贝那普利对糖尿病肾病的防治作用
作者：陈晖 邵凤民 程银桢 刘章锁 张明轩
单位：陈晖 邵凤民 程银桢(河南省人民医院肾内科,郑州 450003)；刘章锁 张明轩(河南医科大学第一附属医院肾内科，郑州 450052)
关键词：贝那普利；糖尿病肾病；血管紧张素-Ⅱ；内皮素-1；转化生长因子-β1
中国新药杂志000508 摘要 目的：探讨贝那普利对糖尿病肾病的防治作用。方法：采用放免法和免疫组化法观察贝那普利对糖尿病大鼠血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)、内皮素(ET)、转化生长因子(TGF)的影响。结果：糖尿病大鼠AT-Ⅱ，ET-1明显升高，TGF-β1表达增强，贝那普利治疗后AT-Ⅱ，ET-1显著下降，TGF-β1表达减弱，肾脏肥大减轻，尿蛋白减少。结论：AT-Ⅱ、ET-1和TGF-β1可能参与糖尿病肾小球硬化的发生，贝那普利有保护肾脏延缓糖尿病肾病发生的作用。
, http://www.100md.com
PRELIMINARY STUDY OF THE PREVENTIVE EFFECT OF BENAZEPRIL
ON DIABETIC NEPHROPATHY
Chen Hui Shao Fengmin Cheng Yinzhen
(Department of Nephrology,The People's Hospital of Henan
Province, Zhengzhou 450003)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the preventive effect of benazepril on diabetic nephropathy.METHODS:The effects of benazepril on renin-angiotensinⅡ(AT-Ⅱ),endothelin(ET),and transforming growth factor-β1(TGF-β1)in rats models were studied by radioimmunoassy and immunohistochemistry.RESULTS:In rats' model of diabetic,the pre-treatment plasma and renal level of AT-Ⅱ and ET-Ⅰ were significantly increased and the expression of renal TGF-β1 was obviously strengthened in comparison with nomal rats (P<0.05) and after treatment with benazepril,the level of AT-Ⅱ, ET significantly deceased and the expression of TGF-β1 was weakened. CONCLUSION:AT-Ⅱ , ET-Ⅰ, and TGF-β1 may be involved in glomerular sclerosis of diabetic mellitus. The post-treatment decrease in these parameters mean that benazepril shows preventive effect on diabetic nephropathy.
, 百拇医药
KEY WORDS Benazepril; Diabetic neprophathy; Angiotensin-Ⅱ；Endothelin-1; Transforming growth factor-β1
糖尿病肾病早期表现为肾小球滤过率升高，微量蛋白尿和肾脏肥大，病理上以细胞外基质(ECM)增多为特点，但其机制尚不清楚。血管紧张素转换酶抑制剂(ACEⅠ)能延缓糖尿病肾病的发生，因此本实验利用链脲霉素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型，通过检测血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)、内皮素1(ET-1)及转化生长因子(TGF-β1)的变化，初步探讨糖尿病肾病的发病机制及贝那普利对其的防治。
材料和方法
1 实验动物
纯系Wistar大鼠，雄性，体重180～280g
, http://www.100md.com
2 药品和试剂
STZ为美国Sigma公司产品，使用时用0.1mol/L枸橼酸缓冲液(pH=4.0)临时配成2%的溶液。贝那普利为汽巴-嘉基公司产品。AT-Ⅱ和ET放免试剂盒分别为北京海科锐生物技术中心和东亚免疫研究所产品。ABC试剂盒为Vector公司产品，兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗体为Santa Cruz产品。
3 实验方法
