葛根芩连汤降血糖作用的实验研究
作者：潘竞锵 韩超 刘惠纯 杜洁炜 李皑洁
单位：潘竞锵 刘惠纯(广州市中医中药研究所，广州 510130)；韩超 杜洁炜 李皑洁(广东药学院药学系，广州 510224)
关键词：葛根芩连汤；糖尿病；动物模型；降血糖作用
中国新药杂志000307 摘要 目的：研究葛根芩连汤对多种模型动物血糖的影响，初步探讨其降低动物血糖的作用机制。方法：以正常和四氧嘧啶(ALX)诱导高血糖小鼠、ALX致糖尿病(DM)模型小鼠，分别口服药物，测定其空腹血糖(FBG)及地塞米松(DX)致胰岛素抵抗(IR)、糖耐量减退(IGT)模型大鼠口服葡萄糖(OGTT)后2h血糖(2hBG)。结果：该方能拮抗ALX诱导小鼠高血糖(P<0.01)，明显降低正常小鼠和ALX-DM模型小鼠FBG(P<0.05～0.01)；降低FBG和OGTT后2hBG(P<0.01),改善DX致IR模型大鼠的IGT。结论：葛根芩连汤具有磺脲类药物和双胍类药物的降糖作用。
, 百拇医药
EXPERIMENTAL STUDY ON HYPOGLYCEMIC EFFECTS OF GEGENQINLIANGTANG (GGQLT)
Pan Jingqiang Han Chao Liu Huichun
(Guangzhou Institute of Traditional Chinese Medicine & Materia Medica, Guangzhou 510130)
ABSTRACT OBJECTIVE:The hypoglycemic effects and its mechanisum of GGQLT were investigated in animal models. METHODS:Fasting blood glucose (FBG) level in mice and mice with alloxan induced hyperglycemia and alloxan (ALX) induced diabetes mellitus (DM) were determined after oral administration of GGQLT. 2h blood glucose (2hBG) level in rats with dexmathasone (DX) induced insulin resistance (IR) and rats with impaired glucose tolerance (IGT) were measured after taken glucose in an oral dose of 10 g/kg. RESULTS:GGQLT was able to antagomize the high blood glucose in mice with ALX-induced hyperglycemia (P<0.01); able to significantly reduce the FBG level in mice and mice with ALX induced DM (P<0.05～0.01); able to lower FBG in mice and 2hBG in rats with IGT after given oral glucose (P<0.01); and improve IGT in rats with DX induced IR. CONCLUSION:The results obtained suggest that the hypoglycemic effect of GGQLT is similar to those of metformin and gliclazide.
, 百拇医药
KEY WORDS Gegenqinlian Tang; Diabetes mellitus; Animal model; Hypoglycemic effect
葛根芩连汤(简称为GGQLT)源自汉*张仲景《伤寒论》，方由葛根、黄芩、黄连、甘草4味药组成，主治外感表证未解、下利臭秽、口干而渴等证；药理、药效学作用主要有止泻、抗缺氧、解热、抑菌和抗心律失常等[1]。现代医药学已证明，方中各药均有不同程度的降糖和(或)改善糖尿病慢性并发症的药理作用[2～6]。因此，我们用多种动物模型探讨其对血糖的影响，结果报道如下。
