增殖细胞核抗原及P53在舌癌中的表达
作者：刘卫平 周 磊 李岩松 曹 军 黄 冰
单位：刘卫平 周磊 广东医学院附属医院口腔科 524001；李岩松 黄冰 曹军 病理科
关键词：增殖细胞核抗原；p53基因；舌；肿瘤
实用口腔医学杂志990209 〔摘要〕 目的：研究PCNA、P53在舌癌中表达的相关性及与肿瘤病理分级、淋巴结转移、预后的关系。方法：应用免疫组化SP法，观察46例病理确诊的舌癌石蜡标本中PCNA指数及P53阳性率的表达。结果：PCNA在所有病例均有不同程度表达，46例中28例呈P53阳性表达(60.9%)。P53阳性组中PCNA指数明显高于P53阴性组(P<0.001)。PCNA指数随舌癌病理分级的升高而增加(P<0.025)。P53阳性率在Ⅱ、Ⅲ级舌癌明显高于Ⅰ级舌癌(P<0.05)。在有淋巴结转移及术后生存小于3年组中PCNA指数及P53阳性率均明显高于无淋巴结转移及术后生存3年以上组(P<0.001,P<0.05)。结论：联合检测PCNA及P53对判断舌癌恶性度，预测淋巴结转移趋势和预后及指导临床治疗有重要价值。
, 百拇医药
The expression and clinical significance of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and P53 in tongue cancer
Liu Weiping,Zhou Lei,Li Yanshong,et al.
The Department of Stomatology,Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang 524001
〔Abstract〕 Objective:To study the relationship between PCNA and P53 expressions and relation between PCNA,P53 and pathological grade,lymphnode metastasis,prognosis respectively in tongue cancer.Methods:Using SP immunohistochemical method,the PCNA indices and positive rate of P53 were examined in 46 paraffin-embedded specimens of tongue cancer diagnosed by pathology.Results:PCNA expression was found in all the cases with an average index(%) of 42.3±22.11 (9.1～87.2).P53 expression was found in 28 out the 46 cases (60.9%).Heigher PCNA index and P53 positive rate were observed in the cases with heigher pathological grade,with lymphnode metastasis,and in the cases who died within 3 years after surgical treatment than those with lower pathological grade,without lymphnode metastasis,and in those who were alive 3 years after operation (P<0.05).Heigher PCNA index was also found in P53 positive cases than in the negative (P<0.001).Conclusion:Examination of PCNA and P53 is valuable in determining the degree of malignancy,predicting lymphnode metastasis and prognosis of the tumor as well as in directing clinical treatment.
, 百拇医药
Key words Proliferating cell nuclear antigen;p53 genes;Tongue;Neoplasms
近年来研究证实增殖细胞核抗原(PCNA)的表达可反映细胞增殖活性，是判断细胞增殖状态的重要指标，与肿瘤恶性度及预后有关。抑癌基因P53的突变与人类多肿瘤的发生发展密切相关。舌癌在口腔鳞癌中属于恶性度高、淋巴转移早、预后不良的一种。为此，作者应用免疫组化SP法对舌癌PCNA及P53的表达进行了研究，旨在探讨两者表达的相关性及与肿瘤病理分级、淋巴结转移及预后的关系，为临床治疗提供一定依据。
