低分子量肝素对小鼠凝血时间及大鼠静脉血栓形成的影响
作者：马 建 宋 艳 李长龄
单位：(北京医科大学药学院药理教研室，北京 100083)
关键词：低分子量肝素；凝血时间；静脉血栓
低分子量肝素对小鼠凝血时间及大鼠 静脉血栓形成的影响 摘要 目的：通过观察低分子量肝素(LMWH)对小鼠凝血时间及大鼠静脉血栓形成的影响，对其主要药效学进行了研究，并与国外同类产品Clivarin及普通肝素进行了比较。方法：玻片法体外测定小鼠全血凝血时间及大鼠体内静脉血栓形成法。结果：LMWH sc，450,150及50 u/kg可明显延长小鼠全血凝血时间；sc，100，30 u/kg可明显降低大鼠静脉血栓重量。与相同剂量Clivarin比较，二者药效相当；与普通肝素比较，LMWH有效剂量明显低于普通肝素。结论：LMWH具有生物利用度高、抗栓作用强及对凝血系统影响小的特性。
THE EFFECTS OF LOW MOLECULAR WEIGHT HEPARIN ON COAGULATION
, http://www.100md.com
TIME OF MICE AND VENOUS THROMBOSIS OF RATS
Ma Jian,Song Yan,Li Changling
(Department of pharmacology,School of pharmaceutical Sciences,Beijing
Medical University,Beijing 100083)
ABSTRACT OBJECTIVE：Through observation on its coagulation time in mice and venous thrombosis in rats to study the pharmacodynamics of low molecular weight heparin(LMWH).METHODS:The blood coagulation time in mice and venous thrombosis in rats were used as by in vitro method of glass plate.Imported product,Clivarin,and odinary heparin were used as positive controls.RESULTS:The whole blood coagulation time in mice was signiticantly prolonged by LMWH in dosage of 450,150 u/kg and 50 u/kg by sc administration and the weight of venous thrombosis in rats was significantly reduced by LMWH in dosage of 100 u/kg and 30 u/kg by sc administration.The effect of LMWH was similar to that of imported drug.Clivarin and the effective dose LMWH was significantly lower than that of ordinary heparin sodium.CONCLUSION:LMWH possesses the characteristics of higher bioavailability,stronger anti-thrombotic effect and fewer side effects on coagulation time when compared with Clivarin and ordinary heparin sodium.
, 百拇医药
KEY WORDS Low molecule weigh haprin;Coagulation time;Venous thrombin
低分子量肝素(LMWH)是从普通肝素中分离得到的分子量较低的肝素片段。普通肝素作为抗凝血药物之一，在防治血栓性疾病中广泛应用。但它有出血、诱导血小板减少和骨质疏松等不良反应,故限制了其临床应用[1]。LMWH保留了普通肝素的基本结构，可与抗凝血酶Ⅲ结合，并加强其对Xa因子的灭活，但对凝血酶影响较小，是低出血不良反应的肝素类似物[2]。与普通肝素相比，LMWH还具有生物利用度高，半减期长，对脂解酶和血小板影响小等特点，是一类非常有前途的肝素类新药[3]。本文研究了LMWH对大鼠静脉血栓形成及小鼠凝血时间的影响，并与国外同类产品及普通肝素进行了比较。
材料与方法
1 材料
, http://www.100md.com
1.1 动物 昆明种小鼠，18～22g，雌雄兼用；Wistar雄性大鼠，250～300g，均由北京医科大学试验动物部提供。
1.2 试剂 低分子量肝素针剂由北京第一生物化学制药厂提供，批号：980306，效价为：antiXa 3432 u/ml，antiIIa 1334 u/ml，antiXa/antiIIa比率为2.5 ；Clivarin为德国基诺公司产品,由天津市川页生化制品有限公司提供，批号：970453，效价为：antiXa 5728 u/ml,antiⅡa 971 u/ml，antiXa/antiIIa比率为5.9；肝素钠注射液为上海第一生化药业公司上海生物化学制药厂生产,批号：980418，抗凝效价为12 500 u/2ml。