材料与方法
1 药物与试剂
葛根(批号：990207)、黄芩(批号：981104)、黄连(批号：990210)、甘草(批号：990209)4味药的浓缩颗粒剂均由广东一方制药厂生产；格列齐特(gliclazide,达美康)片由施维雅-华津制药厂生产(批号：990335)；甲福明(metformin，二甲双胍或美迪康)片由深圳中联制药厂生产(批号：990343)；四氧嘧啶(alloxan,ALX)由Sigma公司生产；地塞米松(dexamethasone,DX)磷酸钠注射液由广州市桥光制药厂生产(批号：980528)；葡萄糖-葡萄糖氧化酶法测定试剂盒为上海捷门生物技术公司产品。ONE TOUCH Ⅱ血糖仪及试纸：美国Lifescan公司；奥地利产CliniBio-128C酶标仪。
, 百拇医药
2 实验动物
NIH小鼠，♀各半，体重18～22g，鼠龄6～8周；♀SD大鼠，150～180g ，鼠龄6～8周。动物及饲料均购自广东省医用实验动物中心；本所普通级动物室合格证号：粤检字98C027。
3 实验方法
3.1 药物的配制 GGQLT按葛根∶黄芩∶黄连∶甘草=4∶2.67∶2.67∶1(1995版中国药典方)生药比例称取4药浓缩颗粒剂，用蒸馏水(DW)配成混悬液，冰箱中保存；小鼠和大鼠口服方剂生药量分别为12.5(6.25∶2.34∶2.34∶1.56)g/kg和9.0(4.50∶1.69∶1.69∶1.12)g/kg。
3.2 降低正常小鼠血糖[7] 取小鼠按体重随机均分为3组，各组动物分别ig DW或药物；qd×8d，d7禁食18h后，d8末次给药后2h，眼眶取血，分离血清，测FBG。
, 百拇医药
3.3 拮抗ALX诱导小鼠高血糖[7] 取小鼠按体重随机分为4组，各组动物分别ig药物或DW，qd×8d,d5禁食18h后，d6空白对照组iv154mmol/L NaCl溶液20ml/kg,其余各组小鼠均iv ALX 0.352mmol/L加入到154mmol/L的NaCl溶液20ml/kg。48h后，d8末次给药2h后，如上法取血清，测FBG。
3.4 降低ALX-DM小鼠血糖[7] 取小鼠按体重随机选取空白对照组，iv154mmol/L NaCl溶液20ml/kg;其余小鼠iv ALX0.352mmol/L加入154mmol/L NaCl溶液20ml/kg。96h后，用血糖计测FBG，取FBG≥10.0mmol/L者入选实验；按血糖、体重随机分为3组，各组小鼠分别ig药物或DW，qd×6d,d5禁食18h后，末次给药2h后，如上法取血清，测FBG。
3.5 改善DX致胰岛素抵抗(lR)大鼠模型的糖耐量减退(IGT)[8] 取大鼠按体重随机分为4组，模型组和各给药组大鼠均参照文献[8]方法造模1周，空白对照组则im等量溶媒代替。各组大鼠分别ig药物或DW，qd×7d,d6禁食18h,d7用血糖仪测FBG后，对照组和药物组分别ig 2.78mol/L葡萄糖溶液或葡萄糖-药物混合液20ml/kg,2h后，再测血糖。
, 百拇医药
4 统计学分析
采用组间t或t′检验。数据用
±s表示。
结果
1 降低正常小鼠血糖
见表1。
表1 葛根芩连汤降低正常小鼠血糖 组别(n)
剂量(g/kg)
FBG(mmol/L)
血糖下降率(%)
空白对照组(19)
, 百拇医药
-
5.02±1.12
-
格列齐特组(19)
0.2
3.77±1.70a
24.9
GGQLT组(20)
12.5
3.30±1.13bc
34.3
与空白对照组比较a:P<0.05，b:P<0.01；与格列齐特组比较c：P>0.05
, 百拇医药
2 拮抗ALX诱导小鼠高血糖
见表2。
表2 葛根芩连汤拮抗ALX诱导小鼠高血糖 组别(n)
剂量(g/kg)
FBG(mmol/L)
血糖下降率(%)
空白对照组(21)
-
4.11±0.74ab
73.9
模型对照组(20)
, http://www.100md.com
-
15.73±3.31
-
甲福明组(18)
1.0
7.46±2.96a
52.6
GGQLT组(21)
12.5
11.51±3.53ab
26.8
与模型对照组比较a:P<0.01;与甲福明组比较b:P<0.01
, 百拇医药
3 降低ALX-DM小鼠血糖
见表3。
