新药(化学药品)质量标准建立的技术要求及常见问题分析
作者：马玉楠
单位：国家药品监督管理局药品审评中心，北京 100050
关键词：
中国新药杂志001130 [中图分类号]R951 [文献标识码]C
[文章编号]1003-3734(2000)11-0801-06
药品要做到安全、有效,其中质量可控是药品研究的重要环节，是保证药品安全、有效的前提，也是新药药学研究的主要课题。化学药品经过合成、结构确证、制剂工艺研究后，最重要的工作是建立一个合适的质量标准，使药品达到“可控”的要求。我的工作体会是：这部分内容是药学研究的重要环节，也是我们审评的重点。
按照《新药审批办法》药学资料中从资料7～9是围绕着质量标准建立来提供试验资料:资料7是质量研究工作的试验资料及文献资料，包括理化性质、纯度检查、溶出度、含量测定等。资料8是质量标准草案及起草说明，并提供标准品或对照品。资料9是临床研究或生产的样品3～5批检验报告书。
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这3部分内容密切关联，提供这些资料的目的是证明我们建立了一个适宜的药品质量控制标准。
制订新药质量标准应遵循4项基本原则:①必须保证药品的安全、有效。②必须符合国家药典或其他法定标准的有关规定(国内外标准)。③必须结合实验研究和生产的实际，考虑生产的全过程、稳定性等。④检测方法应具备先进性和实用性，经过反复试验,得到与真值相近的结果的方法，定入标准，在准确的前提下，尽可能选择简便易行的方法，尽量避免使用有毒试剂。
质量标准的制订需经过3个阶段：①临床研究用质量标准。②生产用(试行)质量标准。③试行2年(一类新药试行3年)后转为正式的国家标准。最后收入药典。
翻开药典我们可以看到:药品的质量标准(原料药、制剂)主要包括这些内容:原料药:①名称：包括中、英、汉语拼音。②结构式、分子式、分子量。③来源、化学命名、含量限度。④性状。⑤鉴别。⑥检查。⑦含量测定。⑧注意。⑨贮藏(有效期)。⑩制剂。B11检验用对照品。制剂：①名称。②来源及含量限度。③处方、制法。④性状。⑤鉴别。⑥检查。⑦含量测定。⑧规格。⑨贮藏(有效期)。⑩检验用对照品。
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关于名称、结构式、化学名等可参考英文INN名称及药典委员会编辑的《中国药品通用名称》、 《国家药品标准工作手册》及《化学命名原则》等书对新药命名。
我主要对化学药品的性状、鉴别、检查、含量测定这几个方面的申报技术要求作一些介绍，对常见的问题谈一谈审评体会。比较化学药品药学部分新旧指导原则，这些方面没有大的差别，新的指导原则只是在原基础上更加细化，如纯度检查中细化了有关物质检查、残留溶剂的检查及晶型、异构体检查等。对溶出度及释放度检查和药品质量标准分析方法验证有了一些较新、较细的规定。
1 性状及理化常数
性状及理化常数是判断药品质量真伪优劣的基本项目，一定要制定确切。原料药：一般包括外观、溶解度、熔点、沸点、比旋度、折光率、相对密度粘度、吸收系数、晶型等。制剂：主要是对外观、颜色进行描述。
申报资料中问题较多的有下列几个方面，值得研制者注意：
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1.1 测定理化常数的药品纯度应采用精制品而不是临床用药品 这样才能保证理化常数的确切，而制订理化常数范围，则是以临床用药品(3～5批)测得的数据为依据而制订，研究时应尽可能附国外文献资料或国外对照样品的实测值进行比较，此要求申报单位往往忽略。
1.2 外观 原料药要包括色泽、形状、嗅、味。在贮存期内发生的变化要予以研究记述，如遇光变色、易吸湿、风化等要进行描述。片剂：颜色、包衣片(薄膜衣或糖衣)除去包衣后片芯颜色。片子的形状、异型片、片面是否有刻痕、印字、记号等要描述。胶囊：内容物的颜色及形状，是否有粘连、结块等。注射液：一般应为澄明液体，也有混悬液或粘稠性溶液。颜色：应根据颜色色号描述，一般以黄色标准比色液为基础。无色:浅于1号；几乎无色:浅于2号；微黄色:浅于4号；淡黄色:浅于6号；黄色:浅于8号。
贮藏过程如性状有变化应予以说明。
1.3 熔点 对于已知结构的化学药品，熔点是重要的物理常数。利用熔点、熔距，可鉴别、检查该药品的纯杂程度，熔点范围一般为3～4℃，熔距不可过宽，一般不超过2℃。熔点在200℃以上并同时分解的品种一般可不定入质量标准中,对于熔点难以判断或熔融同时分解的品种,以及一、二类新药的熔点，应用DSC热分析予以证明。
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在申报资料中经常可见一些申报单位自制产品熔点与国外文献不符，或几家申报同一品种，熔点不一致，有时相差不是几度，而是几十度，此种情况应做深入研究。在审评中曾遇到3家申报同一种药，其中2家熔点一样，另一家差10度左右，发现是因为重结晶的溶剂不一致，造成二者晶型不一致，引起熔点的改变。所以当碰到熔点不一致时，提示此类产品是否纯度有问题，是否含结晶水，是否有多晶型问题存在，应进行差热分析确证。
1.4 比旋度 对于光学活性化合物(手性化合物)，此指标反映其固有特性及其纯度，测定时应注意温度、浓度、溶剂对比旋度的影响，中国药典一般规定在20℃，钠灯589nm条件下测定。如果不同，一定要注明。尤其与国外产品进行比较时(25℃，汞灯 546nm条件)，一定要注意测定条件的一致。
目前申报新药中手性化合物光学活性成分越来越受重视，在新药申报中有3种情况：①2种异构体，一种有效，一种有害，像反应停(S)-异构体致畸，(R)-异构体安全有效。②2种异构体作用不同，像氟西汀(R)-异构体抗抑郁，(S)-异构体减肥。③2种异构体，其中一种有效，一种无效或低效，像左氧氟沙星、左旋多巴都是左旋有效，右旋无效或疗效很低。1992年美国FDA规定对手性药物开发倾向于发展单一对映体的手性药物，鼓励将消旋体拆分，分离出有效活性成分。所以测定比旋度这一物理常数也愈显重要。在性状下规定比旋度，在检查项进行异构体检查，一般采用手性柱、HPLC方法进行检测。在新药的研制开发中遇到有手性中心的消旋化合物，应尽量进行拆分研究，分离出活性成分，清除无效或不良反应强的异构体；并且注意对于含有手性中心的化合物，名称上一定要加以注明。