1 材料和方法
1.1 材料
标本来自广东医学院附属医院口腔科1988～1995 年术后存档石蜡标本，共计46例。其中，男性32例，女性14例，年龄24～71岁，平均48.6岁。肿瘤部位：舌缘22例，舌尖11例，舌腹10例，舌根3例。所有标本均再次复查、确诊，46例均为鳞状细胞癌。按WHO标准病理分级：Ⅰ级18例，Ⅱ级12例，Ⅲ级16例。全组病例术前均未行放疗或化疗，手术采取舌颌颈联合根治术，术后经病理确诊有颌下或(和)颈部淋巴结转移17例，占36.96%。术后失访8例，随访38例中，生存3年以上26例(68.4%)，术后1～3年内死亡12例(31.6%)。
, 百拇医药
1.2 方法
标本按4 μm厚连续切片，分别行HE染色及PCNA、P53免疫组化染色。免疫组化试剂盒购自美国Maxim公司，操作按说明书进行，以PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定
PCNA及P53均以细胞核呈清晰棕色为阳性细胞，采用测试网格，每例随机选取10个高倍视野(×400)计数1000个肿瘤细胞内阳性细胞所占比例。PCNA表示为阳性细胞指数，P53以阳性细胞>5%定为染色阳性。
1.4 统计分析
采用t检验及χ2检验。
2 结 果
2.1 PCNA及P53基因表达分布
, 百拇医药
46例中PCNA均有不同程度表达，阳性细胞指数9.1%～87,2%，平均(42.31±22.11)%(
±s)。阳性细胞在舌癌高分化区主要分布在癌巢周缘，胞核形态较一致，染色较浅(图 1)。在低分化及癌组织侵袭区，阳性细胞弥散分布，胞核大小不一，染色较重(图 2)。46 例中，P53阳性表达 28 例，阳性率 60.9%。阳性细胞分布情况与 PCNA 基本一致(图 3)， 但阳性细胞平均指数较PCNA低。
图1 PCNA在高分化舌癌中的 表达(×200)
图2 PCNA在低分化舌癌中的 表达(×200)
, 百拇医药
图3 P53在高分化舌癌中的 表达(×400)
2.2 PCNA、P53表达与舌癌病理分级、淋巴结转移及预后的关系 见表1。
表1 PCNA、P53表达与舌癌病理分级，淋巴结转移及预后的关系 项目
例数
PCNA指数
(±s)%
P值
P53染色
P值
+
, 百拇医药
-
病理分级
Ⅰ
18
27.85±14.29
6
12③
Ⅱ
12
40.32±18.19①
9
3
Ⅲ
, 百拇医药
16
60.07±20.06②
13
3
淋巴结转移
有
17
56.85±20.25
14
3
<0.001
<0.05
无
, 百拇医药
29
33.79±18.65
14
15
预 后
>3年
26
31.31±15.92
12
14
<0.001
<0.05
<3年
, 百拇医药
12
60.28±20.15
10
2
① 与Ⅰ级比较P<0.025 ②与Ⅱ级比较P<0.01 ③与Ⅱ、Ⅲ级比较P<0.05
从表1可见，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级舌癌中PCNA平均指数逐级升高，各组间差异有显著性(P<0.025)。Ⅱ、Ⅲ级舌癌P53阳性率均明显高于Ⅰ级舌癌(P<0.05)，但Ⅱ级与Ⅲ级比较，P53阳性率无显著差异(P>0.05)。有淋巴结转移、生存期<3年组中PCNA平均指数及P53阳性率均高于无淋巴结转移及生存期>3年组(P<0.001,P<0.05)。
2.3 PCNA指数与P53阳性率之间的关系 见表2。
, http://www.100md.com
表2 PCNA指数与P53阳性率之间的关系(%,+s) P53
例数
PCNA指数
-
18
27.42±11.91
+
28
51.88±21.97
从表2可见，P53阳性表达舌癌组织中PCNA指数明显高于P53阴性表达者(t=4.32 P<0.001)。
, 百拇医药
3 讨 论
PCNA是一种相对分子质量为36 000核蛋白，是DNA聚合酶的辅助蛋白，与DNA合成有关。它在静止细胞内含量极少，在细胞周期G1期开始增加，S期达到高峰，其量的变化与DNA合成一致〔1〕。它是反映细胞增殖状态的重要指标。Robbins等〔2〕报道胃、肾、乳腺、结肠癌组织中，PCNA阳性细胞指数随病理分级的升高明显增加。本组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级舌癌中PCNA指数逐级升高，差异有显著性(P<0.025)，说明随着舌癌组织学分级升高，肿瘤细胞增殖、分裂更活跃，PCNA表达也相应增强，提示PCNA指数对反映舌癌恶性度有重要参考价值。另外，我们还发现有淋巴结转移的舌癌组织中PCNA指数明显高于无转移组，说明增殖活性高的舌癌易于出现淋巴结转移，提示检测PCNA指数对早期预测舌癌淋巴结转移趋势有一定意义。从随访生存3年以上及以下二组资料显示：PCNA指数高的预后明显为差，表明PCNA指数可作为判定舌癌预后的一项指标。
