颊粘膜鳞癌细胞凋亡与临床病理特征及预后的关系
作者：江宏兵 廖小宜 李芃
单位：江宏兵(安徽芜湖皖南医学院戈矶山医院口腔颌面外科，241001)；廖小宜(华西医科大学口腔医学院)；李芃(华西医科大学口腔医学院)
关键词：细胞凋亡；颊；粘膜；鳞状细胞癌；病理特征；预后
实用口腔医学杂志000116 摘 要：目的：研究颊粘膜鳞癌细胞凋亡发生情况，并分析其与临床病理特征及预后的关系。方法：采用末端脱氧核苷酰转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞，计算凋亡指数。结果：本组34例颊癌标本均有凋亡细胞发生，凋亡指数范围为0.12～0.92，均值0.38，凋亡指数与病理学分级之间有关(P<0.01)，而与临床分期及颈淋巴结转移无统计学意义(P>0.05)；生存率单因素分析未能揭示凋亡指数高低影响颊癌预后(P>0.05)。结论：颊癌细胞凋亡的发生与分化恶性程度有关，但凋亡指数不能作为颊癌的预后指标。
, http://www.100md.com
分类号：R739.85 文献标识码：A
文章编号：1001-3733(2000)01-0049-03
Clinical significance of apoptosis in buccal mucosa squamous cell carcinoma
Jiang Hongbin Liao Xiaoyi Li Peng.
(Department of Stomatology, Affiliated Hospital of Wannan Medical College,Wuhu 241001)
Abstract：Objective：To study the relation between apoptosis and clinical pathological characteristics and prognosis of buccal mucosa squamous cell carcinoma(BMSC).Methods:Apoptotic cells were detected by terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) in 34 BMSC cases; the percentages of apoptotic cells among tumor cells were calculated as apoptotic index(AI).Results: Apoptosis occured in 100% of the cases. AI was 0.38 and was significantly correlated with pathological grade(P>0.01), but not with clinical stage and neck lymph node metastasis(P<0.05). In survival analysis, no correlation were found between AI and prognosis of BMSC(P>0.05). Conclusion:The incidence of apoptosis is related to the malignant degree of BMSC, however, AI may has no prognostic value.
, 百拇医药
Key words：Apoptosis;Cheek; Mucous membrane; Squamous cell carcinoma; Pathological characteristics; Prognosis▲
细胞凋亡不同于细胞坏死，是由基因编程控制的细胞主动死亡形式，又称程序化细胞死亡(programmed cell death)。众多的研究表明，细胞凋亡与肿瘤的发生发展密切相关，探讨肿瘤细胞凋亡发生与临床病理特征的关系及其在预后中的意义一直倍受关注，但在不同部位肿瘤的研究中存在着不同的观点〔1～3〕。本研究运用原位DNA断裂位点末端标记法辨别凋亡细胞，计算凋亡指数，考察颊粘膜鳞癌细胞凋亡发生与其临床分期、颈淋巴结转移及病理学分级之间的关系，并分析了细胞凋亡对颊癌预后的影响。
1 材料与方法
1.1 研究对象
, 百拇医药
选取1987～1990年间经病理明确诊断为颊粘膜鳞癌的住院患者共计34例，所有患者均经手术治疗，临床及随访资料完整，入院前常规行活组织检查。详细记录肿瘤的部位、大小、临床分期、颈淋巴结转移及病理学分级等临床病理资料以及随访情况(主要临床及病理资料见表1)，其中，颈淋巴结转移是指手术后经病理证实者，随访7～10年，18例死于局部复发及颈淋巴转移。
