紫外分光光度法测定5-氟尿嘧啶微乳的含量研究
作者：刘英 蒋雪涛 鲁莹
单位：第二军医大学药学系，上海 200433
关键词：5-氟脲嘧啶；微乳；紫外分光光度法
中国新药杂志000710 【摘要】 目的:测定微乳中5-氟脲嘧啶(5-Fu)的含量。方法:将制得的含药微乳中先加入50%盐酸，80℃、加热20min，使微乳结构破坏，用乙醚、氯仿反复提取。提取液在265nm波长处检测。结果：线性浓度范围为4.25～21.25μg/ml；5-Fu平均回收率为(100.1±0.4)%。结论：本法结果准确，可完全排除处方中其他组分对测定的干扰。
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1003-3734(2000)07-0464-02
UV spectrophotometric determination of 5-fluorouracil in microemulsion
, http://www.100md.com
LIU Ying JIANG Xue-tao LU Ying
(Department of Pharmacy,The Second Military Medical University,Shanghai 200433)
【Abstract】 Objectives:Determination of 5-fluorouracil in microemulsion.Methods:50%HCl is added to the sample and heated in 80°C for 20 minutes to destroy the microemulsion,then repeatedly extracted with ether,chloroform and the content of 5-Fu in the extract is determined spectrophotometrically.Results:A linear limit of 4.25～21.25μg/ml and a mean recovery of (100.1±0.4)% were obtained.Conclusions:A accurate method for determination of 5-Fu in microemulsion is established and all interferences can be eliminated.
, 百拇医药
【Key words】 5-fluoronacil(5-Fu);microemulsion;UV spectrophotometric
5-氟尿嘧啶(5-Fu)是胃肠道恶性肿瘤化疗的首选抗癌药之一[1]， 无论全身或区域化疗,治疗处方途径较多。我们将其制成微乳剂型,用UV法测定5-Fu的含量,现将结果报告如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器 751G分光光度计(上海分析仪器厂)，电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)。
1.2 试药 5-Fu(上海华联药业有限公司，批号 970213)，5-Fu对照品 (上海华联药业有限公司)，三氯甲烷(上海菲达工贸有限公司 ，分析纯)，无水乙醚(常熟市杨园化工厂，分析纯)，50%盐酸溶液(按中国药典1995版二部标自配)，95%乙醇(上海振兴化工一厂，分析纯)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 吸收波长的确定 参照部颁标准有关5-Fu含量检查的规定，精确称取干燥恒重的5-Fu标准品适量，置100ml容量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，加95%乙醇稀释至100ml，照分光光度法(中国药典1995版二部附页18页)，在200～400nm波长处扫描；按照处方比例配制空白微乳，95%乙醇稀释后在200～400nm波长处扫描。
空白微乳直接稀释测定时，在5-Fu最大吸收波长处(265nm)有较大干扰；将空白微乳提取液按一定比例稀释后在200～400nm波长扫描，结果表明微乳提取后在265nm附近吸收较小，不干扰测定。故选择265nm为5-Fu微乳含量的测定波长。
2.2 样品处理 精密量取5-Fu微乳适量(相当于5-Fu 170mg )至分液漏斗中，加入50%盐酸20ml摇匀；另正确量取10ml无水乙醚，加入分液漏斗中摇匀；再加入95%的乙醇10ml摇匀；分层后取下层液。重复提取3次，合并下层液置蒸发皿中，于80℃水浴锅上蒸发20min，除去部分有机溶剂后移至分液漏斗中，用95%的乙醇10ml洗涤蒸发皿并加入分液漏斗中，分去油层后，用氯仿洗涤3次(每次10ml)，弃氯仿取上层液至100ml容量瓶中。于85℃水浴加热至透明放冷。加95%乙醇至刻度，过滤。弃初滤液。正确量取续滤液1ml置100ml容量瓶中，用95%的乙醇稀释至刻度。