, http://www.100md.com P53是目前公认的抑癌基因，野生型P53蛋白参与DNA合成、复制的负性调控，具有抑癌功能，而突变型P53蛋白则促进细胞的恶性转化。前者在细胞内含量低，一般方法难以测出，突变型P53蛋白构象发生变化，稳定性增加，含量增多，可用免疫方法测出。检测P53蛋白可间接反应p53基因的突变。p53基因突变是目前发现的人类肿瘤中最常见的基因突变。有报道〔3〕口腔鳞癌中P53阳性率为50%～80%〔3〕，本组(60.9%)与此相符。现已证实P53阳性表达与头颈部肿瘤〔4〕、乳腺癌〔5〕、肺癌〔6〕的发生、转移、生存期明显相关。本组病理Ⅱ、Ⅲ级，有淋巴结转移及术后生存小于3年的舌癌组织中P53阳性率明显高于病理I级、无淋巴结转移及术后生存大于3年组，表明p53基因突变不仅与舌癌的发生有关，而且在其淋巴结转移的过程中也起重要作用，并可作为舌癌预后的一项指征。
Mercer〔7〕报道野生型P53蛋白对PCNA有向下的调节作用，而突变型P53蛋白失去这种功能，导致PCNA水平升高。Ebina等〔8〕对肺癌的研究也发现P53蛋白与PCNA表达呈正相关，认为突变型P53蛋白增加了PCNA表达，引起细胞增殖。本实验显示：P53阳性组中PCNA平均指数明显高于P53阴性组(P<0.001)，说明p53基因突变与细胞异常增殖在舌癌的发生发展中存在密切的联系。
, 百拇医药
舌癌在口腔鳞癌中恶性度较高，因其解剖及生理特点，易早期出现淋巴结转移，预后较差。手术治疗中对尚无淋巴结转移指征的舌癌患者是否采取颈淋巴结清扫，目前意见不一。对下颌骨的存留及切除范围亦无统一标准。免疫组化联合测定PCNA及P53方法简便、可靠，对了解舌癌恶性度，预测淋巴结转移趋势及预后，指导临床制定合理治疗方案有重要参考价值。
参考文献
1 黄杰雄,黄致治.增殖细胞核抗原的研究进展.国外医学生理、病理科学与临床分册，1994,14(1):9
2 Robbins BA,Vega DDL,Ogata K,et al.Immunohistochemical detection of proliferating cell nuclear antigen in solid human malignancies.Arch Pathol Lab Med,1987，111:841
, 百拇医药
3 高家让,陈俊杰.P53抗癌基因与口腔鳞状细胞癌.国外医学口腔医学分册，1994，21(6):338
4 Watling DL,Gown AM,Coltrera MD.Overexpression of P53 in head and neck cancer.Head Neck,1992,14:437
5 Marzars R,Spinardi L,Ben Cheikh M,et al.P53 mutations occur in aggressive breast cancer.Cancer Res,1992,52:3918
6 Morkve O,Laerum OD.Flow cytometric measurement of P53 protein expression and DNA content in paraffin-embedded fissue from bronchial carcinomas.Cytometry,1991,12:438
, http://www.100md.com
7 Mercer WE,Shields MT,Lin D,et al. Growth suppression induced by wild-type P53 protein is accompanied by selective down-regulation of proliferating cell nuclear antigen expression.Proc Natl Acad Sci USA,1991,88:1958
8 Ebina M,Steinberg SM,Mulshine JL,et al. Relationship of P53 overexpression and upregulation of proliferating cell nuclear antigen with the clinical course of non-small cell lung cancer.Cancer Res,1994,54:2496
(收稿：1998-05-20修回：1998-09-21), 百拇医药
单位：刘卫平 周磊 广东医学院附属医院口腔科 524001；李岩松 黄冰 曹军 病理科