1.2 实验标本
将病理科存档的上述34例患者的活检蜡块制成5 μm厚切片2张，分别作凋亡细胞标记及HE染色。
1.3 原位凋亡细胞染色(TUNEL法)
所用试剂盒为德国宝灵曼公司产品，基本染色步骤如下：石蜡切片于二甲苯中脱蜡；梯度酒精中依次水化；20 g/L蛋白酶K 37 ℃下消化30 min；配制含末端脱氧核苷酸转移酶(I液)和荧光素标记的dUTP(Ⅱ液)混合反应液，加入后37 ℃孵育1 h；再滴加连接碱性磷酸酶的抗荧光素抗体37 ℃下孵育30 min；坚固红呈色；苏木素轻衬染，甘油封片。上述各步骤完成后均经0.01 mol/L PBS洗涤3 min，共3次。实验中同时设不加TUNEL反应Ⅰ液的阴性对照。
, 百拇医药
1.4 细胞凋亡指数(apoptotic index,AI)测定
每张切片选取5个阳性染色最明显的高倍视野(×400)，计数500个肿瘤细胞中阳性细胞所占的百分比，排除成片状细胞染色的坏死区，来源于同一个细胞的多个凋亡小体仅作一个目标记数。
1.5 统计方法
临床分期、颈淋巴结转移以及病理学分级与凋亡指数的关系采用秩和检验。生存率资料的分析应用Kaplan-Meier法作生存曲线，以log-rank进行统计学处理。
2 结 果
2.1 颊粘膜鳞癌细胞凋亡的形态学特征
原位DNA断裂点标记法可将颊癌凋亡细胞及其形成的凋亡小体同周围细胞明显地区别开来，呈特征性红色着色，染色定位于细胞核，浓缩的核染色质可见到裂解现象，并形成凋亡小体，凋亡细胞及凋亡小体散在分布于颊癌组织中(图1，2)。
, 百拇医药
图1 颊癌凋亡细胞呈特异性红色着色，胞核固缩(TUNEL染色，苏木素衬染，×100)(箭头示)
图2 颊癌凋亡细胞核崩解，形成凋亡小体(TUNEL染色，苏木素衬染，×100)(箭头示)
图3 颊癌凋亡指数与病理学分级
2.2 细胞凋亡指数与颊癌临床病理特征的关系
34例颊粘膜鳞癌均有凋亡细胞的阳性着色，凋亡指数(AI)范围为0.12～0.92，平均AI为0.38。在不同的TNM分期、病理学分级以及有无颈淋巴结转移组中AI分布范围见表1。按各样本AI值大小编秩次，分别对AI与临床分期、有无颈淋巴结转移以及病理学分级的关系进行统计学分析，结果发现，颊癌细胞凋亡发生率与TNM分期、有无颈淋巴结转移无关(P>0.05)，而与病理学分级之间有统计学意义(P<0.01)，颊癌恶性程度越高其凋亡发生率越高(图3)。
, 百拇医药
图4 两组颊癌患者的生存率曲线
表1 本组患者的主要临床病理资料与凋亡指数
病例数
构成比(%)
AI范围
AI均值
TNM临床分期
Ⅰ～Ⅱ期
5
14.7
0.16～0.56
0.35
, 百拇医药
Ⅲ期
8
23.5
0.18～0.70
0.33
Ⅳ期
21
61.8
0.12～0.92
0.40
病理学分级*
Ⅰ级
18
, 百拇医药
52.9
0.12～0.40
0.25
Ⅱ级
12
35.3
0.28～0.68
0.45
Ⅲ级
4
11.8
0.52～0.92
0.73
, http://www.100md.com
颈淋巴结转移
阳性
12
35.3
0.15～0.70
0.39
阴性
22
64.7
0.12～0.92
0.37
*经秩和检验P<0.01
2.3 颊癌凋亡发生率与其预后(生存率)关系分析
, http://www.100md.com
根据各样本凋亡指数的大小将34例颊癌患者的随访资料分为两组，即高凋亡指数组(AI≥0.38)和低凋亡指数组(AI<0.38)。以Kaplan-Meier法计算生存率并作生存率曲线，如图4示，不同凋亡指数组间的生存率无明显差异。进一步对资料进行对数秩检验(表2)，P>0.05，说明颊癌细胞凋亡发生率高低与其预后无关。
表2 颊癌生存率比较对数秩检验总结表 组别
观察死亡数
理论数
P值
AI<0.38
9
10.38
>0.05
, 百拇医药
AI≥0.38
9
7.62
3 讨 论
当细胞进入凋亡过程，早期便出现双链DNA于核小体连接处断裂，形成约180bp的DNA片段以及游离的O′端。在适宜的温度下利用末端脱氧核苷酸转移酶将连接有荧光素的dUTP结合到断裂DNA的3′端，再以抗荧光素抗体按免疫细胞化学方法加以显色，该法称为TUNEL法。不仅可于原位观察组织中凋亡细胞的发生位置和分布特点，而且具备早期准确显示凋亡细胞形态特征之优点。相比之下，HE染色往往缺乏直观性，计数时容易忽略早期形态不典型的凋亡细胞，计算的凋亡指数值偏低〔4〕。我们利用TUNEL法观察到颊癌凋亡细胞的形态学特征，特异性着色的颊癌凋亡细胞散在分布，胞核固缩、裂解，形成凋亡小体。因此，原位DNA缺口末端标记为细胞凋亡的组织学研究提供了较好的方法。
, 百拇医药