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1.5 晶型 许多原料药具有多晶型，不同晶型的物质其物理性质不同，了解药物的晶型将有助于解决下列问题：①保证在制备和贮存过程中药物在制剂中物理、化学性质的稳定性。②提高药物的生物利用度，增进疗效。③保证每批生产药物间等效性。④改善药物粉末的压片性能。⑤防止药物在制备或贮存过程中产生晶型转变而影响产品质量。
原料药如为固体物质，不易溶于水，制剂又为固体制剂，就应考虑晶型问题。晶型的确定可通过熔点、IR、粉末X-射线衍射、热分析等方法进行检测。
象吲哚美辛(解热镇痛药)，存在α，β，γ 3种晶型，β晶型不稳定，易转变为α，γ晶型，此2种晶型溶解度、溶出速率不同，γ晶型溶解度小，体内释放缓慢，有利于吸收；α晶型毒性大于γ晶型，故选择γ晶型作为药用。USP 23版用X-粉末衍射图谱作为本品的晶型控制，要求与标准图谱一致。
我国目前申报的新药中，有许多存在晶型问题的药品，但未在质量标准中反映，一般要求在合成重结晶一步用溶剂控制所要的晶型。
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当晶型与药效学有关时，如必须规定有效晶型,对无效晶型进行控制时，在检查项中应制订检测标准。如中国药典收载品种甲苯咪唑，有A，B，C 3种晶型，C晶型为有效型，A，B晶型为无效型，产品中主要为C晶型，内混有A晶型，中国药典规定A晶型存在10%以下，采用IR方法控制，定量检测。
还有一种情况：有效型为无定型的非结晶型，其结晶型检查应在偏光显微镜下检视，当转动载物台时，应不呈现消光位和双折射现象。
新药申报资料中还常常发现这样的问题：我们提出研究产品的晶型，补来资料与对照品比较晶型全一致，采用的是相同的溶剂条件，从样品中提取得到对照品，晶型相同是必然的。如何研究晶型？一般有2种方法：①应与国外文献或原料药比较熔点、IR、粉末、X-射线衍射图谱是否相同。②如不能得到国外的原料药及文献资料时，应对自己的产品采用3～4种不同溶剂条件进行重结晶，得到的产品再比较熔点、IR、粉末、X-射线衍射图谱是否相同，以说明是否有多晶型情况。
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晶型是一个化合物的物理特征，进行研究订入标准有时在鉴别项，有时在检查项。
2 鉴别强调专属性
试验方法要求专属性强，重现性好，灵敏度高，操作简便、快速等。一般选择1～4个，达到鉴别真伪的目的。
2.1 原料药 常用以下3类鉴别方法。
2.1.1 化学反应 选择功能团专属化学反应：显色反应、沉淀反应、盐类离子反应。
对结构相似的同类药物的鉴别要强调专属性问题：如下面这3个化合物为治疗骨质疏松的药物，因2个取代基的不同而不同，3个药可以采用简单的化学反应加以区分，见图1。
图1 结构相似的同类药物的化学鉴别
, 百拇医药 鉴别：①磷酸盐②钠盐③IR④pamidronate:-NH2与茚三酮生成蓝紫色。clodronate:-Cl与AgNO3反应产生沉淀。
2.1.2 色谱法 可采用GC法、HPLC法的保留时间和TLC法的Rf值及颜色等进行鉴别。如左氧氟沙星的鉴别，与上市的消旋体氧氟沙星比较，其呈色法、红外、紫外鉴别看不出区别，只能采用HPLC方法，手性检测系统，利用保留时间的不同加以鉴别。
2.1.3 光谱法 红外法：与对照品标准图谱对照，这是一个专属性很强的鉴别方法，每个化合物都有自己的特征吸收，所以基本上原料药都要采用。紫外法：在指定溶剂中的最大及最小吸收波长用于鉴别。鉴于此方法一般专属性差，可采用几个最大吸收波长处的吸收度比值或特定波长处的吸收度，提高鉴别的专属性。如维生素B2在267 375 444nm 处有最大吸收，可采用A375nm/A267nm=0.31～0.33，A444nm/A267nm=0.36～0.39 来提高鉴别能力。
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2.2 制剂 制剂的鉴别应尽可能与原料药相同，要注意排除辅料的干扰。
2.2.1 可用辅料做对照试验，必要时(复方制剂)进行分离预处理。药典中复方制剂一般都采用提取的方法，先将2种或3种药物分开，提取后再鉴别。
2.2.2 某些主药含量低，不能采用原料药项下方法时,则必须考虑用灵敏度较高、专属性较强的方法，如TLC法，软膏剂(含量仅千分之几)、含片(含量仅几毫克)一般采用TLC法效果好。
2.2.3 如果制剂含量测定采用紫外法，可选择紫外最大吸收或最小吸收度值作鉴别。如果制剂含量测定采用HPLC，GC法，可用其保留时间做鉴别。
2.2.4 不宜直接采用IR作鉴别，不宜用原料药物理常数作鉴别。
3 有关物质检查
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有关物质检查是申报资料中问题比较多的一个项目，几乎80%以上的补充资料通知中都会对有关物质检查的研究资料提出疑问。问题主要出在哪里？我们分析主要是对有关物质概念不清，检测采用的方法研究不够，质量标准检查项中主要考虑药品的有效性、纯度、安全性3个方面。对影响药品有效性和安全性的杂质是检查重点。
其中一般杂质如氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐、炽灼残渣等按中国药典附录规定检查，不用进行方法学研究，但对每个化合物的有关物质要进行仔细的研究。