3.1 糖尿病动物模型的建立[1] Wistar大鼠常规饲养1周后，称重，然后给大鼠单次腹腔注射STZ，剂量为60mg/kg,48～72h后剪断尾尖用血糖仪测血糖，凡血糖>16.65mmol/L的为糖尿病大鼠。实验期间动物自由饮水、饮食，不使用胰岛素及其他降糖药物。
3.2 动物分组 实验共分3组：A为治疗组，n=12，糖尿病模型形成后即给予贝那普利治疗，剂量按10mg/kg计算，灌胃qd，持续6周；B为糖尿病组，n=12；C为正常对照组，n=12，腹腔注射等量的枸橼酸缓冲液。
, 百拇医药
4 观察指标
在实验的第6周末时，将大鼠分别置于代谢笼中，收集24h尿液，然后称重，经心脏穿刺取血。大鼠处死后，迅速取出双肾，滤纸吸干称重，一侧肾脏放入10%福尔马林固定液中，留做组织学检查，另一侧肾脏去除包膜后制备成肾匀浆。血糖用葡萄糖氧化酶法测定；24h尿蛋白采用磺基水杨酸法测定；ET-1和AT-Ⅱ均用放免法测定，肾组织匀浆以每毫克蛋白中AT-Ⅱ含量表示；TGF-β1在肾组织中的表达采用免疫组化技术ABC法。
5 统计学处理
各数据用均数土标准差(
±s)表示，免疫组化指标用秩和检验,其余各数据经SDAS统计软件处理，采用方差分析和q检验，以P<0.05作为差别有显著意义的检验标准。
结 果
, http://www.100md.com
1 大鼠血糖、肾重/体重比值、尿蛋白的变化
见表1。
表1 各组大鼠血糖、肾重/体重比值和24h尿蛋白的比较 组别
例数
(只)
血糖
(mmol/L)
肾重/体重
(mg/g)
尿蛋白
(mg/24h尿)
A
, http://www.100md.com
12
30.50±5.09a
8.09±0.61ab
9.99±1.19ab
B
12
29.18±5.36a
11.71±1.29a
36.43±9.07a
C
12
, http://www.100md.com
5.12±0.56
6.86±0.39
3.73±1.13
与C组比较a:P<0.01；与B组比较b:P<0.01
糖尿病组大鼠在整个实验期间血糖均维持在高水平，并出现消瘦、多饮、多尿等症状，说明模型是成功的，在体重下降的同时，肾脏体积明显增大，肾重/体重比显著高于对照组，同时尿蛋白排出增多。贝那普利治疗组血糖变化不大，但肾重/体重比及尿蛋白均明显低于糖尿病组。
2 血、尿中ET-1和血浆、肾组织匀浆中AT-Ⅱ的变化
见表2。
表2 各组大鼠ET-1及AT-Ⅱ含量的变化 组别
, 百拇医药
例数(只)
ET-1
AT-Ⅱ
血(pg/ml)
尿(pg/24h尿)
血(pg/ml)
肾组织(pg/mg蛋白)
A
12
139.12±21.07ab
6246.60±1105.46ab
, http://www.100md.com 219.9±15.21ab
300.80±39.29ab
B
12
316.39±48.04a
13166.60±2330.10a
569.35±13.58
643.27±67.71a
C
12
183.74±23.90
, 百拇医药
1071.62±133.84
377.42±38.92
346.04±41.54
与C组比a:P<0.01;与B组比较b:P<0.01
糖尿病组大鼠血、尿中ET-1的含量较正常组高，二者有显著差异(P<0.01)，贝那普利治疗组则明显下降(P<0.01)。6周时血浆和肾组织匀浆中AT-Ⅱ的含量在糖尿病组大鼠明显升高，经贝那普利治疗后显著下降(P<0.01)。
3 TGF-β1在肾组织中的表达
TGF-β1的阳性表达为胞浆着色，正常大鼠肾小管有弱表达，肾小球未见表达。糖尿病大鼠同样在肾小管表达，表达程度较正常大鼠强烈，有明显统计学差异(P<0.01)。贝那普利治疗后，TGF-β1表达减弱，二者有统计学意义(P<0.01)。
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讨 论
近年来，分子生物学技术已经证实了肾脏具有独立的肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAS)[2]。AT-Ⅱ是RAS的主要效应分子，它不但参与肾小球血流动力学的调节，而且参与肾小球的生长和硬化。本实验中糖尿病大鼠血浆、肾组织匀浆中AT-Ⅱ含量均明显升高，与文献报道[3]一致，提示糖尿病时血浆和肾组织RAS活性升高，AT-Ⅱ在早期糖尿病肾病的发生中可能起重要作用。
Fukui等[4]对糖尿病大鼠动物模型的观察发现，肾小球ET-1的mRNA表达增多，并随时间的延长、尿蛋白排泄增加和肾功能的降低而增高。本实验采用放免法测定糖尿病大鼠血、尿中ET-1的水平，发现均较正常明显升高，证实了ET-1参与早期糖尿病肾病的形成。在自发性糖尿病BB鼠中发现，3d肾小球内TGF-β1的mRNA水平即开始升高[5]。本实验在6周时观察到糖尿病大鼠肾小管上TGF-β1的强表达，早期持续TGF-β1表达升高，不但说明TGF-β1与肾脏肥大有关，而且提示这种因子参与糖尿病肾病晚期基质的积聚和组织硬化。
, 百拇医药
贝那普利是新一代非硫含羟基的ACEI，它通过抑制血管紧张素转换酶，使循环和组织中AT-Ⅱ水平下降。同时可降低肾脏ET-1的mRNA和TGF-β1的表达，抑制其介导的促细胞生长和增殖作用，减轻肾脏肥大，减少尿蛋白的排出。提示贝那普利有延缓糖尿病肾小球硬化发生的作用。