本研究通过计算凋亡指数反映颊癌组织中癌细胞凋亡发生率，结果发现颊癌凋亡指数高低与其病理学分级有关，与文献报道的结论相似〔1〕。颊癌恶性度越高其凋亡发生率相应增加，这一结果似乎与肿瘤的发展规律相矛盾，因为理论上认为，恶性程度高的肿瘤其凋亡发生率应该较低方能体现该肿瘤生长旺盛之特征。但近来的研究证实，某些重性肿瘤中，肿瘤细胞凋亡与增殖呈正相关关系，即凋亡指数高的肿瘤中其增殖指数也高，凋亡指数不仅反映了肿瘤细胞丧失情况，同时也反映其增殖情况〔5,6〕。因此，在恶性度较高的颊癌中细胞凋亡发生率较高，癌细胞增殖活性可能也相应地增强。细胞凋亡是多细胞生命体在生理或病理条件下自主发生的一种死亡形式，与细胞增殖一起构成平衡体系，当肿瘤生长至一定程度时，肿瘤细胞增殖和死亡维持相对平衡，增殖快、恶性度高的肿瘤细胞凋亡势必会增加〔7〕。在肿瘤发展过程中，凋亡与增殖均为异常遗传编程事件，发生与否取决于各自的相关促进因子的参与，特别是有关凋亡调控基因的研究成为关注的焦点。
TNM临床分期体现了肿瘤的不同发展阶段，而颈淋巴结转移是颊癌发展过程中的重要转归，直接关系到颊癌的预后。本文结果未能揭示细胞凋亡与临床分期以及颈淋巴结转移之间的相关关系，说明颊癌细胞凋亡发生可能更多地依赖于癌细胞自身的遗传性控制，与分化程度等内在因素关系更为密切，而与肿瘤的发展阶段无关。另外，细胞凋亡的发生是一个瞬时变化的过程，凋亡细胞最终以凋亡小体的形式被组织中的相邻巨噬细胞所清除，整个过程大约在几小时内便告完成，限于方法学上的静态特征只能检测某一时刻凋亡发生情况。因此，研究肿瘤发展动态进程中细胞凋亡规律有待进行检测方法的探索。
, 百拇医药
有关凋亡发生率与肿瘤预后的关系目前存在两种说法：一种观点认为，凋亡率高者肿瘤发展速度慢，预后较好；另一种观点则认为凋亡率高者预后较差。国内学者对乳腺癌的研究发现，凋亡指数高的病例，无病生存率和总生存率均优于凋亡指数低的病例，但多因素分析未能提示凋亡指数是一个独立的预后指标〔3〕。本研究结果表明，凋亡指数高低不能影响颊癌的预后，当然，颊癌细胞凋亡与其预后的关系尚需进一步大样本研究。
参考文献：
[1]Todd D,Yang G,Brown RW,et al.Apoptosis in renal cell carcinoma.Human pathol,1996,27(10):1012
[2]King ED,Matteson J,Jacobs SC,et al.Incidence of apoptosis,cell proliferation and bcl-2 expression in transitional cell carcinoma of the bladder:Association with tumor progression.J Urology,1996,155(1):316
, http://www.100md.com
[3]吴炅,邵志敏,江明,等.运用原位DNA末端标记法研究细胞凋亡对乳腺癌预后的影响.中华肿瘤杂志,1997,19(2):100
[4]Tatebe S,Ishida M,Kasagin,et al.Apoptosis occurs more frequently in metastatic foci than in primary lesions of human colorectal carcinomas.Int J cancer,1996,65(1):173
[5]Oneill AJ,Staunton MJ,Gaffney EF.Apoptosis occurs independently of bcl-2 and P53 over-expression in non-small cell lung carcinoma.Histopathology,1996,29(1):45
, 百拇医药 [6]Basolo F,Pollina L,Fontanini G,et al.Apoptosis and proliferation in thyroid carcinoma:Correlation with bcl-2 and P53 protein expression.Br J cancer,1997,75(40):537
[7]Lipponen P,Aaltomaa S.Apoptosis in bladder cancer as related to standard prognostic factors and prognosis.J Pathol,1994,173(2):333
收稿日期：1998-09-21, 百拇医药
单位：江宏兵(安徽芜湖皖南医学院戈矶山医院口腔颌面外科，241001)；廖小宜(华西医科大学口腔医学院)；李芃(华西医科大学口腔医学院)