表3 葛根芩连汤降低ALX-DM小鼠血糖 组别(n)
剂量(g/kg)
FBG(mmol/L)
血糖下降率(%)
空白对照组(16)
-
4.06±1.14ab
78.8
模型对照组(20)
, http://www.100md.com
-
19.14±4.56
-
甲福明组(17)
0.75
3.87±1.89a
79.8
GGQLT组(18)
12.5
11.85±6.54ac
38.1
与模型对照组比较a:P<0.01；与甲福明组比较a:P>0.05;c:P<0.01
, 百拇医药
4 改善DX致lR大鼠模型的lGT
见表4。
表4 葛根芩连汤改善DX致lR大鼠模型lGT 组别(n)
剂量
(g/kg)
FBG
(mmol/L)
2hBG
(mmol/L)
FBG与2hBG差
值(mmol/L)
FBG与2hBG间
, http://www.100md.com
血糖上升率(%)
实验后体重(g)
空白对照组(12)
-
2.42±0.19ae
4.14±0.63bd
1.72±0.62bd
71
181±14be
模型对照组(12)
-
, 百拇医药
2.52±0.18
8.46±3.23
5.94±3.15
236
159±11
格列齐特组(12)
0.10
1.77±0.28b
4.71±0.94b
2.94±0.97b
166
, 百拇医药
158±11a
GGQLT组(12)
9.0
2.22±0.31ae
4.36±1.22bc
2.13±1.27bc
96
158±8ac
与模型对照组比较a:P>0.05，b:P<0.01;与格列齐特组比较c:P>0.05,d:P<0.05,e:P<0.01讨论
, 百拇医药 本组结果表明，GGQLT能明显降低正常小鼠和ALX-DM(类似1型DM)小鼠FBG。已知葛根(含葛根素)、黄芩(含黄芩苷)、黄连(含黄连素)和甘草，在降低正常及DM动物血糖、抑制醛糖还原酶活性和蛋白非酶糖基化产物生成、改善2型DM动物的高胰岛素血症lR、调血脂和抗氧化方面，具有某种或兼有多种作用，故常用于糖尿病的治疗[2～6]。有研究表明[3]，ig黄连1.0g/kg和0.8g/kg,即能降低正常和类似1型DM小鼠血糖。在本组实验，所用的12.5g/kg方剂中，含黄连2.34g/kg。由此推测，药物的降糖效应，黄连可能起主要作用。从植物化学角度分析，本研究采用分煎的颗粒剂配方，避免了黄连和黄芩合煎时，各自有效成分在此过程中，因物理和(或)化学作用，产生了沉淀，并因此而降低了药效[9]。
在本组实验，该方既降低糖尿病动物的血糖，又拮抗ALX引起的高血糖，提示方剂除有直接降糖作用外，还可减轻ALX诱导产生的超氧自由基对胰岛β细胞的损伤作用。
, 百拇医药
本组实验也证明文献[8]报道，DX能引起大鼠产生lR和lGT;GGQLT和格列齐特均能降低病鼠FBG，并改善其糖耐量。
章红英[10]从《千金要方》等9部历代公认的、有代表性的经典医著中，归纳了275味治疗糖尿病的常用中药(组方1282首)，经按用药频率高低排序，见葛根、甘草位居诸药之首，黄连、黄芩序列7，8，足见4药是中医治疗糖尿病的最常用中药。鉴此，结合本研究结果及前人对上述4药的药理、药效研究成果，我们认为，可用葛根芩连汤治疗1型和2型糖尿病。
参考文献
1，黄泰康，施诚主编.中药方剂现代研究大典.北京：科学技术出版社，1996.1541
2，段有金，王韶颖，三轮一智，等.五种中药对蛋白质非酶糖基化的抑制作用.中国糖尿病杂志，1998，6(4)∶227
, 百拇医药
3，叶菲，申竹芳，谢明智.中药黄连及其复方对实验动物血糖的影响.中国实验方剂学杂志，1999，5(3)∶23
4，刘长山，董砚虎，逢力男，等.中药黄芩甙与黄连素对糖尿病大鼠醛糖还原酶活性作用的观察.中国糖尿病杂志，1996，4(3)∶163
5，潘竞锵，刘惠纯.中药降血糖作用的药理研究近况.北京中医，1996，14(4)∶61
6，李天庆，崔昕，张志军.汉方药治疗糖尿病及其并发症的研究.国外医学中医中药分册，1997，19(6)∶3
7，潘竞锵，刘惠纯,刘广南，等.荔枝核降血糖、调血脂和抗氧化的实验研究.广东药学，1999，9(1)∶47
8，孙秀菊，李开明，崔培红，等.口服钒盐对地塞米松诱导的胰岛素抵抗的预报.中华内分泌代谢杂志，1997，13(3)∶189