3.1 明确有关物质的概念 主要指在生产工艺过程中带入的原料药、中间体、异构体、聚合体、反应副产物、降解产物等。对药品纯度要求应基于安全性和GMP 2方面考虑，允许含少量无害或毒性极低的共存物，但对有毒杂质测定应严格控制。
象普罗布考，这是一个降脂药，微量的杂质就会造成严重的眼毒性，所以必须非常严格控制，在USP中3个杂质A，B，C分别限量万分之0.05, 万分之0.5和千分之5。
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3.2 检测方法 有关物质检查通常采用色谱法，其专属性好，灵敏度高。根据有关物质的性质选择TLC,HPLC,GC，呈色反应或分光光度法，首先要考察系统适应性试验。
3.3 有关物质的限量 如分离出有几个杂质峰(或点),可考虑定总杂质限度，并定单个杂质限度；或定已知杂质限度、未知杂质限度和总杂质限度。原料药一般含量大于98.5%,有关物质应为0.5%～1.0%。
3.4 计算方法 有杂质对照品法、加响应因子计算的自身对照法、不用响应因子计算自身对照法等。尽量不用归一化法。
3.5 主要存在问题 国内的研制单位对“有关物质检查”研究主要存在的问题有以下几个方面：
3.5.1 对有关物质认识不全面：无论经过多少步反应一般只考查1～2个前体物质，其他不予考虑。其实对杂质的检查可以选择多种体系(2～3种)，选择适宜的体系对主要杂质进行检测。
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3.5.2 方法学研究不深入，往往不能保证方法的专属性及可靠性。象专属性研究不全面；套用含量测定的方法；进样量不够；纪录时间太短；图谱不符合要求等。
3.5.3 将有关物质考察与稳定性试验研究中降解产物的考察混为一谈。在进行有关物质研究时未进行降解产物的研究，却在稳定性试验中套用有关物质检测方法。
3.5.4 以TLC方法进行检测居多，虽然方法简便，但因为重现性、精确度与HPLC法比较受到限制，往往不能很好分离杂质。
3.5.5 制剂的有关物质检查，可以采用原料药的方法，但制剂过程比较复杂，影响因素较多，应考察方法的专属性，看辅料是否干扰，全面考察制剂工艺、制剂稳定性情况，考虑制定制剂的有关物质检查方法和限度要求。
3.5.6 如果仿制国外的新药，不仅要进行结构确证比较，还应进行杂质检测的对比，比较个数、量，最好能明确是何种物质。生产工艺(反应条件、精制条件)的不一致，会导致杂质数、量不同，不能盲目照搬国外的标准来控制某个杂质或溶剂。
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4 有机溶剂残留量检查
随着环保意识、劳动保护意识的加强，这部分内容得到强化。根据ICH关于溶剂残留量指导原则(1997年12月27日生效)在生产工艺中应避免使用的溶剂有苯、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、1,1-二氯乙烯、1,1,1,-三氯乙烷5种，见表1。
表1 生产中避免使用的溶剂 溶 剂
限制浓度(ppm)
影 响
苯
2
致癌
四氯化碳
4
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毒性并有害环境
1,2-二氯乙烷
5
毒性
1,1-二氯乙烯
8
毒性
1,1,1-三氯乙烷
1 500
有害环境
应限制使用乙腈、氯仿、甲苯、吡啶、二氯甲烷、二氧六环、环氧乙烷等26种溶剂，见表2。
表2 生产中限制使用的溶剂 溶 剂
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限制浓度(ppm)
溶 剂
限制浓度(ppm)
乙腈
410
氯苯
360
氯仿
60
环己烷
3 880
1，2-二氯乙烯
1 870
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二氯甲烷
600
1，2-二甲氧基乙烷
100
N，N-二甲基乙酰胺
1 090
N，N-二甲基甲酰胺
880
1，4-二氧六环
380
2-乙氧基乙醇
160
, http://www.100md.com 乙二醇
620
甲酰胺
220
己烷
290
甲醇
3 000
2-甲氧基乙醇
50
甲基丁基酮
50
甲基环己烷
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1 180
N-甲基吡咯烷酮
4840
硝基甲烷
50
吡啶
200
环砜烷
160
四氢化萘
100
甲苯
890
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1,1,2-三氯乙烷
80
二甲苯
2 170
中国药典2000年版已根据ICH的规定，对工艺中常用的溶剂重新规定了限度，见表3。
表3 中国药典2000年版有机溶剂残留量检测限 溶 剂
限制浓度(ppm)
溶 剂
限制浓度(ppm)
苯
2
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氯仿
60
二氧六环
380
二氯甲烷
600
吡啶
200
甲苯
890
环氧乙烷
10
工艺中只要用到上述溶剂，则在成品中要做残留量检查。通常采用GC方法，沸点高的溶剂可直接进样检测，沸点低的可用顶空法进样检测。中国药典中列出的溶剂其残留量可按药典的方法直接进行检测，其他溶剂残留量的检测应有方法学研究。过去的新药申报中往往不太重视此点，一般只检测最后重结晶所用的溶剂，其他不检测，在工艺中常使用苯、二氯乙烷，在今后的研究中最好革除，如果一定要用，就要严格控制，苯残留量小于2ppm，二氯乙烷残留量小于5ppm。
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5 溶出度(释放度)研究的主要内容和注意点