2 方法
2.1 三种注射液对小鼠凝血时间的影响(玻片法)[4] 取小鼠，随机分为10组，每组10只。即生理盐水对照组；LMWH 450，150，50 u/kg组；肝素钠 450，150，50 u/kg组；Civarin 450，150，50 u/kg组。各组药物均以NS稀释到所需浓度，皮下注射体积为0.2 ml/10g。
, 百拇医药
小鼠给药后1 h以弯头眼科镊迅速摘取眼球，将血滴在干净的玻璃片上两滴，同时开启秒表计时，每隔30 s，用洁净的针头挑一次(沿血滴边缘一固定部位，直挑到血滴中心)直到挑出丝状物为止，停止计时，记录时间，此段时间为全血凝固时间；另一滴血作最后复验。结果作均数显著性测验。
2.2 三种注射液对大鼠静脉血栓形成的影响[4] 取大鼠禁食过夜(不禁水)，随机分为10组，每组10只。即NS组；低分子肝素100，30，10 u/kg组；Clivarin 100，30，10 u/kg组和肝素钠300，100，30 u/kg组。各组药物均以NS稀释到所需浓度，皮下注射体积为0.5 ml/100g。
大鼠给药后1 h，以戊巴比妥钠40 mg/kg，ip麻醉，腹部消毒，开腹分离下腔静脉，于左肾静脉下方用粗线结扎下腔静脉，由于静脉血流阻断，血栓形成，缝合腹壁。于结扎后4 h，再次麻醉动物，重新开腹，于结扎下方2 cm处及其侧枝，取出血管迅速剖开管腔，在滤纸上取出血栓，蘸干多余血迹，称湿重，干燥24 h，再称干重，结果作均数显著性测验。
, http://www.100md.com
3 统计方法
用t检验以均数±标准差(x±s)表示。
结 果
1 对小鼠凝血时间的影响
结果见表1。
表1 对小鼠全血凝血时间的影响 (x±s,n=10)
药 物
剂量(u/kg)
凝血时间(s)
NS
216±81
低分子肝素
, http://www.100md.com
450
1050±139b
150
432±100b
50
344±91b
Clivarin
450
990±112b
150
410±88b
, 百拇医药
50
306±94a
肝素钠注射液
450
1773±481bc
150
315±98b
50
223±61
与NS组相比，a：P<0.05，b：P<0.01；与相同剂量的LMWH组相比，c：P<0.01 2 对大鼠静脉血栓形成的影响
, http://www.100md.com 结果见表2。
表2 对大鼠静脉血栓形成的影响 (x±s，n=10)
药 物
剂 量(u/kg)
血栓重量(mg)
湿重
干重
NS
20.20±7.20
6.27±2.24
低分子肝素
100
, 百拇医药
4.99±2.17b
1.58±0.89b
30
11.48±3.26b
3.76±1.31b
10
15.80±5.91
5.23±1.87
Clivarin
100
4.59±2.79b
, http://www.100md.com
1.42±0.96b
30
11.91±4.42b
3.63±1.54b
10
16.27±5.09
5.30±1.69
肝素钠注射液
300
4.28±2.48b
1.45±0.85b
, 百拇医药
100
10.82±3.94b
3.89±1.87b
30
19.64±7.22
6.69±2.95
与NS组相比，a：P<0.05，b：P<0.01 讨 论
由实验结果可见皮下注射低分子量肝素450，150及50 u/kg，可以明显地延长小鼠全血凝血时间，与NS对照组相比，3个给药剂量组均有非常显著性差异，并有明显的量效关系。与相同剂量的国外同类产品Clivarin相比，药效相当。肝素钠注射液50 u/kg剂量组与NS组相比,没有显著性差异,150 u/kg剂量组的凝血时间与LMWH 50 u/kg剂量组的凝血时间相当,而450 u/kg剂量组的凝血时间又远远长于相同剂量的LMWH(P<0.01),说明与LMWH相比,普通肝素的生物利用度较差,而且对凝血系统影响较大。
, 百拇医药
皮下注射低分子量肝素30，100 u/kg，可明显降低大鼠静脉血栓重量，与NS组相比较，均有非常显著性差异，皮下注射低分子肝素10 u/kg虽有降低血栓重量的趋势，但与对照组相比没有显著性差异。3个给药剂量组具有明显的量效关系，与相同剂量的国外同类产品Clivarin相比，药效相当。肝素钠注射液100，300 u/kg剂量组的抗栓药效分别与LMWH 30，100 u/kg剂量组的药效相当。同样说明了LMWH的生物利用度相对较高这一特点。在手术中我们也注意到,普通肝素高剂量组稍不小心,就会造成比较严重的出血不止,而在LMWH的使用中并没有见到这种现象。因此,与普通肝素相比较, LMWH生物利用度高,抗栓作用强,而且对凝血系统影响较小,是一种安全而有效的抗栓新药。
致谢：刘家望、张晓庆、何忠牛同志在试验过程中给予的热情帮助和支持，在此表示感谢。
参考文献
1 张利伟,王鸿利. 低分子量肝素的研究进展. 国外医学输血及血液学分册, 1995,18(6)∶343
2 李晓祥,赵挺,李耐三.低分子量肝素及对血凝及动静脉血栓的影响. 中国药科大学学报, 1996,27(2)∶115
3 李晓祥,李耐三.低分子量肝素及其临床应用.国外医药-合成药、生化药、制剂分册,World Pharmacy，1994,15(3)∶155
4 陈奇.中药药理方法学. 北京：人民卫生出版社,1993. 484,511
(收稿：1998-11-12 修回：1999-04-21), 百拇医药