参考文献
1，于德民，吴锐，尹潍，等.实验性链脲佐菌素糖尿病动物模型的研究.中国糖尿病杂志，1995,3(2)∶105
2，Cocmpbell DJ. Circulating and tissue angiotensin systems.J Clin Invest,1987,79(1)∶1
3，Kikkawa R, Kitamura E, Fujiwara Y ,et al. Biphasic alteration of renin-angiotensin-aldosterone system in streptozotocin-diabetic rats.Renal Physiol,1986,9(2)∶187
, 百拇医药
4，Fukui M, Nakamura T, Ebihara I,et al. Effects of enalapril on endothelin-1 and growth factor gene expression in diabetic rat glomeruli.J Lab Clin Med,1994,123(6)∶763
5，Osterby R. Early phases in the development of diabetes glomerulopathy:a quantitative electron microscopic study. Acta Med Scand,1974,574(Suppl)∶S3
收稿：1999-05-07
修回：1999-12-21, 百拇医药
单位：陈晖 邵凤民 程银桢(河南省人民医院肾内科,郑州 450003)；刘章锁 张明轩(河南医科大学第一附属医院肾内科，郑州 450052)
关键词：贝那普利；糖尿病肾病；血管紧张素-Ⅱ；内皮素-1；转化生长因子-β1
中国新药杂志000508 摘要 目的：探讨贝那普利对糖尿病肾病的防治作用。方法：采用放免法和免疫组化法观察贝那普利对糖尿病大鼠血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)、内皮素(ET)、转化生长因子(TGF)的影响。结果：糖尿病大鼠AT-Ⅱ，ET-1明显升高，TGF-β1表达增强，贝那普利治疗后AT-Ⅱ，ET-1显著下降，TGF-β1表达减弱，肾脏肥大减轻，尿蛋白减少。结论：AT-Ⅱ、ET-1和TGF-β1可能参与糖尿病肾小球硬化的发生，贝那普利有保护肾脏延缓糖尿病肾病发生的作用。
, http://www.100md.com
PRELIMINARY STUDY OF THE PREVENTIVE EFFECT OF BENAZEPRIL
ON DIABETIC NEPHROPATHY
Chen Hui Shao Fengmin Cheng Yinzhen
(Department of Nephrology,The People's Hospital of Henan
Province, Zhengzhou 450003)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the preventive effect of benazepril on diabetic nephropathy.METHODS:The effects of benazepril on renin-angiotensinⅡ(AT-Ⅱ),endothelin(ET),and transforming growth factor-β1(TGF-β1)in rats models were studied by radioimmunoassy and immunohistochemistry.RESULTS:In rats' model of diabetic,the pre-treatment plasma and renal level of AT-Ⅱ and ET-Ⅰ were significantly increased and the expression of renal TGF-β1 was obviously strengthened in comparison with nomal rats (P<0.05) and after treatment with benazepril,the level of AT-Ⅱ, ET significantly deceased and the expression of TGF-β1 was weakened. CONCLUSION:AT-Ⅱ , ET-Ⅰ, and TGF-β1 may be involved in glomerular sclerosis of diabetic mellitus. The post-treatment decrease in these parameters mean that benazepril shows preventive effect on diabetic nephropathy.