关键词：细胞凋亡；颊；粘膜；鳞状细胞癌；病理特征；预后
实用口腔医学杂志000116 摘 要：目的：研究颊粘膜鳞癌细胞凋亡发生情况，并分析其与临床病理特征及预后的关系。方法：采用末端脱氧核苷酰转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞，计算凋亡指数。结果：本组34例颊癌标本均有凋亡细胞发生，凋亡指数范围为0.12～0.92，均值0.38，凋亡指数与病理学分级之间有关(P<0.01)，而与临床分期及颈淋巴结转移无统计学意义(P>0.05)；生存率单因素分析未能揭示凋亡指数高低影响颊癌预后(P>0.05)。结论：颊癌细胞凋亡的发生与分化恶性程度有关，但凋亡指数不能作为颊癌的预后指标。
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分类号：R739.85 文献标识码：A
文章编号：1001-3733(2000)01-0049-03
Clinical significance of apoptosis in buccal mucosa squamous cell carcinoma
Jiang Hongbin Liao Xiaoyi Li Peng.
(Department of Stomatology, Affiliated Hospital of Wannan Medical College,Wuhu 241001)
Abstract：Objective：To study the relation between apoptosis and clinical pathological characteristics and prognosis of buccal mucosa squamous cell carcinoma(BMSC).Methods:Apoptotic cells were detected by terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) in 34 BMSC cases; the percentages of apoptotic cells among tumor cells were calculated as apoptotic index(AI).Results: Apoptosis occured in 100% of the cases. AI was 0.38 and was significantly correlated with pathological grade(P>0.01), but not with clinical stage and neck lymph node metastasis(P<0.05). In survival analysis, no correlation were found between AI and prognosis of BMSC(P>0.05). Conclusion:The incidence of apoptosis is related to the malignant degree of BMSC, however, AI may has no prognostic value.
, 百拇医药
Key words：Apoptosis;Cheek; Mucous membrane; Squamous cell carcinoma; Pathological characteristics; Prognosis▲
细胞凋亡不同于细胞坏死，是由基因编程控制的细胞主动死亡形式，又称程序化细胞死亡(programmed cell death)。众多的研究表明，细胞凋亡与肿瘤的发生发展密切相关，探讨肿瘤细胞凋亡发生与临床病理特征的关系及其在预后中的意义一直倍受关注，但在不同部位肿瘤的研究中存在着不同的观点〔1～3〕。本研究运用原位DNA断裂位点末端标记法辨别凋亡细胞，计算凋亡指数，考察颊粘膜鳞癌细胞凋亡发生与其临床分期、颈淋巴结转移及病理学分级之间的关系，并分析了细胞凋亡对颊癌预后的影响。
1 材料与方法
1.1 研究对象
, 百拇医药
选取1987～1990年间经病理明确诊断为颊粘膜鳞癌的住院患者共计34例，所有患者均经手术治疗，临床及随访资料完整，入院前常规行活组织检查。详细记录肿瘤的部位、大小、临床分期、颈淋巴结转移及病理学分级等临床病理资料以及随访情况(主要临床及病理资料见表1)，其中，颈淋巴结转移是指手术后经病理证实者，随访7～10年，18例死于局部复发及颈淋巴转移。
1.2 实验标本
将病理科存档的上述34例患者的活检蜡块制成5 μm厚切片2张，分别作凋亡细胞标记及HE染色。
1.3 原位凋亡细胞染色(TUNEL法)