关键词：增殖细胞核抗原；p53基因；舌；肿瘤
实用口腔医学杂志990209 〔摘要〕 目的：研究PCNA、P53在舌癌中表达的相关性及与肿瘤病理分级、淋巴结转移、预后的关系。方法：应用免疫组化SP法，观察46例病理确诊的舌癌石蜡标本中PCNA指数及P53阳性率的表达。结果：PCNA在所有病例均有不同程度表达，46例中28例呈P53阳性表达(60.9%)。P53阳性组中PCNA指数明显高于P53阴性组(P<0.001)。PCNA指数随舌癌病理分级的升高而增加(P<0.025)。P53阳性率在Ⅱ、Ⅲ级舌癌明显高于Ⅰ级舌癌(P<0.05)。在有淋巴结转移及术后生存小于3年组中PCNA指数及P53阳性率均明显高于无淋巴结转移及术后生存3年以上组(P<0.001,P<0.05)。结论：联合检测PCNA及P53对判断舌癌恶性度，预测淋巴结转移趋势和预后及指导临床治疗有重要价值。
, 百拇医药
The expression and clinical significance of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and P53 in tongue cancer
Liu Weiping,Zhou Lei,Li Yanshong,et al.
The Department of Stomatology,Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang 524001
〔Abstract〕 Objective:To study the relationship between PCNA and P53 expressions and relation between PCNA,P53 and pathological grade,lymphnode metastasis,prognosis respectively in tongue cancer.Methods:Using SP immunohistochemical method,the PCNA indices and positive rate of P53 were examined in 46 paraffin-embedded specimens of tongue cancer diagnosed by pathology.Results:PCNA expression was found in all the cases with an average index(%) of 42.3±22.11 (9.1～87.2).P53 expression was found in 28 out the 46 cases (60.9%).Heigher PCNA index and P53 positive rate were observed in the cases with heigher pathological grade,with lymphnode metastasis,and in the cases who died within 3 years after surgical treatment than those with lower pathological grade,without lymphnode metastasis,and in those who were alive 3 years after operation (P<0.05).Heigher PCNA index was also found in P53 positive cases than in the negative (P<0.001).Conclusion:Examination of PCNA and P53 is valuable in determining the degree of malignancy,predicting lymphnode metastasis and prognosis of the tumor as well as in directing clinical treatment.
, 百拇医药
Key words Proliferating cell nuclear antigen;p53 genes;Tongue;Neoplasms
近年来研究证实增殖细胞核抗原(PCNA)的表达可反映细胞增殖活性，是判断细胞增殖状态的重要指标，与肿瘤恶性度及预后有关。抑癌基因P53的突变与人类多肿瘤的发生发展密切相关。舌癌在口腔鳞癌中属于恶性度高、淋巴转移早、预后不良的一种。为此，作者应用免疫组化SP法对舌癌PCNA及P53的表达进行了研究，旨在探讨两者表达的相关性及与肿瘤病理分级、淋巴结转移及预后的关系，为临床治疗提供一定依据。
1 材料和方法
1.1 材料