9，乔 梁，彭嘉柔，濮训生，等.黄连-黄芩药对煎煮液沉淀物的分析.中国中药杂志，1999，24(6)∶352
10，章红英.治消渴病古方用药特点分析.北京中医，1998，16(3)∶49
收稿：1999-09-20
修回：1999-10-18, http://www.100md.com
单位：潘竞锵 刘惠纯(广州市中医中药研究所，广州 510130)；韩超 杜洁炜 李皑洁(广东药学院药学系，广州 510224)
关键词：葛根芩连汤；糖尿病；动物模型；降血糖作用
中国新药杂志000307 摘要 目的：研究葛根芩连汤对多种模型动物血糖的影响，初步探讨其降低动物血糖的作用机制。方法：以正常和四氧嘧啶(ALX)诱导高血糖小鼠、ALX致糖尿病(DM)模型小鼠，分别口服药物，测定其空腹血糖(FBG)及地塞米松(DX)致胰岛素抵抗(IR)、糖耐量减退(IGT)模型大鼠口服葡萄糖(OGTT)后2h血糖(2hBG)。结果：该方能拮抗ALX诱导小鼠高血糖(P<0.01)，明显降低正常小鼠和ALX-DM模型小鼠FBG(P<0.05～0.01)；降低FBG和OGTT后2hBG(P<0.01),改善DX致IR模型大鼠的IGT。结论：葛根芩连汤具有磺脲类药物和双胍类药物的降糖作用。
, 百拇医药
EXPERIMENTAL STUDY ON HYPOGLYCEMIC EFFECTS OF GEGENQINLIANGTANG (GGQLT)
Pan Jingqiang Han Chao Liu Huichun
(Guangzhou Institute of Traditional Chinese Medicine & Materia Medica, Guangzhou 510130)
ABSTRACT OBJECTIVE:The hypoglycemic effects and its mechanisum of GGQLT were investigated in animal models. METHODS:Fasting blood glucose (FBG) level in mice and mice with alloxan induced hyperglycemia and alloxan (ALX) induced diabetes mellitus (DM) were determined after oral administration of GGQLT. 2h blood glucose (2hBG) level in rats with dexmathasone (DX) induced insulin resistance (IR) and rats with impaired glucose tolerance (IGT) were measured after taken glucose in an oral dose of 10 g/kg. RESULTS:GGQLT was able to antagomize the high blood glucose in mice with ALX-induced hyperglycemia (P<0.01); able to significantly reduce the FBG level in mice and mice with ALX induced DM (P<0.05～0.01); able to lower FBG in mice and 2hBG in rats with IGT after given oral glucose (P<0.01); and improve IGT in rats with DX induced IR. CONCLUSION:The results obtained suggest that the hypoglycemic effect of GGQLT is similar to those of metformin and gliclazide.
, 百拇医药
KEY WORDS Gegenqinlian Tang; Diabetes mellitus; Animal model; Hypoglycemic effect