, 百拇医药
KEY WORDS Benazepril; Diabetic neprophathy; Angiotensin-Ⅱ；Endothelin-1; Transforming growth factor-β1
糖尿病肾病早期表现为肾小球滤过率升高，微量蛋白尿和肾脏肥大，病理上以细胞外基质(ECM)增多为特点，但其机制尚不清楚。血管紧张素转换酶抑制剂(ACEⅠ)能延缓糖尿病肾病的发生，因此本实验利用链脲霉素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型，通过检测血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)、内皮素1(ET-1)及转化生长因子(TGF-β1)的变化，初步探讨糖尿病肾病的发病机制及贝那普利对其的防治。
材料和方法
1 实验动物
纯系Wistar大鼠，雄性，体重180～280g
, http://www.100md.com
2 药品和试剂
STZ为美国Sigma公司产品，使用时用0.1mol/L枸橼酸缓冲液(pH=4.0)临时配成2%的溶液。贝那普利为汽巴-嘉基公司产品。AT-Ⅱ和ET放免试剂盒分别为北京海科锐生物技术中心和东亚免疫研究所产品。ABC试剂盒为Vector公司产品，兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗体为Santa Cruz产品。
3 实验方法
3.1 糖尿病动物模型的建立[1] Wistar大鼠常规饲养1周后，称重，然后给大鼠单次腹腔注射STZ，剂量为60mg/kg,48～72h后剪断尾尖用血糖仪测血糖，凡血糖>16.65mmol/L的为糖尿病大鼠。实验期间动物自由饮水、饮食，不使用胰岛素及其他降糖药物。
3.2 动物分组 实验共分3组：A为治疗组，n=12，糖尿病模型形成后即给予贝那普利治疗，剂量按10mg/kg计算，灌胃qd，持续6周；B为糖尿病组，n=12；C为正常对照组，n=12，腹腔注射等量的枸橼酸缓冲液。
, 百拇医药
4 观察指标
在实验的第6周末时，将大鼠分别置于代谢笼中，收集24h尿液，然后称重，经心脏穿刺取血。大鼠处死后，迅速取出双肾，滤纸吸干称重，一侧肾脏放入10%福尔马林固定液中，留做组织学检查，另一侧肾脏去除包膜后制备成肾匀浆。血糖用葡萄糖氧化酶法测定；24h尿蛋白采用磺基水杨酸法测定；ET-1和AT-Ⅱ均用放免法测定，肾组织匀浆以每毫克蛋白中AT-Ⅱ含量表示；TGF-β1在肾组织中的表达采用免疫组化技术ABC法。
5 统计学处理
各数据用均数土标准差(
±s)表示，免疫组化指标用秩和检验,其余各数据经SDAS统计软件处理，采用方差分析和q检验，以P<0.05作为差别有显著意义的检验标准。结 果
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1 大鼠血糖、肾重/体重比值、尿蛋白的变化
见表1。
表1 各组大鼠血糖、肾重/体重比值和24h尿蛋白的比较 组别
例数
(只)
血糖
(mmol/L)
肾重/体重
(mg/g)
尿蛋白
(mg/24h尿)
A
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12
30.50±5.09a
8.09±0.61ab
9.99±1.19ab
B
12
29.18±5.36a
11.71±1.29a
36.43±9.07a
C
12
, http://www.100md.com
5.12±0.56
6.86±0.39
3.73±1.13
与C组比较a:P<0.01；与B组比较b:P<0.01
糖尿病组大鼠在整个实验期间血糖均维持在高水平，并出现消瘦、多饮、多尿等症状，说明模型是成功的，在体重下降的同时，肾脏体积明显增大，肾重/体重比显著高于对照组，同时尿蛋白排出增多。贝那普利治疗组血糖变化不大，但肾重/体重比及尿蛋白均明显低于糖尿病组。
2 血、尿中ET-1和血浆、肾组织匀浆中AT-Ⅱ的变化
见表2。
表2 各组大鼠ET-1及AT-Ⅱ含量的变化 组别
, 百拇医药
例数(只)
ET-1
AT-Ⅱ
血(pg/ml)
尿(pg/24h尿)
血(pg/ml)