单位：(北京医科大学药学院药理教研室，北京 100083)
关键词：低分子量肝素；凝血时间；静脉血栓
低分子量肝素对小鼠凝血时间及大鼠 静脉血栓形成的影响 摘要 目的：通过观察低分子量肝素(LMWH)对小鼠凝血时间及大鼠静脉血栓形成的影响，对其主要药效学进行了研究，并与国外同类产品Clivarin及普通肝素进行了比较。方法：玻片法体外测定小鼠全血凝血时间及大鼠体内静脉血栓形成法。结果：LMWH sc，450,150及50 u/kg可明显延长小鼠全血凝血时间；sc，100，30 u/kg可明显降低大鼠静脉血栓重量。与相同剂量Clivarin比较，二者药效相当；与普通肝素比较，LMWH有效剂量明显低于普通肝素。结论：LMWH具有生物利用度高、抗栓作用强及对凝血系统影响小的特性。
THE EFFECTS OF LOW MOLECULAR WEIGHT HEPARIN ON COAGULATION
, http://www.100md.com
TIME OF MICE AND VENOUS THROMBOSIS OF RATS
Ma Jian,Song Yan,Li Changling
(Department of pharmacology,School of pharmaceutical Sciences,Beijing
Medical University,Beijing 100083)
ABSTRACT OBJECTIVE：Through observation on its coagulation time in mice and venous thrombosis in rats to study the pharmacodynamics of low molecular weight heparin(LMWH).METHODS:The blood coagulation time in mice and venous thrombosis in rats were used as by in vitro method of glass plate.Imported product,Clivarin,and odinary heparin were used as positive controls.RESULTS:The whole blood coagulation time in mice was signiticantly prolonged by LMWH in dosage of 450,150 u/kg and 50 u/kg by sc administration and the weight of venous thrombosis in rats was significantly reduced by LMWH in dosage of 100 u/kg and 30 u/kg by sc administration.The effect of LMWH was similar to that of imported drug.Clivarin and the effective dose LMWH was significantly lower than that of ordinary heparin sodium.CONCLUSION:LMWH possesses the characteristics of higher bioavailability,stronger anti-thrombotic effect and fewer side effects on coagulation time when compared with Clivarin and ordinary heparin sodium.
, 百拇医药
KEY WORDS Low molecule weigh haprin;Coagulation time;Venous thrombin
低分子量肝素(LMWH)是从普通肝素中分离得到的分子量较低的肝素片段。普通肝素作为抗凝血药物之一，在防治血栓性疾病中广泛应用。但它有出血、诱导血小板减少和骨质疏松等不良反应,故限制了其临床应用[1]。LMWH保留了普通肝素的基本结构，可与抗凝血酶Ⅲ结合，并加强其对Xa因子的灭活，但对凝血酶影响较小，是低出血不良反应的肝素类似物[2]。与普通肝素相比，LMWH还具有生物利用度高，半减期长，对脂解酶和血小板影响小等特点，是一类非常有前途的肝素类新药[3]。本文研究了LMWH对大鼠静脉血栓形成及小鼠凝血时间的影响，并与国外同类产品及普通肝素进行了比较。
材料与方法
1 材料
, http://www.100md.com
1.1 动物 昆明种小鼠，18～22g，雌雄兼用；Wistar雄性大鼠，250～300g，均由北京医科大学试验动物部提供。
1.2 试剂 低分子量肝素针剂由北京第一生物化学制药厂提供，批号：980306，效价为：antiXa 3432 u/ml，antiIIa 1334 u/ml，antiXa/antiIIa比率为2.5 ；Clivarin为德国基诺公司产品,由天津市川页生化制品有限公司提供，批号：970453，效价为：antiXa 5728 u/ml,antiⅡa 971 u/ml，antiXa/antiIIa比率为5.9；肝素钠注射液为上海第一生化药业公司上海生物化学制药厂生产,批号：980418，抗凝效价为12 500 u/2ml。
2 方法
