抗震颤麻痹新药布地品对大鼠多巴胺释放的药效研究
作者：杨正明 杨晓云 Earl CD Oertel W
单位：(同济医科大学附属同济医院神经外科，武汉 430030)
关键词：布地品；多巴胺释放；药效学
抗震颤麻痹新药布地品对大鼠多巴 胺释放的药效研究 摘要 目的：研究抗震颤麻痹新药布地品(budipine)对电刺激大鼠前脑正中束(MFB)引起尾-壳核(CPu)内多巴胺释放的药效，探讨布地品的作用机制。方法：24只大鼠等分3组，分别ip 30 mg/kg 布地品以及等容量的0.1 mol/L磷酸缓冲液(为cremophor的溶剂)和10%cremophor(为布地品的溶剂)。采用快速循环伏安计测定法(FCV)测定注射药物及对照剂后电刺激MFB引起同侧CPu内多巴胺释放量的变化。结果：将每组大鼠注射药物或对照剂前电刺激FMB引起CPu内多巴胺释放的量定为100%,注射60 min后,布地品组多巴胺释放量减至为(34.2±22.5)%,0.1 mol/L磷酸缓冲液组减至为(69.0±18.9)%,10% cremophor组减至为(70.6±28.8)%,布地品组的多巴胺释放量较对照组明显减少。结论：布地品对电刺激大鼠MFB引起CPu内多巴胺释放有明显抑制作用，临床应用该药应考虑与多巴胺替代剂或多巴胺释放剂联用。
, http://www.100md.com
PHARMACODYNAMICS STUDY OF BUDIPINE IN RATS
Yang Zhengming,Yang Xiaoyun,Earl CD,et al.
(Department of Neurosurgery,Tongji Hospital,Tongji Medical University,Wuhan 430030)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the effect of budipine on dopamine overflow in caudatus putamen(CPu)of rats after electrical stimulation of median forebrain bundle(MFB)and its mechanism.METHODS:Twenty-four rats were equally divided to receive budipine in a dose of 30 mg/kg by intraperitoneal injection,equal volume of 0.1 mol/L phosphate buffer (solvent for 10% cremophor)or equal volume of 10% cremophor(solvent for budipine)and the dopamine overflow evoked by electrical stimulation in unilateral CPu in each group was measured by fast cyclic voltammetry(FCV).RESULTS:The dopamine overflow induced by electrical stimulation after 60 min of medication decreased to (34.22±22.5)%，(69.0±18.9)%，and (70.6±28.8)% of that of before medication in budipine,0.1 mol/L phosphate buffer,and cremophor group respectively.CONCLUSION:Budipine blocks significantly dopamine overflow in CPu after electrical stimulation of MFB in rats.
, 百拇医药
KEY WORDS Budipine；Dopamine；Pharmacodynamics
布地品(budipine)是近10年来才发现的抗震颤麻痹新药，动物实验及临床研究表明，它具有较强的抗震颤作用，但其详尽作用机制尚不清楚。
材料和方法
1 材料
健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠(Charles River GmbH, Sulzfeld,德国)共24只,体重270～330 g,均分为3组。
2 方法
2.1 动物麻醉 7%水合氯醛400 mg/kg，ip，麻醉成功后头部剃毛，用70%酒精消毒。