, 百拇医药
2.3 标准曲线的制备 精密称取105℃干燥恒重的5-Fu对照品170mg，置100ml量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀。精密吸取1ml，置另一100ml量瓶中，加入空白微乳至刻度，摇匀使成为1ml含5-Fu 17μg的微乳液，分别吸取0.25，0.5，0.75，1，1.25ml ，依照“2.2”项下操作步骤提取，提取液于265nm波长处测定吸收度，并进行回归计算。得回归方程为：Y=0.04696+0.1544X,r=0.9999。
2.4 含量测定 5-Fu含药微乳1ml，按样“2.2”项下方法提取；提取液照分光光度法在265nm波长处测定吸收度，按标准曲线计算微乳中5-Fu的含量。
2.5 精密度实验 对17μg/ml的5-Fu微乳同日内测定计算日内差别； 连续5d计算日间误差，见表1。
表1 日内差及日间差 项 目
, 百拇医药
加入量(μg/ml)
测得量(n=5)
RSD(%)
日内差
4.25
1.62±0.0065
0.2
12.75
0.551±0.0040
0.4
21.25
0.916±0.0147
, 百拇医药
0.8
日间差
4.25
0.158±0.0008
0.2
12.75
0.559±0.0076
0.4
21.25
0.934±0.0089
0.6
2.6 回收率及稳定性实验 精密称取5-Fu对照品适量，加水溶解制成170μg/ml的5-Fu溶液,分别精吸0.25，0.5，0.75和1ml置100ml容量瓶中，加入空白微乳至刻度，制成4.25，8.5，12.75和17μg/ml的微乳液，依照含量测定法，以空白微乳白色的提取液作空白校正。将提取液于265nm波长处测定吸收度，并依标准曲线计算回收率。见表2。表2 回收率实验结果 (n=4) 理论值(μg/ml)
, 百拇医药
测量值(μg/ml)
回收率(%)
平均回收率(%)
4.25
0.158
102.5
8.50
0.360
101.5
100.95
12.75
0.532
, http://www.100md.com 96.18
17.00
0.758
100.2
2.7 提取条件对5-Fu微乳含量测定的影响 在提取测定过程中选择5个温度，即50，60，70，80，90℃。结果表明，提取温度为80℃时，吸收度最高，故选择80℃为提取温度。 80℃分别加热10，20，30，40，50min，测定提取液的紫外吸收。结果表明，加热20min时提取液吸收度最高，选择加热时间为20min。观察盐酸浓度对样品测定的影响，在提取过程中选择5个浓度,分别为10%,20%,30%,40%,50%。结果表明，当盐酸浓度为50%时，吸收度最高，故提取时采用50%的盐酸浓度。
3 讨论
3.1 5-Fu微乳含较大量的乳化剂聚乙二醇辛基苯基醚(op)和聚山梨酯80及油相亚油酸乙酯。由于本品以纳米微粒的形式存在，体系稳定，采用加热、盐析等方法不能破坏乳液[2]。故本研究采用浓度为50%盐酸将其结构破坏，并加热结合加入乙醚等有机溶剂，使油水分离完全，清除油相。
, 百拇医药
3.2 聚山梨酯80在200～400nm处扫描时于265nm处有吸收峰，对5-Fu的测定有干扰。经除去油相后的溶液，加入氯仿洗涤3次后可将乳化剂聚山梨酯80除去[3]。但除去聚山梨酯80后的分离液有轻微的浑浊，干扰了透光性。将其置85℃水浴加热立即透明。
3.3 本研究考虑了不同浓度盐酸对微乳的影响，发现50%盐酸能使微乳破乳较完全。加热可促进破乳，在80℃时，加热20min油水全部分离。故本实验应用50%盐酸、加热80℃、加温20min的测定条件，其结果能满足含量测定的要求。
【作者简介】 刘英(1977-)，女，第二军医大学药学系在读研究生。联系电话：(021)25070343，BP：191-3187511。
【参考文献】
[1] 薛增忠，曾凡波，张玉红.紫外分光光度法测定氟尿嘧啶栓的含量[J].中国医院药学杂志，1977，17(8)∶358～359
[2] 王倩，于红梅，周海源.微乳相图及工艺研究[J].西北药学杂志，1997，12(2)∶72～73
[3] 王红喜.微乳制剂的研究进展[J].国外医学药学分册，1996，23(4)∶206～211
收稿：1999-12-10
修回：2000-04-13, http://www.100md.com
单位：第二军医大学药学系，上海 200433
关键词：5-氟脲嘧啶；微乳；紫外分光光度法