葛根芩连汤(简称为GGQLT)源自汉*张仲景《伤寒论》，方由葛根、黄芩、黄连、甘草4味药组成，主治外感表证未解、下利臭秽、口干而渴等证；药理、药效学作用主要有止泻、抗缺氧、解热、抑菌和抗心律失常等[1]。现代医药学已证明，方中各药均有不同程度的降糖和(或)改善糖尿病慢性并发症的药理作用[2～6]。因此，我们用多种动物模型探讨其对血糖的影响，结果报道如下。
材料与方法
1 药物与试剂
葛根(批号：990207)、黄芩(批号：981104)、黄连(批号：990210)、甘草(批号：990209)4味药的浓缩颗粒剂均由广东一方制药厂生产；格列齐特(gliclazide,达美康)片由施维雅-华津制药厂生产(批号：990335)；甲福明(metformin，二甲双胍或美迪康)片由深圳中联制药厂生产(批号：990343)；四氧嘧啶(alloxan,ALX)由Sigma公司生产；地塞米松(dexamethasone,DX)磷酸钠注射液由广州市桥光制药厂生产(批号：980528)；葡萄糖-葡萄糖氧化酶法测定试剂盒为上海捷门生物技术公司产品。ONE TOUCH Ⅱ血糖仪及试纸：美国Lifescan公司；奥地利产CliniBio-128C酶标仪。
, 百拇医药
2 实验动物
NIH小鼠，♀各半，体重18～22g，鼠龄6～8周；♀SD大鼠，150～180g ，鼠龄6～8周。动物及饲料均购自广东省医用实验动物中心；本所普通级动物室合格证号：粤检字98C027。
3 实验方法
3.1 药物的配制 GGQLT按葛根∶黄芩∶黄连∶甘草=4∶2.67∶2.67∶1(1995版中国药典方)生药比例称取4药浓缩颗粒剂，用蒸馏水(DW)配成混悬液，冰箱中保存；小鼠和大鼠口服方剂生药量分别为12.5(6.25∶2.34∶2.34∶1.56)g/kg和9.0(4.50∶1.69∶1.69∶1.12)g/kg。
3.2 降低正常小鼠血糖[7] 取小鼠按体重随机均分为3组，各组动物分别ig DW或药物；qd×8d，d7禁食18h后，d8末次给药后2h，眼眶取血，分离血清，测FBG。
, 百拇医药
3.3 拮抗ALX诱导小鼠高血糖[7] 取小鼠按体重随机分为4组，各组动物分别ig药物或DW，qd×8d,d5禁食18h后，d6空白对照组iv154mmol/L NaCl溶液20ml/kg,其余各组小鼠均iv ALX 0.352mmol/L加入到154mmol/L的NaCl溶液20ml/kg。48h后，d8末次给药2h后，如上法取血清，测FBG。
3.4 降低ALX-DM小鼠血糖[7] 取小鼠按体重随机选取空白对照组，iv154mmol/L NaCl溶液20ml/kg;其余小鼠iv ALX0.352mmol/L加入154mmol/L NaCl溶液20ml/kg。96h后，用血糖计测FBG，取FBG≥10.0mmol/L者入选实验；按血糖、体重随机分为3组，各组小鼠分别ig药物或DW，qd×6d,d5禁食18h后，末次给药2h后，如上法取血清，测FBG。
3.5 改善DX致胰岛素抵抗(lR)大鼠模型的糖耐量减退(IGT)[8] 取大鼠按体重随机分为4组，模型组和各给药组大鼠均参照文献[8]方法造模1周，空白对照组则im等量溶媒代替。各组大鼠分别ig药物或DW，qd×7d,d6禁食18h,d7用血糖仪测FBG后，对照组和药物组分别ig 2.78mol/L葡萄糖溶液或葡萄糖-药物混合液20ml/kg,2h后，再测血糖。
, 百拇医药
4 统计学分析
采用组间t或t′检验。数据用
±s表示。结果
1 降低正常小鼠血糖
见表1。
表1 葛根芩连汤降低正常小鼠血糖 组别(n)
剂量(g/kg)
FBG(mmol/L)
血糖下降率(%)
空白对照组(19)
, 百拇医药
-
5.02±1.12
-
格列齐特组(19)
0.2
3.77±1.70a
24.9
GGQLT组(20)
12.5
3.30±1.13bc
34.3
与空白对照组比较a:P<0.05，b:P<0.01；与格列齐特组比较c：P>0.05
, 百拇医药
2 拮抗ALX诱导小鼠高血糖
见表2。
表2 葛根芩连汤拮抗ALX诱导小鼠高血糖 组别(n)
剂量(g/kg)
FBG(mmol/L)
血糖下降率(%)
空白对照组(21)
-
4.11±0.74ab
73.9
模型对照组(20)
, http://www.100md.com
-
15.73±3.31
-
甲福明组(18)
1.0
7.46±2.96a
52.6
GGQLT组(21)
12.5