, http://www.100md.com 2.2 立体定向手术 将大鼠固定在立体定向手术台上(David Kopf,美国),正中矢状切开头皮, 剥离骨膜,调节门齿牙托高度,使大鼠前、后囱门处于同一水平位置。立体定位座标以前囱中央为参考点,其前方用“+AP”表示,后方用“-AP”;前囱右侧用“+L”表示,左侧用“-L”;硬脑膜下深度用“-V”。大鼠右侧尾-壳状核(caudatus-putamen，CPu)和前脑正中束(median forbrain bundle,MFB)立体定位座标分别为:AP=+1.1 mm, L=+2.8 mm, V=-5.5 mm和AP=-4.3 mm,L=+1.5 mm,V=-6.5 mm。采用显微操作, 用牙科钻分别钻开MFB和CPu上面的颅骨,在上述两骨孔间另钻一孔,用于植入快速循环伏安计测定法(fast cyclic voltammetry, FCV)的参考电极于脑表面。再将FCV的工作电极和刺激电极分别垂直插入CPu和MFB。
2.3 FCV测定多巴胺释放[1] FCV系统(PD Systems, Surrey, 英国)通过向工作电极连续输加循环波动于-1.0 V～+1.4V的三角形可变电压,变化速度为480 V/s,通过电刺激MFB引起CPu内多巴胺释放，在工作电极电压为+600 mV时，多巴胺在其碳纤维上发生氧化还原反应,产生微量可测电流,据电流量的大小可推算出多巴胺的释放量。MFB的刺激电流参数为：刺激强度0.8 mA，脉冲频率60 Hz，刺激时间350 μs，每间隔5 min刺激一次。
, 百拇医药
2.4 注射药物及对照剂 每只大鼠空白对照测定7次多巴胺释放后(即35 min后),分别ip 30 mg/kg 布地品(以10%cremophor为溶剂)和等容量0.1 mol/L磷酸缓冲液(PBS)和10%cremophor(以0.1 mol/L PBS为溶剂)。在刺激电流参数不变的条件下，继续测定多巴胺释放60 min,了解多巴胺释放的动态变化。
3 统计学处理
结果经t检验。多巴胺释放量以平均值±标准误差表示，采用单因变量分析法进行统计学处理。
结 果
将腹腔注射布地品及对照溶剂前所测的多巴胺量定为100%,60 min后,布地品组CPu内多巴胺释放量减至为注射前的(34.2±22.2)%,PBS组和10%cremophor组分别为(69.0±18.9)%和(70.6±28.8)%，见图1。3组动物在注射60 min后多巴胺释放量均有不同程度减少,经统计学处理,注射前、后并无显著性差异(其中布地品组P＝0.95,其他两个对照组P值均为0.98,n=8,单因变量分析)。但布地品组较对照组的多巴胺释放量明显减少,提示布地品对多巴胺释放存在一定的抑制作用。
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图1 注射前后多巴胺释放量变化曲线图
讨 论
布地品为1-叔丁基-4，4-二苯哌啶，是4,4-二苯哌啶的衍生物，对中枢神经系统具有许多特殊作用，最突出的是对各种震颤有明显抑制作用，因此人们将它用于帕金森病的治疗,特别适用于以震颤为主的帕金森病例，其抗震颤作用强于金刚烷胺和左旋多巴[2]。实验证明,它具有极轻度的抗乙酰胆碱和抗组胺以及抗单胺氧化酶B的作用,但这些均不足以解释其对中枢神经系统的特殊作用。
最新研究表明，左旋谷氨酸对帕金森病的发病有重要作用，向大鼠基底节注射微量左旋谷氨酸即可诱发帕金森病样发作[3],纹状体内多巴胺含量减少可导致下丘脑左旋谷氨酸释放增加,这也是帕金森病的发病原因之一。因此,应用谷氨酸拮抗剂可作为治疗帕金森氏病的新方法。有人证实，布地品有轻度的谷氨酸拮抗作用[4]；同时也有人证明,左旋谷氨酸对多巴胺释放有促进作用,且该作用可为谷氨酸拮抗剂PK62124所抑制[5]。综上所述,结合本研究结果,布地品对多巴胺释放有抑制作用。
, http://www.100md.com
Jacktisch等[6]发现布地品对活体外电刺激家兔脑组织片引起多巴胺释放有明显抑制作用，且统计学处理发现有显著性差异。本研究虽发现注射布地品 60 min后,大鼠活体内多巴胺释放量有明显减少，但统计学上未检出明显差异，该结果在一定程度上与Jaktisch等人的研究结果一致,本实验结果之所以没产生极显著差异的原因可能与本研究样本较少以及动物品种和研究方法不同有关。此外，布地品组多巴胺释放量较对照组明显减少，从另一方面排除检测系统误差，肯定布地品对多巴胺释放有一定的抑制作用。Biffs等[7]发现,布地品能增加L-dopa所致的多巴胺释放。这就提示我们，在应用布地品治疗帕金森病时，可考虑与L-dopa联用，以减轻布地品对多巴胺释放的抑制效应，并提高布地品及L-dopa的治疗效果。
杨晓云 中国人民解放军第457医院内科