肾组织(pg/mg蛋白)
A
12
139.12±21.07ab
6246.60±1105.46ab
, http://www.100md.com 219.9±15.21ab
300.80±39.29ab
B
12
316.39±48.04a
13166.60±2330.10a
569.35±13.58
643.27±67.71a
C
12
183.74±23.90
, 百拇医药
1071.62±133.84
377.42±38.92
346.04±41.54
与C组比a:P<0.01;与B组比较b:P<0.01
糖尿病组大鼠血、尿中ET-1的含量较正常组高，二者有显著差异(P<0.01)，贝那普利治疗组则明显下降(P<0.01)。6周时血浆和肾组织匀浆中AT-Ⅱ的含量在糖尿病组大鼠明显升高，经贝那普利治疗后显著下降(P<0.01)。
3 TGF-β1在肾组织中的表达
TGF-β1的阳性表达为胞浆着色，正常大鼠肾小管有弱表达，肾小球未见表达。糖尿病大鼠同样在肾小管表达，表达程度较正常大鼠强烈，有明显统计学差异(P<0.01)。贝那普利治疗后，TGF-β1表达减弱，二者有统计学意义(P<0.01)。
, http://www.100md.com
讨 论
近年来，分子生物学技术已经证实了肾脏具有独立的肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAS)[2]。AT-Ⅱ是RAS的主要效应分子，它不但参与肾小球血流动力学的调节，而且参与肾小球的生长和硬化。本实验中糖尿病大鼠血浆、肾组织匀浆中AT-Ⅱ含量均明显升高，与文献报道[3]一致，提示糖尿病时血浆和肾组织RAS活性升高，AT-Ⅱ在早期糖尿病肾病的发生中可能起重要作用。
Fukui等[4]对糖尿病大鼠动物模型的观察发现，肾小球ET-1的mRNA表达增多，并随时间的延长、尿蛋白排泄增加和肾功能的降低而增高。本实验采用放免法测定糖尿病大鼠血、尿中ET-1的水平，发现均较正常明显升高，证实了ET-1参与早期糖尿病肾病的形成。在自发性糖尿病BB鼠中发现，3d肾小球内TGF-β1的mRNA水平即开始升高[5]。本实验在6周时观察到糖尿病大鼠肾小管上TGF-β1的强表达，早期持续TGF-β1表达升高，不但说明TGF-β1与肾脏肥大有关，而且提示这种因子参与糖尿病肾病晚期基质的积聚和组织硬化。
, 百拇医药
贝那普利是新一代非硫含羟基的ACEI，它通过抑制血管紧张素转换酶，使循环和组织中AT-Ⅱ水平下降。同时可降低肾脏ET-1的mRNA和TGF-β1的表达，抑制其介导的促细胞生长和增殖作用，减轻肾脏肥大，减少尿蛋白的排出。提示贝那普利有延缓糖尿病肾小球硬化发生的作用。
参考文献
1，于德民，吴锐，尹潍，等.实验性链脲佐菌素糖尿病动物模型的研究.中国糖尿病杂志，1995,3(2)∶105
2，Cocmpbell DJ. Circulating and tissue angiotensin systems.J Clin Invest,1987,79(1)∶1
3，Kikkawa R, Kitamura E, Fujiwara Y ,et al. Biphasic alteration of renin-angiotensin-aldosterone system in streptozotocin-diabetic rats.Renal Physiol,1986,9(2)∶187
, 百拇医药
4，Fukui M, Nakamura T, Ebihara I,et al. Effects of enalapril on endothelin-1 and growth factor gene expression in diabetic rat glomeruli.J Lab Clin Med,1994,123(6)∶763
5，Osterby R. Early phases in the development of diabetes glomerulopathy:a quantitative electron microscopic study. Acta Med Scand,1974,574(Suppl)∶S3
收稿：1999-05-07
修回：1999-12-21, 百拇医药