溶出度检查重点用于难溶性或难吸收的药物制剂(一般指在水中微溶或不溶的药物制剂)、治疗量与中毒量接近的药物制剂、要求速效及长效的药物制剂和用于治疗严重疾病和急救的药物制剂。这些制剂一般为固体制剂，在胃肠道有一个溶出和吸收的过程。溶出度是一个评价制剂质量的内在指标，模拟口服固体制剂在胃肠道崩解和溶出的体外试验方法。
5.1 主要的研究内容
5.1.1 测定方法的选择 根据中国药典的规定第一法为转篮法，第二法为浆法，第三法为小杯法。
5.1.2 介质的选择 可根据药物的溶解度特性选择蒸馏水，0.1mol/L HCl，pH 3～8缓冲液作溶出介质，当药物不易溶时，可选择助溶剂异丙醇、乙醇、十二烷基硫酸钠等，用量尽可能低，一般<0.5%。要有文献依据和研究资料，必要时应与生物利用度比较。
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5.1.3 转速的选择 转篮法一般选择100转/min，浆法一般选择50转/min(转篮法的1/2)。溶出曲线一般要求达到全溶出。
5.1.4 检测方法的选择 一般选择UV对照品法及HPLC法，要有方法学研究。汇总见表4。
表4 溶出度测定方法 实验方法
剂 型
转速(转/min)
温 度
第一法(转篮法)
胶囊，胃滞留片
100
37℃
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第二法(浆法)
片剂
50或75
37℃
第三法(小杯法)
贴剂,小规格制剂
32或37℃
试验条件选定后，用同一批样品6片测定6次溶出曲线，以考察方法的重现性。测定3～5批样品，绘制其1次溶出曲线，以考察生产工艺的稳定性。根据溶出曲线及样品的定点测定结果，制定切实可行的限度标准。一般取30或45min，溶出大于75%～80%。
5.2 需要注意的问题
5.2.1 设计溶出度测定方法时，要注意介质脱气、温度控制、取样位置固定等，这些都会影响检测结果的差异，还应考虑体内外相关性，体外溶出曲线尽量与体内释放一致。
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5.2.2 溶出曲线一般取5～7个时间点分别取样测定，定点取样时间点尽量在拐点处，溶出曲线研究要注意全溶出问题。常释制剂一般取样时间为5，10，15，20，30，45min，最后规定30或45min，溶出大于75%～80%。
5.2.3 均一性试验应进行每个取样点测试，计算RSD值，以最后一点6个溶出数据计算，一般要求<5%。
5.2.4 要考察辅料、胶囊壳及滤材对测定结果有无干扰以及克服干扰的方法，尤其对于末端吸收的药物，更要注意。如果胶囊壳有UV吸收，应进行空囊壳6粒测定，进行校正，计算校正因子一般要求<20%。多数情况考虑到试验条件改变会对校正因子产生影响，或以空胶囊壳对照在实际的抽验中很难做到，所以最好改为HPLC法进行测定。
5.2.5 复方制剂原则上各组分均要测定溶出度。对各组分溶出度的测定可采用不同的体系，根据实际试验结果考虑制定合适的标准。
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5.2.6 对治疗量与中毒量相接近的口服固体制剂(包括易溶性药品)，应控制2个时间点的溶出量(第一点不应溶出过多)。如一平喘药，胃肠反应比较大，国外产品15min时溶出45%左右，国内仿制品15min时溶出80%左右。这就必须调整处方，再进行研究。反之象一些快速催眠药，希望达到速释效果，第一点会要求溶出快,15min>60%,45min>75%。
5.2.7 控、缓释制剂标准中应测定3个时间点的释放量，一般0.2～2h释放<30%(是否有突释现象)，中间点(4～6h)释放30%～70%，最后一点(7～12h)释放>75%。
5.2.8 小剂量(<100mg)固体制剂：采用小杯法100～250ml介质，溶出曲线一般可选3～4个时间点。
5.2.9 肠溶制剂：按中国药典规定，在胃酸中释放<10%，在pH为6.8磷酸缓冲液溶出释放，要求主药的回收率>90%。
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5.2.10 仿制进口品应附1批进口样品溶出曲线，缓控释制剂应附1批普通制剂溶出曲线，画在一张图上进行比较。
对于一些溶解性很好的药物，也应做溶出度研究，但不一定订入质量标准中。
6 质量标准中分析方法确定的方法学研究技术要求
在质量标准中有许多涉及分析方法的内容：有关物质考察、残留溶剂检查、含量测定、溶出度及释放度检查。分析方法包括：TLC，HPLC，GC，UV等方法，首先要进行系统适应性研究，对分析方法基本确定后要进行方法的准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性研究。
6.1 准确度 指该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回收率表示。
6.1.1 含量测定方法回收率测定 用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定结果比较。
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6.1.2 有关物质及残留溶剂定量测定方法回收率测定 可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如不能得到杂质和降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。
6.1.3 数据要求 制备3个不同浓度的样品，各测定3次，对9次测定结果进行评价。含量测定方法可选择含量的80%，100%，120%3个浓度进行。溶出度测定方法可选择溶出的50%，80%，100%3个浓度进行。杂质定量测定方法的回收率可选择杂质量的±20%3个浓度进行。