Earl CD Oertel W 德国慕尼黑大学生理研究所
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参考文献
1 Stamford JA,Crespi F,Mardsen CA.In vivo voltammetric methods for monitoring monoamine release and metabolism.In:Stamfort JA,eds.Monitoring neuronal activity:a practical approach.New York,Tokyo:Oxford IRL,1992.113～145
2 Iizuka J,Fischer R.Beeinflussung des parkinson-tremor durch budipin.Nervenarzt,1986,57(2)∶184
3 Klockhgether T,Turski L.NMDA antagonists potential antiparkinsonian actions of L-dopa in monoamine-depleted rats.Ann Neurol,1990,28(4)∶539
, http://www.100md.com
4 Klokgethre T,Loschmann PA,Wullner U.Neue Anstze zur medikamentosen behandlung der parkinsonen krankheit.Aktuel Neurologia,1995,22(3)∶217
5 Cheramy A,Romo R,Glowinski J.Role of corticostriatal glutamatergic neurons in the presynaptic control of dopamine release.In:Sandler M,eds.Neurotranmitter interactions in the basal ganglia. New York,London:Springer,1987.133～141
6 Jacktisch R,Huang HY,Reinann W,et al.Effects of the antiparkinsonian drug budipine on neurotransmitter release in central nervous system tissue in vitro.J Pharm Exp Ther,1993,264(2)∶889
7 Biffs CS,Fischer A,Staar MA.The antiparkinsonian drug budipine stimulates the activity of aromatic L-amino acid decarboxylase and enhances L-DOPA-induced dopamine release in rat substantia nigra.Synapse,1998，30(3)∶309
(收稿：1998-06-15 修回：1998-12-22), 百拇医药
单位：(同济医科大学附属同济医院神经外科，武汉 430030)
关键词：布地品；多巴胺释放；药效学
抗震颤麻痹新药布地品对大鼠多巴 胺释放的药效研究 摘要 目的：研究抗震颤麻痹新药布地品(budipine)对电刺激大鼠前脑正中束(MFB)引起尾-壳核(CPu)内多巴胺释放的药效，探讨布地品的作用机制。方法：24只大鼠等分3组，分别ip 30 mg/kg 布地品以及等容量的0.1 mol/L磷酸缓冲液(为cremophor的溶剂)和10%cremophor(为布地品的溶剂)。采用快速循环伏安计测定法(FCV)测定注射药物及对照剂后电刺激MFB引起同侧CPu内多巴胺释放量的变化。结果：将每组大鼠注射药物或对照剂前电刺激FMB引起CPu内多巴胺释放的量定为100%,注射60 min后,布地品组多巴胺释放量减至为(34.2±22.5)%,0.1 mol/L磷酸缓冲液组减至为(69.0±18.9)%,10% cremophor组减至为(70.6±28.8)%,布地品组的多巴胺释放量较对照组明显减少。结论：布地品对电刺激大鼠MFB引起CPu内多巴胺释放有明显抑制作用，临床应用该药应考虑与多巴胺替代剂或多巴胺释放剂联用。
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PHARMACODYNAMICS STUDY OF BUDIPINE IN RATS
Yang Zhengming,Yang Xiaoyun,Earl CD,et al.