2.1 三种注射液对小鼠凝血时间的影响(玻片法)[4] 取小鼠，随机分为10组，每组10只。即生理盐水对照组；LMWH 450，150，50 u/kg组；肝素钠 450，150，50 u/kg组；Civarin 450，150，50 u/kg组。各组药物均以NS稀释到所需浓度，皮下注射体积为0.2 ml/10g。
, 百拇医药
小鼠给药后1 h以弯头眼科镊迅速摘取眼球，将血滴在干净的玻璃片上两滴，同时开启秒表计时，每隔30 s，用洁净的针头挑一次(沿血滴边缘一固定部位，直挑到血滴中心)直到挑出丝状物为止，停止计时，记录时间，此段时间为全血凝固时间；另一滴血作最后复验。结果作均数显著性测验。
2.2 三种注射液对大鼠静脉血栓形成的影响[4] 取大鼠禁食过夜(不禁水)，随机分为10组，每组10只。即NS组；低分子肝素100，30，10 u/kg组；Clivarin 100，30，10 u/kg组和肝素钠300，100，30 u/kg组。各组药物均以NS稀释到所需浓度，皮下注射体积为0.5 ml/100g。
大鼠给药后1 h，以戊巴比妥钠40 mg/kg，ip麻醉，腹部消毒，开腹分离下腔静脉，于左肾静脉下方用粗线结扎下腔静脉，由于静脉血流阻断，血栓形成，缝合腹壁。于结扎后4 h，再次麻醉动物，重新开腹，于结扎下方2 cm处及其侧枝，取出血管迅速剖开管腔，在滤纸上取出血栓，蘸干多余血迹，称湿重，干燥24 h，再称干重，结果作均数显著性测验。
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3 统计方法
用t检验以均数±标准差(x±s)表示。
结 果
1 对小鼠凝血时间的影响
结果见表1。
表1 对小鼠全血凝血时间的影响 (x±s,n=10)
药 物
剂量(u/kg)
凝血时间(s)
NS
216±81
低分子肝素
, http://www.100md.com
450
1050±139b
150
432±100b
50
344±91b
Clivarin
450
990±112b
150
410±88b
, 百拇医药
50
306±94a
肝素钠注射液
450
1773±481bc
150
315±98b
50
223±61
与NS组相比，a：P<0.05，b：P<0.01；与相同剂量的LMWH组相比，c：P<0.01 2 对大鼠静脉血栓形成的影响
, http://www.100md.com 结果见表2。
表2 对大鼠静脉血栓形成的影响 (x±s，n=10)
药 物
剂 量(u/kg)
血栓重量(mg)
湿重
干重
NS
20.20±7.20
6.27±2.24
低分子肝素
100
, 百拇医药
4.99±2.17b
1.58±0.89b
30
11.48±3.26b
3.76±1.31b
10
15.80±5.91
5.23±1.87
Clivarin
100
4.59±2.79b
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1.42±0.96b
30
11.91±4.42b
3.63±1.54b
10
16.27±5.09
5.30±1.69
肝素钠注射液
300
4.28±2.48b
1.45±0.85b
, 百拇医药
100
10.82±3.94b
3.89±1.87b
30
19.64±7.22
6.69±2.95
与NS组相比，a：P<0.05，b：P<0.01 讨 论
由实验结果可见皮下注射低分子量肝素450，150及50 u/kg，可以明显地延长小鼠全血凝血时间，与NS对照组相比，3个给药剂量组均有非常显著性差异，并有明显的量效关系。与相同剂量的国外同类产品Clivarin相比，药效相当。肝素钠注射液50 u/kg剂量组与NS组相比,没有显著性差异,150 u/kg剂量组的凝血时间与LMWH 50 u/kg剂量组的凝血时间相当,而450 u/kg剂量组的凝血时间又远远长于相同剂量的LMWH(P<0.01),说明与LMWH相比,普通肝素的生物利用度较差,而且对凝血系统影响较大。
, 百拇医药
皮下注射低分子量肝素30，100 u/kg，可明显降低大鼠静脉血栓重量，与NS组相比较，均有非常显著性差异，皮下注射低分子肝素10 u/kg虽有降低血栓重量的趋势，但与对照组相比没有显著性差异。3个给药剂量组具有明显的量效关系，与相同剂量的国外同类产品Clivarin相比，药效相当。肝素钠注射液100，300 u/kg剂量组的抗栓药效分别与LMWH 30，100 u/kg剂量组的药效相当。同样说明了LMWH的生物利用度相对较高这一特点。在手术中我们也注意到,普通肝素高剂量组稍不小心,就会造成比较严重的出血不止,而在LMWH的使用中并没有见到这种现象。因此,与普通肝素相比较, LMWH生物利用度高,抗栓作用强,而且对凝血系统影响较小,是一种安全而有效的抗栓新药。
致谢：刘家望、张晓庆、何忠牛同志在试验过程中给予的热情帮助和支持，在此表示感谢。
参考文献
1 张利伟,王鸿利. 低分子量肝素的研究进展. 国外医学输血及血液学分册, 1995,18(6)∶343
2 李晓祥,赵挺,李耐三.低分子量肝素及对血凝及动静脉血栓的影响. 中国药科大学学报, 1996,27(2)∶115
3 李晓祥,李耐三.低分子量肝素及其临床应用.国外医药-合成药、生化药、制剂分册,World Pharmacy，1994,15(3)∶155
4 陈奇.中药药理方法学. 北京：人民卫生出版社,1993. 484,511
(收稿：1998-11-12 修回：1999-04-21), 百拇医药