6.2 精密度 指在规定的测试条件下，同一个均匀样品经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般用相对标准偏差表示。
用3个不同浓度样品，各测定3次；或把被测物浓度当作100测5～6次。测定结果进行统计，计算RSD值。
6.3 专属性 指在其他成分(杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。在含量测定和有关物质检查中均应考虑其专属性。
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6.3.1 色谱法说明专属性时，应附代表性图谱，图中应标明诸成分的位置。
6.3.2 在杂质可获得的情况下，可向试样中加入一定量杂质，考察杂质能否分离。
6.3.3 在杂质或降解产物不能获得的情况下，可将含有杂质的试样进行测定后与另一个经验证的方法比较结果。应对比检出杂质的个数及含量。
6.3.4 可用产品的原料、最终母液、粗制品、中间体、辅料，尽可能制备一些可能产生的不良反应产物及降解产物的样本(成品经酸、碱水解，光照，高温，氧化等取得)进行色谱分析。
6.3.5 色谱法中分离度要符合要求：主要指主成分与杂质的Rf或分离度>1.5，被测有关物质的峰与其相邻的有关物质的峰分离度>1.2。
6.3.6 对一、二类新药必要时可采用光二极管阵列检测和GC-MS，LC-MS检测进行纯度检查。
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6.4 检测限 指试样中被测物能被检测出的最低量。一般有2种方法：①非仪器分析目视法：用已知浓度的被测物,试验出能被可靠地检测出的最低浓度量。②信噪比法：一般以信噪比3∶1或2∶1时相应浓度或注入仪器的量确定。应附测试图谱，说明测试过程及检测限结果。
6.5 定量限 有关物质定量测定时应确定定量限，指被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定的准确度和精密度。常用信噪比法，10∶1时相应的浓度或注入仪器的量为定量限。
6.6 线性 至少制备5份供试样品(应在规定范围内测定线性关系)。以测得的响应信号作为被测浓度的函数作图，再用最小二乘法进行线性回归。要求列出回归方程、相关系数、线性图，一般要求r>0.999。
6.7 范围 根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果要求确定测试方法适用的高低限浓度或量的区间。①原料药和制剂含量线性范围应为测试浓度80%～120%。②含量均匀度测定线性范围应为测试浓度70%～130%。③溶出度、释放度测定线性范围应为溶出限度±20%。④有关物质测定线性范围应为定量限度±20%。⑤如果含量测定与有关物质检查同时测定，归一化法,线性范围应为杂质限度的-20%～含量限度(上限)+20%。
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6.8 耐受性 指在测定条件有小的变化时，测定结果不受影响的承受能力。如果测定方法要求苛刻，应在方法中注明。
主要考虑因素有被测溶液的稳定性；HPLC法中流动相pH值，色谱柱型号，柱温，流速，检测波长，不同的仪器等；GC法中色谱柱、固定相、柱温、进样口、检测口温度等。
其中最低定量限、耐受性试验都是新的要求。汇总分析方法确证的试验要求，见表5，为新药研究者提供参考。表5 各种分析方法确证的试验要求 项 目
方 法
准确度
精密度
专属性
检测限
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定量限
线性
范围
耐受性
有关物质检查
定量
HPLC
+
+
+
-
+
+
+
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+
限度
HPLC
-
-
+
+
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TLC
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含量测定
HPLC
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UV
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溶出度测定
HPLC
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UV
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有机溶媒残留量
GC
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通过以上说明，我们对质量标准的建立进行总结：外观要详述，理化常数要确切，鉴别要专属性强，检查：对影响药品安全、有效的杂质要进行控制，尤其是有关物质，含量测定要进行方法学研究。质量标准要真正起到药品质量可控的作用。
[作者简介]马玉楠(1961-)，女，副主任药师，现任生物制品及体外诊断试剂组组长。
(收稿日期：2000-08-11), http://www.100md.com
单位：国家药品监督管理局药品审评中心，北京 100050
关键词：
中国新药杂志001130 [中图分类号]R951 [文献标识码]C
[文章编号]1003-3734(2000)11-0801-06
药品要做到安全、有效,其中质量可控是药品研究的重要环节，是保证药品安全、有效的前提，也是新药药学研究的主要课题。化学药品经过合成、结构确证、制剂工艺研究后，最重要的工作是建立一个合适的质量标准，使药品达到“可控”的要求。我的工作体会是：这部分内容是药学研究的重要环节，也是我们审评的重点。