(Department of Neurosurgery,Tongji Hospital,Tongji Medical University,Wuhan 430030)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the effect of budipine on dopamine overflow in caudatus putamen(CPu)of rats after electrical stimulation of median forebrain bundle(MFB)and its mechanism.METHODS:Twenty-four rats were equally divided to receive budipine in a dose of 30 mg/kg by intraperitoneal injection,equal volume of 0.1 mol/L phosphate buffer (solvent for 10% cremophor)or equal volume of 10% cremophor(solvent for budipine)and the dopamine overflow evoked by electrical stimulation in unilateral CPu in each group was measured by fast cyclic voltammetry(FCV).RESULTS:The dopamine overflow induced by electrical stimulation after 60 min of medication decreased to (34.22±22.5)%，(69.0±18.9)%，and (70.6±28.8)% of that of before medication in budipine,0.1 mol/L phosphate buffer,and cremophor group respectively.CONCLUSION:Budipine blocks significantly dopamine overflow in CPu after electrical stimulation of MFB in rats.
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KEY WORDS Budipine；Dopamine；Pharmacodynamics
布地品(budipine)是近10年来才发现的抗震颤麻痹新药，动物实验及临床研究表明，它具有较强的抗震颤作用，但其详尽作用机制尚不清楚。
材料和方法
1 材料
健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠(Charles River GmbH, Sulzfeld,德国)共24只,体重270～330 g,均分为3组。
2 方法
2.1 动物麻醉 7%水合氯醛400 mg/kg，ip，麻醉成功后头部剃毛，用70%酒精消毒。
, http://www.100md.com 2.2 立体定向手术 将大鼠固定在立体定向手术台上(David Kopf,美国),正中矢状切开头皮, 剥离骨膜,调节门齿牙托高度,使大鼠前、后囱门处于同一水平位置。立体定位座标以前囱中央为参考点,其前方用“+AP”表示,后方用“-AP”;前囱右侧用“+L”表示,左侧用“-L”;硬脑膜下深度用“-V”。大鼠右侧尾-壳状核(caudatus-putamen，CPu)和前脑正中束(median forbrain bundle,MFB)立体定位座标分别为:AP=+1.1 mm, L=+2.8 mm, V=-5.5 mm和AP=-4.3 mm,L=+1.5 mm,V=-6.5 mm。采用显微操作, 用牙科钻分别钻开MFB和CPu上面的颅骨,在上述两骨孔间另钻一孔,用于植入快速循环伏安计测定法(fast cyclic voltammetry, FCV)的参考电极于脑表面。再将FCV的工作电极和刺激电极分别垂直插入CPu和MFB。
2.3 FCV测定多巴胺释放[1] FCV系统(PD Systems, Surrey, 英国)通过向工作电极连续输加循环波动于-1.0 V～+1.4V的三角形可变电压,变化速度为480 V/s,通过电刺激MFB引起CPu内多巴胺释放，在工作电极电压为+600 mV时，多巴胺在其碳纤维上发生氧化还原反应,产生微量可测电流,据电流量的大小可推算出多巴胺的释放量。MFB的刺激电流参数为：刺激强度0.8 mA，脉冲频率60 Hz，刺激时间350 μs，每间隔5 min刺激一次。
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2.4 注射药物及对照剂 每只大鼠空白对照测定7次多巴胺释放后(即35 min后),分别ip 30 mg/kg 布地品(以10%cremophor为溶剂)和等容量0.1 mol/L磷酸缓冲液(PBS)和10%cremophor(以0.1 mol/L PBS为溶剂)。在刺激电流参数不变的条件下，继续测定多巴胺释放60 min,了解多巴胺释放的动态变化。
3 统计学处理
结果经t检验。多巴胺释放量以平均值±标准误差表示，采用单因变量分析法进行统计学处理。
结 果