中国新药杂志000710 【摘要】 目的:测定微乳中5-氟脲嘧啶(5-Fu)的含量。方法:将制得的含药微乳中先加入50%盐酸，80℃、加热20min，使微乳结构破坏，用乙醚、氯仿反复提取。提取液在265nm波长处检测。结果：线性浓度范围为4.25～21.25μg/ml；5-Fu平均回收率为(100.1±0.4)%。结论：本法结果准确，可完全排除处方中其他组分对测定的干扰。
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1003-3734(2000)07-0464-02
UV spectrophotometric determination of 5-fluorouracil in microemulsion
, http://www.100md.com
LIU Ying JIANG Xue-tao LU Ying
(Department of Pharmacy,The Second Military Medical University,Shanghai 200433)
【Abstract】 Objectives:Determination of 5-fluorouracil in microemulsion.Methods:50%HCl is added to the sample and heated in 80°C for 20 minutes to destroy the microemulsion,then repeatedly extracted with ether,chloroform and the content of 5-Fu in the extract is determined spectrophotometrically.Results:A linear limit of 4.25～21.25μg/ml and a mean recovery of (100.1±0.4)% were obtained.Conclusions:A accurate method for determination of 5-Fu in microemulsion is established and all interferences can be eliminated.
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【Key words】 5-fluoronacil(5-Fu);microemulsion;UV spectrophotometric
5-氟尿嘧啶(5-Fu)是胃肠道恶性肿瘤化疗的首选抗癌药之一[1]， 无论全身或区域化疗,治疗处方途径较多。我们将其制成微乳剂型,用UV法测定5-Fu的含量,现将结果报告如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器 751G分光光度计(上海分析仪器厂)，电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)。
1.2 试药 5-Fu(上海华联药业有限公司，批号 970213)，5-Fu对照品 (上海华联药业有限公司)，三氯甲烷(上海菲达工贸有限公司 ，分析纯)，无水乙醚(常熟市杨园化工厂，分析纯)，50%盐酸溶液(按中国药典1995版二部标自配)，95%乙醇(上海振兴化工一厂，分析纯)。
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2 方法与结果
2.1 吸收波长的确定 参照部颁标准有关5-Fu含量检查的规定，精确称取干燥恒重的5-Fu标准品适量，置100ml容量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，加95%乙醇稀释至100ml，照分光光度法(中国药典1995版二部附页18页)，在200～400nm波长处扫描；按照处方比例配制空白微乳，95%乙醇稀释后在200～400nm波长处扫描。
空白微乳直接稀释测定时，在5-Fu最大吸收波长处(265nm)有较大干扰；将空白微乳提取液按一定比例稀释后在200～400nm波长扫描，结果表明微乳提取后在265nm附近吸收较小，不干扰测定。故选择265nm为5-Fu微乳含量的测定波长。
2.2 样品处理 精密量取5-Fu微乳适量(相当于5-Fu 170mg )至分液漏斗中，加入50%盐酸20ml摇匀；另正确量取10ml无水乙醚，加入分液漏斗中摇匀；再加入95%的乙醇10ml摇匀；分层后取下层液。重复提取3次，合并下层液置蒸发皿中，于80℃水浴锅上蒸发20min，除去部分有机溶剂后移至分液漏斗中，用95%的乙醇10ml洗涤蒸发皿并加入分液漏斗中，分去油层后，用氯仿洗涤3次(每次10ml)，弃氯仿取上层液至100ml容量瓶中。于85℃水浴加热至透明放冷。加95%乙醇至刻度，过滤。弃初滤液。正确量取续滤液1ml置100ml容量瓶中，用95%的乙醇稀释至刻度。