按照《新药审批办法》药学资料中从资料7～9是围绕着质量标准建立来提供试验资料:资料7是质量研究工作的试验资料及文献资料，包括理化性质、纯度检查、溶出度、含量测定等。资料8是质量标准草案及起草说明，并提供标准品或对照品。资料9是临床研究或生产的样品3～5批检验报告书。
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这3部分内容密切关联，提供这些资料的目的是证明我们建立了一个适宜的药品质量控制标准。
制订新药质量标准应遵循4项基本原则:①必须保证药品的安全、有效。②必须符合国家药典或其他法定标准的有关规定(国内外标准)。③必须结合实验研究和生产的实际，考虑生产的全过程、稳定性等。④检测方法应具备先进性和实用性，经过反复试验,得到与真值相近的结果的方法，定入标准，在准确的前提下，尽可能选择简便易行的方法，尽量避免使用有毒试剂。
质量标准的制订需经过3个阶段：①临床研究用质量标准。②生产用(试行)质量标准。③试行2年(一类新药试行3年)后转为正式的国家标准。最后收入药典。
翻开药典我们可以看到:药品的质量标准(原料药、制剂)主要包括这些内容:原料药:①名称：包括中、英、汉语拼音。②结构式、分子式、分子量。③来源、化学命名、含量限度。④性状。⑤鉴别。⑥检查。⑦含量测定。⑧注意。⑨贮藏(有效期)。⑩制剂。B11检验用对照品。制剂：①名称。②来源及含量限度。③处方、制法。④性状。⑤鉴别。⑥检查。⑦含量测定。⑧规格。⑨贮藏(有效期)。⑩检验用对照品。
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关于名称、结构式、化学名等可参考英文INN名称及药典委员会编辑的《中国药品通用名称》、 《国家药品标准工作手册》及《化学命名原则》等书对新药命名。
我主要对化学药品的性状、鉴别、检查、含量测定这几个方面的申报技术要求作一些介绍，对常见的问题谈一谈审评体会。比较化学药品药学部分新旧指导原则，这些方面没有大的差别，新的指导原则只是在原基础上更加细化，如纯度检查中细化了有关物质检查、残留溶剂的检查及晶型、异构体检查等。对溶出度及释放度检查和药品质量标准分析方法验证有了一些较新、较细的规定。
1 性状及理化常数
性状及理化常数是判断药品质量真伪优劣的基本项目，一定要制定确切。原料药：一般包括外观、溶解度、熔点、沸点、比旋度、折光率、相对密度粘度、吸收系数、晶型等。制剂：主要是对外观、颜色进行描述。
申报资料中问题较多的有下列几个方面，值得研制者注意：
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1.1 测定理化常数的药品纯度应采用精制品而不是临床用药品 这样才能保证理化常数的确切，而制订理化常数范围，则是以临床用药品(3～5批)测得的数据为依据而制订，研究时应尽可能附国外文献资料或国外对照样品的实测值进行比较，此要求申报单位往往忽略。
1.2 外观 原料药要包括色泽、形状、嗅、味。在贮存期内发生的变化要予以研究记述，如遇光变色、易吸湿、风化等要进行描述。片剂：颜色、包衣片(薄膜衣或糖衣)除去包衣后片芯颜色。片子的形状、异型片、片面是否有刻痕、印字、记号等要描述。胶囊：内容物的颜色及形状，是否有粘连、结块等。注射液：一般应为澄明液体，也有混悬液或粘稠性溶液。颜色：应根据颜色色号描述，一般以黄色标准比色液为基础。无色:浅于1号；几乎无色:浅于2号；微黄色:浅于4号；淡黄色:浅于6号；黄色:浅于8号。
贮藏过程如性状有变化应予以说明。
1.3 熔点 对于已知结构的化学药品，熔点是重要的物理常数。利用熔点、熔距，可鉴别、检查该药品的纯杂程度，熔点范围一般为3～4℃，熔距不可过宽，一般不超过2℃。熔点在200℃以上并同时分解的品种一般可不定入质量标准中,对于熔点难以判断或熔融同时分解的品种,以及一、二类新药的熔点，应用DSC热分析予以证明。
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在申报资料中经常可见一些申报单位自制产品熔点与国外文献不符，或几家申报同一品种，熔点不一致，有时相差不是几度，而是几十度，此种情况应做深入研究。在审评中曾遇到3家申报同一种药，其中2家熔点一样，另一家差10度左右，发现是因为重结晶的溶剂不一致，造成二者晶型不一致，引起熔点的改变。所以当碰到熔点不一致时，提示此类产品是否纯度有问题，是否含结晶水，是否有多晶型问题存在，应进行差热分析确证。
1.4 比旋度 对于光学活性化合物(手性化合物)，此指标反映其固有特性及其纯度，测定时应注意温度、浓度、溶剂对比旋度的影响，中国药典一般规定在20℃，钠灯589nm条件下测定。如果不同，一定要注明。尤其与国外产品进行比较时(25℃，汞灯 546nm条件)，一定要注意测定条件的一致。
目前申报新药中手性化合物光学活性成分越来越受重视，在新药申报中有3种情况：①2种异构体，一种有效，一种有害，像反应停(S)-异构体致畸，(R)-异构体安全有效。②2种异构体作用不同，像氟西汀(R)-异构体抗抑郁，(S)-异构体减肥。③2种异构体，其中一种有效，一种无效或低效，像左氧氟沙星、左旋多巴都是左旋有效，右旋无效或疗效很低。1992年美国FDA规定对手性药物开发倾向于发展单一对映体的手性药物，鼓励将消旋体拆分，分离出有效活性成分。所以测定比旋度这一物理常数也愈显重要。在性状下规定比旋度，在检查项进行异构体检查，一般采用手性柱、HPLC方法进行检测。在新药的研制开发中遇到有手性中心的消旋化合物，应尽量进行拆分研究，分离出活性成分，清除无效或不良反应强的异构体；并且注意对于含有手性中心的化合物，名称上一定要加以注明。