标本来自广东医学院附属医院口腔科1988～1995 年术后存档石蜡标本，共计46例。其中，男性32例，女性14例，年龄24～71岁，平均48.6岁。肿瘤部位：舌缘22例，舌尖11例，舌腹10例，舌根3例。所有标本均再次复查、确诊，46例均为鳞状细胞癌。按WHO标准病理分级：Ⅰ级18例，Ⅱ级12例，Ⅲ级16例。全组病例术前均未行放疗或化疗，手术采取舌颌颈联合根治术，术后经病理确诊有颌下或(和)颈部淋巴结转移17例，占36.96%。术后失访8例，随访38例中，生存3年以上26例(68.4%)，术后1～3年内死亡12例(31.6%)。
, 百拇医药
1.2 方法
标本按4 μm厚连续切片，分别行HE染色及PCNA、P53免疫组化染色。免疫组化试剂盒购自美国Maxim公司，操作按说明书进行，以PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定
PCNA及P53均以细胞核呈清晰棕色为阳性细胞，采用测试网格，每例随机选取10个高倍视野(×400)计数1000个肿瘤细胞内阳性细胞所占比例。PCNA表示为阳性细胞指数，P53以阳性细胞>5%定为染色阳性。
1.4 统计分析
采用t检验及χ2检验。
2 结 果
2.1 PCNA及P53基因表达分布
, 百拇医药
46例中PCNA均有不同程度表达，阳性细胞指数9.1%～87,2%，平均(42.31±22.11)%(
±s)。阳性细胞在舌癌高分化区主要分布在癌巢周缘，胞核形态较一致，染色较浅(图 1)。在低分化及癌组织侵袭区，阳性细胞弥散分布，胞核大小不一，染色较重(图 2)。46 例中，P53阳性表达 28 例，阳性率 60.9%。阳性细胞分布情况与 PCNA 基本一致(图 3)， 但阳性细胞平均指数较PCNA低。图1 PCNA在高分化舌癌中的 表达(×200)
图2 PCNA在低分化舌癌中的 表达(×200)
, 百拇医药
图3 P53在高分化舌癌中的 表达(×400)
2.2 PCNA、P53表达与舌癌病理分级、淋巴结转移及预后的关系 见表1。
表1 PCNA、P53表达与舌癌病理分级，淋巴结转移及预后的关系 项目
例数
PCNA指数
(
±s)%P值
P53染色
P值
+
, 百拇医药
-
病理分级
Ⅰ
18
27.85±14.29
6
12③
Ⅱ
12
40.32±18.19①
9
3
Ⅲ
, 百拇医药
16
60.07±20.06②
13
3
淋巴结转移
有
17
56.85±20.25
14
3
<0.001
<0.05
无
, 百拇医药
29
33.79±18.65
14
15
预 后
>3年
26
31.31±15.92
12
14
<0.001
<0.05
<3年
, 百拇医药
12
60.28±20.15
10
2
① 与Ⅰ级比较P<0.025 ②与Ⅱ级比较P<0.01 ③与Ⅱ、Ⅲ级比较P<0.05
从表1可见，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级舌癌中PCNA平均指数逐级升高，各组间差异有显著性(P<0.025)。Ⅱ、Ⅲ级舌癌P53阳性率均明显高于Ⅰ级舌癌(P<0.05)，但Ⅱ级与Ⅲ级比较，P53阳性率无显著差异(P>0.05)。有淋巴结转移、生存期<3年组中PCNA平均指数及P53阳性率均高于无淋巴结转移及生存期>3年组(P<0.001,P<0.05)。
2.3 PCNA指数与P53阳性率之间的关系 见表2。
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表2 PCNA指数与P53阳性率之间的关系(%,
+s) P53例数
PCNA指数
-
18
27.42±11.91
+
28
51.88±21.97
从表2可见，P53阳性表达舌癌组织中PCNA指数明显高于P53阴性表达者(t=4.32 P<0.001)。
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3 讨 论
PCNA是一种相对分子质量为36 000核蛋白，是DNA聚合酶的辅助蛋白，与DNA合成有关。它在静止细胞内含量极少，在细胞周期G1期开始增加，S期达到高峰，其量的变化与DNA合成一致〔1〕。它是反映细胞增殖状态的重要指标。Robbins等〔2〕报道胃、肾、乳腺、结肠癌组织中，PCNA阳性细胞指数随病理分级的升高明显增加。本组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级舌癌中PCNA指数逐级升高，差异有显著性(P<0.025)，说明随着舌癌组织学分级升高，肿瘤细胞增殖、分裂更活跃，PCNA表达也相应增强，提示PCNA指数对反映舌癌恶性度有重要参考价值。另外，我们还发现有淋巴结转移的舌癌组织中PCNA指数明显高于无转移组，说明增殖活性高的舌癌易于出现淋巴结转移，提示检测PCNA指数对早期预测舌癌淋巴结转移趋势有一定意义。从随访生存3年以上及以下二组资料显示：PCNA指数高的预后明显为差，表明PCNA指数可作为判定舌癌预后的一项指标。