将腹腔注射布地品及对照溶剂前所测的多巴胺量定为100%,60 min后,布地品组CPu内多巴胺释放量减至为注射前的(34.2±22.2)%,PBS组和10%cremophor组分别为(69.0±18.9)%和(70.6±28.8)%，见图1。3组动物在注射60 min后多巴胺释放量均有不同程度减少,经统计学处理,注射前、后并无显著性差异(其中布地品组P＝0.95,其他两个对照组P值均为0.98,n=8,单因变量分析)。但布地品组较对照组的多巴胺释放量明显减少,提示布地品对多巴胺释放存在一定的抑制作用。
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图1 注射前后多巴胺释放量变化曲线图
讨 论
布地品为1-叔丁基-4，4-二苯哌啶，是4,4-二苯哌啶的衍生物，对中枢神经系统具有许多特殊作用，最突出的是对各种震颤有明显抑制作用，因此人们将它用于帕金森病的治疗,特别适用于以震颤为主的帕金森病例，其抗震颤作用强于金刚烷胺和左旋多巴[2]。实验证明,它具有极轻度的抗乙酰胆碱和抗组胺以及抗单胺氧化酶B的作用,但这些均不足以解释其对中枢神经系统的特殊作用。
最新研究表明，左旋谷氨酸对帕金森病的发病有重要作用，向大鼠基底节注射微量左旋谷氨酸即可诱发帕金森病样发作[3],纹状体内多巴胺含量减少可导致下丘脑左旋谷氨酸释放增加,这也是帕金森病的发病原因之一。因此,应用谷氨酸拮抗剂可作为治疗帕金森氏病的新方法。有人证实，布地品有轻度的谷氨酸拮抗作用[4]；同时也有人证明,左旋谷氨酸对多巴胺释放有促进作用,且该作用可为谷氨酸拮抗剂PK62124所抑制[5]。综上所述,结合本研究结果,布地品对多巴胺释放有抑制作用。
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Jacktisch等[6]发现布地品对活体外电刺激家兔脑组织片引起多巴胺释放有明显抑制作用，且统计学处理发现有显著性差异。本研究虽发现注射布地品 60 min后,大鼠活体内多巴胺释放量有明显减少，但统计学上未检出明显差异，该结果在一定程度上与Jaktisch等人的研究结果一致,本实验结果之所以没产生极显著差异的原因可能与本研究样本较少以及动物品种和研究方法不同有关。此外，布地品组多巴胺释放量较对照组明显减少，从另一方面排除检测系统误差，肯定布地品对多巴胺释放有一定的抑制作用。Biffs等[7]发现,布地品能增加L-dopa所致的多巴胺释放。这就提示我们，在应用布地品治疗帕金森病时，可考虑与L-dopa联用，以减轻布地品对多巴胺释放的抑制效应，并提高布地品及L-dopa的治疗效果。
杨晓云 中国人民解放军第457医院内科
Earl CD Oertel W 德国慕尼黑大学生理研究所
, http://www.100md.com
参考文献
1 Stamford JA,Crespi F,Mardsen CA.In vivo voltammetric methods for monitoring monoamine release and metabolism.In:Stamfort JA,eds.Monitoring neuronal activity:a practical approach.New York,Tokyo:Oxford IRL,1992.113～145
2 Iizuka J,Fischer R.Beeinflussung des parkinson-tremor durch budipin.Nervenarzt,1986,57(2)∶184
3 Klockhgether T,Turski L.NMDA antagonists potential antiparkinsonian actions of L-dopa in monoamine-depleted rats.Ann Neurol,1990,28(4)∶539
, http://www.100md.com
4 Klokgethre T,Loschmann PA,Wullner U.Neue Anstze zur medikamentosen behandlung der parkinsonen krankheit.Aktuel Neurologia,1995,22(3)∶217
5 Cheramy A,Romo R,Glowinski J.Role of corticostriatal glutamatergic neurons in the presynaptic control of dopamine release.In:Sandler M,eds.Neurotranmitter interactions in the basal ganglia. New York,London:Springer,1987.133～141
6 Jacktisch R,Huang HY,Reinann W,et al.Effects of the antiparkinsonian drug budipine on neurotransmitter release in central nervous system tissue in vitro.J Pharm Exp Ther,1993,264(2)∶889
7 Biffs CS,Fischer A,Staar MA.The antiparkinsonian drug budipine stimulates the activity of aromatic L-amino acid decarboxylase and enhances L-DOPA-induced dopamine release in rat substantia nigra.Synapse,1998，30(3)∶309
(收稿：1998-06-15 修回：1998-12-22), 百拇医药