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1.5 晶型 许多原料药具有多晶型，不同晶型的物质其物理性质不同，了解药物的晶型将有助于解决下列问题：①保证在制备和贮存过程中药物在制剂中物理、化学性质的稳定性。②提高药物的生物利用度，增进疗效。③保证每批生产药物间等效性。④改善药物粉末的压片性能。⑤防止药物在制备或贮存过程中产生晶型转变而影响产品质量。
原料药如为固体物质，不易溶于水，制剂又为固体制剂，就应考虑晶型问题。晶型的确定可通过熔点、IR、粉末X-射线衍射、热分析等方法进行检测。
象吲哚美辛(解热镇痛药)，存在α，β，γ 3种晶型，β晶型不稳定，易转变为α，γ晶型，此2种晶型溶解度、溶出速率不同，γ晶型溶解度小，体内释放缓慢，有利于吸收；α晶型毒性大于γ晶型，故选择γ晶型作为药用。USP 23版用X-粉末衍射图谱作为本品的晶型控制，要求与标准图谱一致。
我国目前申报的新药中，有许多存在晶型问题的药品，但未在质量标准中反映，一般要求在合成重结晶一步用溶剂控制所要的晶型。
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当晶型与药效学有关时，如必须规定有效晶型,对无效晶型进行控制时，在检查项中应制订检测标准。如中国药典收载品种甲苯咪唑，有A，B，C 3种晶型，C晶型为有效型，A，B晶型为无效型，产品中主要为C晶型，内混有A晶型，中国药典规定A晶型存在10%以下，采用IR方法控制，定量检测。
还有一种情况：有效型为无定型的非结晶型，其结晶型检查应在偏光显微镜下检视，当转动载物台时，应不呈现消光位和双折射现象。
新药申报资料中还常常发现这样的问题：我们提出研究产品的晶型，补来资料与对照品比较晶型全一致，采用的是相同的溶剂条件，从样品中提取得到对照品，晶型相同是必然的。如何研究晶型？一般有2种方法：①应与国外文献或原料药比较熔点、IR、粉末、X-射线衍射图谱是否相同。②如不能得到国外的原料药及文献资料时，应对自己的产品采用3～4种不同溶剂条件进行重结晶，得到的产品再比较熔点、IR、粉末、X-射线衍射图谱是否相同，以说明是否有多晶型情况。
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晶型是一个化合物的物理特征，进行研究订入标准有时在鉴别项，有时在检查项。
2 鉴别强调专属性
试验方法要求专属性强，重现性好，灵敏度高，操作简便、快速等。一般选择1～4个，达到鉴别真伪的目的。
2.1 原料药 常用以下3类鉴别方法。
2.1.1 化学反应 选择功能团专属化学反应：显色反应、沉淀反应、盐类离子反应。
对结构相似的同类药物的鉴别要强调专属性问题：如下面这3个化合物为治疗骨质疏松的药物，因2个取代基的不同而不同，3个药可以采用简单的化学反应加以区分，见图1。
图1 结构相似的同类药物的化学鉴别
, 百拇医药 鉴别：①磷酸盐②钠盐③IR④pamidronate:-NH2与茚三酮生成蓝紫色。clodronate:-Cl与AgNO3反应产生沉淀。
2.1.2 色谱法 可采用GC法、HPLC法的保留时间和TLC法的Rf值及颜色等进行鉴别。如左氧氟沙星的鉴别，与上市的消旋体氧氟沙星比较，其呈色法、红外、紫外鉴别看不出区别，只能采用HPLC方法，手性检测系统，利用保留时间的不同加以鉴别。
2.1.3 光谱法 红外法：与对照品标准图谱对照，这是一个专属性很强的鉴别方法，每个化合物都有自己的特征吸收，所以基本上原料药都要采用。紫外法：在指定溶剂中的最大及最小吸收波长用于鉴别。鉴于此方法一般专属性差，可采用几个最大吸收波长处的吸收度比值或特定波长处的吸收度，提高鉴别的专属性。如维生素B2在267 375 444nm 处有最大吸收，可采用A375nm/A267nm=0.31～0.33，A444nm/A267nm=0.36～0.39 来提高鉴别能力。
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2.2 制剂 制剂的鉴别应尽可能与原料药相同，要注意排除辅料的干扰。
2.2.1 可用辅料做对照试验，必要时(复方制剂)进行分离预处理。药典中复方制剂一般都采用提取的方法，先将2种或3种药物分开，提取后再鉴别。
2.2.2 某些主药含量低，不能采用原料药项下方法时,则必须考虑用灵敏度较高、专属性较强的方法，如TLC法，软膏剂(含量仅千分之几)、含片(含量仅几毫克)一般采用TLC法效果好。
2.2.3 如果制剂含量测定采用紫外法，可选择紫外最大吸收或最小吸收度值作鉴别。如果制剂含量测定采用HPLC，GC法，可用其保留时间做鉴别。
2.2.4 不宜直接采用IR作鉴别，不宜用原料药物理常数作鉴别。
3 有关物质检查
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有关物质检查是申报资料中问题比较多的一个项目，几乎80%以上的补充资料通知中都会对有关物质检查的研究资料提出疑问。问题主要出在哪里？我们分析主要是对有关物质概念不清，检测采用的方法研究不够，质量标准检查项中主要考虑药品的有效性、纯度、安全性3个方面。对影响药品有效性和安全性的杂质是检查重点。
其中一般杂质如氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐、炽灼残渣等按中国药典附录规定检查，不用进行方法学研究，但对每个化合物的有关物质要进行仔细的研究。
3.1 明确有关物质的概念 主要指在生产工艺过程中带入的原料药、中间体、异构体、聚合体、反应副产物、降解产物等。对药品纯度要求应基于安全性和GMP 2方面考虑，允许含少量无害或毒性极低的共存物，但对有毒杂质测定应严格控制。
象普罗布考，这是一个降脂药，微量的杂质就会造成严重的眼毒性，所以必须非常严格控制，在USP中3个杂质A，B，C分别限量万分之0.05, 万分之0.5和千分之5。