, http://www.100md.com P53是目前公认的抑癌基因，野生型P53蛋白参与DNA合成、复制的负性调控，具有抑癌功能，而突变型P53蛋白则促进细胞的恶性转化。前者在细胞内含量低，一般方法难以测出，突变型P53蛋白构象发生变化，稳定性增加，含量增多，可用免疫方法测出。检测P53蛋白可间接反应p53基因的突变。p53基因突变是目前发现的人类肿瘤中最常见的基因突变。有报道〔3〕口腔鳞癌中P53阳性率为50%～80%〔3〕，本组(60.9%)与此相符。现已证实P53阳性表达与头颈部肿瘤〔4〕、乳腺癌〔5〕、肺癌〔6〕的发生、转移、生存期明显相关。本组病理Ⅱ、Ⅲ级，有淋巴结转移及术后生存小于3年的舌癌组织中P53阳性率明显高于病理I级、无淋巴结转移及术后生存大于3年组，表明p53基因突变不仅与舌癌的发生有关，而且在其淋巴结转移的过程中也起重要作用，并可作为舌癌预后的一项指征。
Mercer〔7〕报道野生型P53蛋白对PCNA有向下的调节作用，而突变型P53蛋白失去这种功能，导致PCNA水平升高。Ebina等〔8〕对肺癌的研究也发现P53蛋白与PCNA表达呈正相关，认为突变型P53蛋白增加了PCNA表达，引起细胞增殖。本实验显示：P53阳性组中PCNA平均指数明显高于P53阴性组(P<0.001)，说明p53基因突变与细胞异常增殖在舌癌的发生发展中存在密切的联系。
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舌癌在口腔鳞癌中恶性度较高，因其解剖及生理特点，易早期出现淋巴结转移，预后较差。手术治疗中对尚无淋巴结转移指征的舌癌患者是否采取颈淋巴结清扫，目前意见不一。对下颌骨的存留及切除范围亦无统一标准。免疫组化联合测定PCNA及P53方法简便、可靠，对了解舌癌恶性度，预测淋巴结转移趋势及预后，指导临床制定合理治疗方案有重要参考价值。
参考文献
1 黄杰雄,黄致治.增殖细胞核抗原的研究进展.国外医学生理、病理科学与临床分册，1994,14(1):9
2 Robbins BA,Vega DDL,Ogata K,et al.Immunohistochemical detection of proliferating cell nuclear antigen in solid human malignancies.Arch Pathol Lab Med,1987，111:841
, 百拇医药
3 高家让,陈俊杰.P53抗癌基因与口腔鳞状细胞癌.国外医学口腔医学分册，1994，21(6):338
4 Watling DL,Gown AM,Coltrera MD.Overexpression of P53 in head and neck cancer.Head Neck,1992,14:437
5 Marzars R,Spinardi L,Ben Cheikh M,et al.P53 mutations occur in aggressive breast cancer.Cancer Res,1992,52:3918
6 Morkve O,Laerum OD.Flow cytometric measurement of P53 protein expression and DNA content in paraffin-embedded fissue from bronchial carcinomas.Cytometry,1991,12:438
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7 Mercer WE,Shields MT,Lin D,et al. Growth suppression induced by wild-type P53 protein is accompanied by selective down-regulation of proliferating cell nuclear antigen expression.Proc Natl Acad Sci USA,1991,88:1958
8 Ebina M,Steinberg SM,Mulshine JL,et al. Relationship of P53 overexpression and upregulation of proliferating cell nuclear antigen with the clinical course of non-small cell lung cancer.Cancer Res,1994,54:2496
(收稿：1998-05-20修回：1998-09-21), 百拇医药