所用试剂盒为德国宝灵曼公司产品，基本染色步骤如下：石蜡切片于二甲苯中脱蜡；梯度酒精中依次水化；20 g/L蛋白酶K 37 ℃下消化30 min；配制含末端脱氧核苷酸转移酶(I液)和荧光素标记的dUTP(Ⅱ液)混合反应液，加入后37 ℃孵育1 h；再滴加连接碱性磷酸酶的抗荧光素抗体37 ℃下孵育30 min；坚固红呈色；苏木素轻衬染，甘油封片。上述各步骤完成后均经0.01 mol/L PBS洗涤3 min，共3次。实验中同时设不加TUNEL反应Ⅰ液的阴性对照。
, 百拇医药
1.4 细胞凋亡指数(apoptotic index,AI)测定
每张切片选取5个阳性染色最明显的高倍视野(×400)，计数500个肿瘤细胞中阳性细胞所占的百分比，排除成片状细胞染色的坏死区，来源于同一个细胞的多个凋亡小体仅作一个目标记数。
1.5 统计方法
临床分期、颈淋巴结转移以及病理学分级与凋亡指数的关系采用秩和检验。生存率资料的分析应用Kaplan-Meier法作生存曲线，以log-rank进行统计学处理。
2 结 果
2.1 颊粘膜鳞癌细胞凋亡的形态学特征
原位DNA断裂点标记法可将颊癌凋亡细胞及其形成的凋亡小体同周围细胞明显地区别开来，呈特征性红色着色，染色定位于细胞核，浓缩的核染色质可见到裂解现象，并形成凋亡小体，凋亡细胞及凋亡小体散在分布于颊癌组织中(图1，2)。
, 百拇医药
图1 颊癌凋亡细胞呈特异性红色着色，胞核固缩(TUNEL染色，苏木素衬染，×100)(箭头示)
图2 颊癌凋亡细胞核崩解，形成凋亡小体(TUNEL染色，苏木素衬染，×100)(箭头示)
图3 颊癌凋亡指数与病理学分级
2.2 细胞凋亡指数与颊癌临床病理特征的关系
34例颊粘膜鳞癌均有凋亡细胞的阳性着色，凋亡指数(AI)范围为0.12～0.92，平均AI为0.38。在不同的TNM分期、病理学分级以及有无颈淋巴结转移组中AI分布范围见表1。按各样本AI值大小编秩次，分别对AI与临床分期、有无颈淋巴结转移以及病理学分级的关系进行统计学分析，结果发现，颊癌细胞凋亡发生率与TNM分期、有无颈淋巴结转移无关(P>0.05)，而与病理学分级之间有统计学意义(P<0.01)，颊癌恶性程度越高其凋亡发生率越高(图3)。
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图4 两组颊癌患者的生存率曲线
表1 本组患者的主要临床病理资料与凋亡指数
病例数
构成比(%)
AI范围
AI均值
TNM临床分期
Ⅰ～Ⅱ期
5
14.7
0.16～0.56
0.35
, 百拇医药
Ⅲ期
8
23.5
0.18～0.70
0.33
Ⅳ期
21
61.8
0.12～0.92
0.40
病理学分级*
Ⅰ级
18
, 百拇医药
52.9
0.12～0.40
0.25
Ⅱ级
12
35.3
0.28～0.68
0.45
Ⅲ级
4
11.8
0.52～0.92
0.73
, http://www.100md.com
颈淋巴结转移
阳性
12
35.3
0.15～0.70
0.39
阴性
22
64.7
0.12～0.92
0.37
*经秩和检验P<0.01
2.3 颊癌凋亡发生率与其预后(生存率)关系分析
, http://www.100md.com
根据各样本凋亡指数的大小将34例颊癌患者的随访资料分为两组，即高凋亡指数组(AI≥0.38)和低凋亡指数组(AI<0.38)。以Kaplan-Meier法计算生存率并作生存率曲线，如图4示，不同凋亡指数组间的生存率无明显差异。进一步对资料进行对数秩检验(表2)，P>0.05，说明颊癌细胞凋亡发生率高低与其预后无关。
表2 颊癌生存率比较对数秩检验总结表 组别
观察死亡数
理论数
P值
AI<0.38
9
10.38
>0.05
, 百拇医药
AI≥0.38
9
7.62
3 讨 论
当细胞进入凋亡过程，早期便出现双链DNA于核小体连接处断裂，形成约180bp的DNA片段以及游离的O′端。在适宜的温度下利用末端脱氧核苷酸转移酶将连接有荧光素的dUTP结合到断裂DNA的3′端，再以抗荧光素抗体按免疫细胞化学方法加以显色，该法称为TUNEL法。不仅可于原位观察组织中凋亡细胞的发生位置和分布特点，而且具备早期准确显示凋亡细胞形态特征之优点。相比之下，HE染色往往缺乏直观性，计数时容易忽略早期形态不典型的凋亡细胞，计算的凋亡指数值偏低〔4〕。我们利用TUNEL法观察到颊癌凋亡细胞的形态学特征，特异性着色的颊癌凋亡细胞散在分布，胞核固缩、裂解，形成凋亡小体。因此，原位DNA缺口末端标记为细胞凋亡的组织学研究提供了较好的方法。