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2.3 标准曲线的制备 精密称取105℃干燥恒重的5-Fu对照品170mg，置100ml量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀。精密吸取1ml，置另一100ml量瓶中，加入空白微乳至刻度，摇匀使成为1ml含5-Fu 17μg的微乳液，分别吸取0.25，0.5，0.75，1，1.25ml ，依照“2.2”项下操作步骤提取，提取液于265nm波长处测定吸收度，并进行回归计算。得回归方程为：Y=0.04696+0.1544X,r=0.9999。
2.4 含量测定 5-Fu含药微乳1ml，按样“2.2”项下方法提取；提取液照分光光度法在265nm波长处测定吸收度，按标准曲线计算微乳中5-Fu的含量。
2.5 精密度实验 对17μg/ml的5-Fu微乳同日内测定计算日内差别； 连续5d计算日间误差，见表1。
表1 日内差及日间差 项 目
, 百拇医药
加入量(μg/ml)
测得量(n=5)
RSD(%)
日内差
4.25
1.62±0.0065
0.2
12.75
0.551±0.0040
0.4
21.25
0.916±0.0147
, 百拇医药
0.8
日间差
4.25
0.158±0.0008
0.2
12.75
0.559±0.0076
0.4
21.25
0.934±0.0089
0.6
2.6 回收率及稳定性实验 精密称取5-Fu对照品适量，加水溶解制成170μg/ml的5-Fu溶液,分别精吸0.25，0.5，0.75和1ml置100ml容量瓶中，加入空白微乳至刻度，制成4.25，8.5，12.75和17μg/ml的微乳液，依照含量测定法，以空白微乳白色的提取液作空白校正。将提取液于265nm波长处测定吸收度，并依标准曲线计算回收率。见表2。表2 回收率实验结果 (n=4) 理论值(μg/ml)
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测量值(μg/ml)
回收率(%)
平均回收率(%)
4.25
0.158
102.5
8.50
0.360
101.5
100.95
12.75
0.532
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17.00
0.758
100.2
2.7 提取条件对5-Fu微乳含量测定的影响 在提取测定过程中选择5个温度，即50，60，70，80，90℃。结果表明，提取温度为80℃时，吸收度最高，故选择80℃为提取温度。 80℃分别加热10，20，30，40，50min，测定提取液的紫外吸收。结果表明，加热20min时提取液吸收度最高，选择加热时间为20min。观察盐酸浓度对样品测定的影响，在提取过程中选择5个浓度,分别为10%,20%,30%,40%,50%。结果表明，当盐酸浓度为50%时，吸收度最高，故提取时采用50%的盐酸浓度。
3 讨论
3.1 5-Fu微乳含较大量的乳化剂聚乙二醇辛基苯基醚(op)和聚山梨酯80及油相亚油酸乙酯。由于本品以纳米微粒的形式存在，体系稳定，采用加热、盐析等方法不能破坏乳液[2]。故本研究采用浓度为50%盐酸将其结构破坏，并加热结合加入乙醚等有机溶剂，使油水分离完全，清除油相。
, 百拇医药
3.2 聚山梨酯80在200～400nm处扫描时于265nm处有吸收峰，对5-Fu的测定有干扰。经除去油相后的溶液，加入氯仿洗涤3次后可将乳化剂聚山梨酯80除去[3]。但除去聚山梨酯80后的分离液有轻微的浑浊，干扰了透光性。将其置85℃水浴加热立即透明。
3.3 本研究考虑了不同浓度盐酸对微乳的影响，发现50%盐酸能使微乳破乳较完全。加热可促进破乳，在80℃时，加热20min油水全部分离。故本实验应用50%盐酸、加热80℃、加温20min的测定条件，其结果能满足含量测定的要求。
【作者简介】 刘英(1977-)，女，第二军医大学药学系在读研究生。联系电话：(021)25070343，BP：191-3187511。
【参考文献】
[1] 薛增忠，曾凡波，张玉红.紫外分光光度法测定氟尿嘧啶栓的含量[J].中国医院药学杂志，1977，17(8)∶358～359
[2] 王倩，于红梅，周海源.微乳相图及工艺研究[J].西北药学杂志，1997，12(2)∶72～73
[3] 王红喜.微乳制剂的研究进展[J].国外医学药学分册，1996，23(4)∶206～211
收稿：1999-12-10
修回：2000-04-13, http://www.100md.com