血小板α-颗粒释出的前提，提示GPⅡb-Ⅲa介导了最初的血小板凝集，同时诱发一系列生理或病理反应，如在血小板聚集后脱颗粒释放出的转化生长因子(TGF-β)、血小板源生长因子(PDGF)、p-140等细胞因子及活性物质，已证实对肾脏疾病有促进作用。所以A组GPⅡb、GPⅢa增多介导高凝及肾脏疾病发展。B组GPⅡb、GPⅢa减少则是导致出血的关键之一；尽管此时仍有vWF增高。这可能是GPⅡb-Ⅲa变化与血肌酐呈负相关[3]， GPⅡb-Ⅲa的结构变化以及与毒素等竞争性结合从而失去聚集功能有关。C组透析后GPⅡb-Ⅲa变化不明显， 血小板-白细胞的凝集是血液通过透析器人工膜相互作用而导致血小板活化和血小板功能损伤。尽管在透析前采血尽量排除了肝素的影响，但维持性的透析仍可使血小板不断活化并可能导致血小板破坏、血小板细胞因子的释放和血小板的功能减退。故血液透析仍不足以改善血小板的聚集能力[4，5]。本研究表明，GPⅡb-Ⅲa的变化可能与肾小球疾病中凝血功能紊乱有关。
, http://www.100md.com
基金项目：本院科研基金资助(970012)
参考文献
1，胡海云, 贾汝汉, 王学玉，等. 肾小球肾炎血小板功能及血小板抗体. 中华肾脏病杂志，1994，10:292-293.
2，Peerschke EI. Recognition of platelet-associated fibrinogen by polyclonal antibodies: correlation with platelet aggregation . Blood， 1992，79:2028-2033.
3，Walkowiak B，Pawlowska Z，Michalak E，et al. Expression of fibrinogen receptors on platelets of uremic patients is correlated with the content of GPⅡb and plasma level of creatinine. Thromb Haemost， 1994，71:164-168.
, http://www.100md.com
4，Sreedhara R，Itagaki I,Hakim RM. Uremic patients have decreased shear-induced platelet aggregation mediated by decreased availability of glycoprotein Ⅱb-Ⅲa receptors. Am J Kidney Dis， 1996，27:355-364.
5，Gawaz MP，Mujais SK，Schmidt B，et al. Platelet-leukocyte aggregation duing hemodialysis. Kidney Int， 1994，46:489-495.
(收稿日期：2000-02-01), http://www.100md.com