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本研究通过计算凋亡指数反映颊癌组织中癌细胞凋亡发生率，结果发现颊癌凋亡指数高低与其病理学分级有关，与文献报道的结论相似〔1〕。颊癌恶性度越高其凋亡发生率相应增加，这一结果似乎与肿瘤的发展规律相矛盾，因为理论上认为，恶性程度高的肿瘤其凋亡发生率应该较低方能体现该肿瘤生长旺盛之特征。但近来的研究证实，某些重性肿瘤中，肿瘤细胞凋亡与增殖呈正相关关系，即凋亡指数高的肿瘤中其增殖指数也高，凋亡指数不仅反映了肿瘤细胞丧失情况，同时也反映其增殖情况〔5,6〕。因此，在恶性度较高的颊癌中细胞凋亡发生率较高，癌细胞增殖活性可能也相应地增强。细胞凋亡是多细胞生命体在生理或病理条件下自主发生的一种死亡形式，与细胞增殖一起构成平衡体系，当肿瘤生长至一定程度时，肿瘤细胞增殖和死亡维持相对平衡，增殖快、恶性度高的肿瘤细胞凋亡势必会增加〔7〕。在肿瘤发展过程中，凋亡与增殖均为异常遗传编程事件，发生与否取决于各自的相关促进因子的参与，特别是有关凋亡调控基因的研究成为关注的焦点。
TNM临床分期体现了肿瘤的不同发展阶段，而颈淋巴结转移是颊癌发展过程中的重要转归，直接关系到颊癌的预后。本文结果未能揭示细胞凋亡与临床分期以及颈淋巴结转移之间的相关关系，说明颊癌细胞凋亡发生可能更多地依赖于癌细胞自身的遗传性控制，与分化程度等内在因素关系更为密切，而与肿瘤的发展阶段无关。另外，细胞凋亡的发生是一个瞬时变化的过程，凋亡细胞最终以凋亡小体的形式被组织中的相邻巨噬细胞所清除，整个过程大约在几小时内便告完成，限于方法学上的静态特征只能检测某一时刻凋亡发生情况。因此，研究肿瘤发展动态进程中细胞凋亡规律有待进行检测方法的探索。
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有关凋亡发生率与肿瘤预后的关系目前存在两种说法：一种观点认为，凋亡率高者肿瘤发展速度慢，预后较好；另一种观点则认为凋亡率高者预后较差。国内学者对乳腺癌的研究发现，凋亡指数高的病例，无病生存率和总生存率均优于凋亡指数低的病例，但多因素分析未能提示凋亡指数是一个独立的预后指标〔3〕。本研究结果表明，凋亡指数高低不能影响颊癌的预后，当然，颊癌细胞凋亡与其预后的关系尚需进一步大样本研究。
参考文献：
[1]Todd D,Yang G,Brown RW,et al.Apoptosis in renal cell carcinoma.Human pathol,1996,27(10):1012
[2]King ED,Matteson J,Jacobs SC,et al.Incidence of apoptosis,cell proliferation and bcl-2 expression in transitional cell carcinoma of the bladder:Association with tumor progression.J Urology,1996,155(1):316
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[3]吴炅,邵志敏,江明,等.运用原位DNA末端标记法研究细胞凋亡对乳腺癌预后的影响.中华肿瘤杂志,1997,19(2):100
[4]Tatebe S,Ishida M,Kasagin,et al.Apoptosis occurs more frequently in metastatic foci than in primary lesions of human colorectal carcinomas.Int J cancer,1996,65(1):173
[5]Oneill AJ,Staunton MJ,Gaffney EF.Apoptosis occurs independently of bcl-2 and P53 over-expression in non-small cell lung carcinoma.Histopathology,1996,29(1):45
, 百拇医药 [6]Basolo F,Pollina L,Fontanini G,et al.Apoptosis and proliferation in thyroid carcinoma:Correlation with bcl-2 and P53 protein expression.Br J cancer,1997,75(40):537
[7]Lipponen P,Aaltomaa S.Apoptosis in bladder cancer as related to standard prognostic factors and prognosis.J Pathol,1994,173(2):333
收稿日期：1998-09-21, 百拇医药