11.51±3.53ab
26.8
与模型对照组比较a:P<0.01;与甲福明组比较b:P<0.01
, 百拇医药
3 降低ALX-DM小鼠血糖
见表3。
表3 葛根芩连汤降低ALX-DM小鼠血糖 组别(n)
剂量(g/kg)
FBG(mmol/L)
血糖下降率(%)
空白对照组(16)
-
4.06±1.14ab
78.8
模型对照组(20)
, http://www.100md.com
-
19.14±4.56
-
甲福明组(17)
0.75
3.87±1.89a
79.8
GGQLT组(18)
12.5
11.85±6.54ac
38.1
与模型对照组比较a:P<0.01；与甲福明组比较a:P>0.05;c:P<0.01
, 百拇医药
4 改善DX致lR大鼠模型的lGT
见表4。
表4 葛根芩连汤改善DX致lR大鼠模型lGT 组别(n)
剂量
(g/kg)
FBG
(mmol/L)
2hBG
(mmol/L)
FBG与2hBG差
值(mmol/L)
FBG与2hBG间
, http://www.100md.com
血糖上升率(%)
实验后体重(g)
空白对照组(12)
-
2.42±0.19ae
4.14±0.63bd
1.72±0.62bd
71
181±14be
模型对照组(12)
-
, 百拇医药
2.52±0.18
8.46±3.23
5.94±3.15
236
159±11
格列齐特组(12)
0.10
1.77±0.28b
4.71±0.94b
2.94±0.97b
166
, 百拇医药
158±11a
GGQLT组(12)
9.0
2.22±0.31ae
4.36±1.22bc
2.13±1.27bc
96
158±8ac
与模型对照组比较a:P>0.05，b:P<0.01;与格列齐特组比较c:P>0.05,d:P<0.05,e:P<0.01讨论
, 百拇医药 本组结果表明，GGQLT能明显降低正常小鼠和ALX-DM(类似1型DM)小鼠FBG。已知葛根(含葛根素)、黄芩(含黄芩苷)、黄连(含黄连素)和甘草，在降低正常及DM动物血糖、抑制醛糖还原酶活性和蛋白非酶糖基化产物生成、改善2型DM动物的高胰岛素血症lR、调血脂和抗氧化方面，具有某种或兼有多种作用，故常用于糖尿病的治疗[2～6]。有研究表明[3]，ig黄连1.0g/kg和0.8g/kg,即能降低正常和类似1型DM小鼠血糖。在本组实验，所用的12.5g/kg方剂中，含黄连2.34g/kg。由此推测，药物的降糖效应，黄连可能起主要作用。从植物化学角度分析，本研究采用分煎的颗粒剂配方，避免了黄连和黄芩合煎时，各自有效成分在此过程中，因物理和(或)化学作用，产生了沉淀，并因此而降低了药效[9]。
在本组实验，该方既降低糖尿病动物的血糖，又拮抗ALX引起的高血糖，提示方剂除有直接降糖作用外，还可减轻ALX诱导产生的超氧自由基对胰岛β细胞的损伤作用。
, 百拇医药
本组实验也证明文献[8]报道，DX能引起大鼠产生lR和lGT;GGQLT和格列齐特均能降低病鼠FBG，并改善其糖耐量。
章红英[10]从《千金要方》等9部历代公认的、有代表性的经典医著中，归纳了275味治疗糖尿病的常用中药(组方1282首)，经按用药频率高低排序，见葛根、甘草位居诸药之首，黄连、黄芩序列7，8，足见4药是中医治疗糖尿病的最常用中药。鉴此，结合本研究结果及前人对上述4药的药理、药效研究成果，我们认为，可用葛根芩连汤治疗1型和2型糖尿病。
参考文献
1，黄泰康，施诚主编.中药方剂现代研究大典.北京：科学技术出版社，1996.1541
2，段有金，王韶颖，三轮一智，等.五种中药对蛋白质非酶糖基化的抑制作用.中国糖尿病杂志，1998，6(4)∶227
, 百拇医药
3，叶菲，申竹芳，谢明智.中药黄连及其复方对实验动物血糖的影响.中国实验方剂学杂志，1999，5(3)∶23
4，刘长山，董砚虎，逢力男，等.中药黄芩甙与黄连素对糖尿病大鼠醛糖还原酶活性作用的观察.中国糖尿病杂志，1996，4(3)∶163
5，潘竞锵，刘惠纯.中药降血糖作用的药理研究近况.北京中医，1996，14(4)∶61
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收稿：1999-09-20
修回：1999-10-18, http://www.100md.com