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3.2 检测方法 有关物质检查通常采用色谱法，其专属性好，灵敏度高。根据有关物质的性质选择TLC,HPLC,GC，呈色反应或分光光度法，首先要考察系统适应性试验。
3.3 有关物质的限量 如分离出有几个杂质峰(或点),可考虑定总杂质限度，并定单个杂质限度；或定已知杂质限度、未知杂质限度和总杂质限度。原料药一般含量大于98.5%,有关物质应为0.5%～1.0%。
3.4 计算方法 有杂质对照品法、加响应因子计算的自身对照法、不用响应因子计算自身对照法等。尽量不用归一化法。
3.5 主要存在问题 国内的研制单位对“有关物质检查”研究主要存在的问题有以下几个方面：
3.5.1 对有关物质认识不全面：无论经过多少步反应一般只考查1～2个前体物质，其他不予考虑。其实对杂质的检查可以选择多种体系(2～3种)，选择适宜的体系对主要杂质进行检测。
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3.5.2 方法学研究不深入，往往不能保证方法的专属性及可靠性。象专属性研究不全面；套用含量测定的方法；进样量不够；纪录时间太短；图谱不符合要求等。
3.5.3 将有关物质考察与稳定性试验研究中降解产物的考察混为一谈。在进行有关物质研究时未进行降解产物的研究，却在稳定性试验中套用有关物质检测方法。
3.5.4 以TLC方法进行检测居多，虽然方法简便，但因为重现性、精确度与HPLC法比较受到限制，往往不能很好分离杂质。
3.5.5 制剂的有关物质检查，可以采用原料药的方法，但制剂过程比较复杂，影响因素较多，应考察方法的专属性，看辅料是否干扰，全面考察制剂工艺、制剂稳定性情况，考虑制定制剂的有关物质检查方法和限度要求。
3.5.6 如果仿制国外的新药，不仅要进行结构确证比较，还应进行杂质检测的对比，比较个数、量，最好能明确是何种物质。生产工艺(反应条件、精制条件)的不一致，会导致杂质数、量不同，不能盲目照搬国外的标准来控制某个杂质或溶剂。
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4 有机溶剂残留量检查
随着环保意识、劳动保护意识的加强，这部分内容得到强化。根据ICH关于溶剂残留量指导原则(1997年12月27日生效)在生产工艺中应避免使用的溶剂有苯、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、1,1-二氯乙烯、1,1,1,-三氯乙烷5种，见表1。
表1 生产中避免使用的溶剂 溶 剂
限制浓度(ppm)
影 响
苯
2
致癌
四氯化碳
4
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毒性并有害环境
1,2-二氯乙烷
5
毒性
1,1-二氯乙烯
8
毒性
1,1,1-三氯乙烷
1 500
有害环境
应限制使用乙腈、氯仿、甲苯、吡啶、二氯甲烷、二氧六环、环氧乙烷等26种溶剂，见表2。
表2 生产中限制使用的溶剂 溶 剂
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限制浓度(ppm)
溶 剂
限制浓度(ppm)
乙腈
410
氯苯
360
氯仿
60
环己烷
3 880
1，2-二氯乙烯
1 870
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二氯甲烷
600
1，2-二甲氧基乙烷
100
N，N-二甲基乙酰胺
1 090
N，N-二甲基甲酰胺
880
1，4-二氧六环
380
2-乙氧基乙醇
160
, http://www.100md.com 乙二醇
620
甲酰胺
220
己烷
290
甲醇
3 000
2-甲氧基乙醇
50
甲基丁基酮
50
甲基环己烷
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1 180
N-甲基吡咯烷酮
4840
硝基甲烷
50
吡啶
200
环砜烷
160
四氢化萘
100
甲苯
890
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1,1,2-三氯乙烷
80
二甲苯
2 170
中国药典2000年版已根据ICH的规定，对工艺中常用的溶剂重新规定了限度，见表3。
表3 中国药典2000年版有机溶剂残留量检测限 溶 剂
限制浓度(ppm)
溶 剂
限制浓度(ppm)
苯
2
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氯仿
60
二氧六环
380
二氯甲烷
600
吡啶
200
甲苯
890
环氧乙烷
10
工艺中只要用到上述溶剂，则在成品中要做残留量检查。通常采用GC方法，沸点高的溶剂可直接进样检测，沸点低的可用顶空法进样检测。中国药典中列出的溶剂其残留量可按药典的方法直接进行检测，其他溶剂残留量的检测应有方法学研究。过去的新药申报中往往不太重视此点，一般只检测最后重结晶所用的溶剂，其他不检测，在工艺中常使用苯、二氯乙烷，在今后的研究中最好革除，如果一定要用，就要严格控制，苯残留量小于2ppm，二氯乙烷残留量小于5ppm。
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5 溶出度(释放度)研究的主要内容和注意点
溶出度检查重点用于难溶性或难吸收的药物制剂(一般指在水中微溶或不溶的药物制剂)、治疗量与中毒量接近的药物制剂、要求速效及长效的药物制剂和用于治疗严重疾病和急救的药物制剂。这些制剂一般为固体制剂，在胃肠道有一个溶出和吸收的过程。溶出度是一个评价制剂质量的内在指标，模拟口服固体制剂在胃肠道崩解和溶出的体外试验方法。
5.1 主要的研究内容
5.1.1 测定方法的选择 根据中国药典的规定第一法为转篮法，第二法为浆法，第三法为小杯法。
5.1.2 介质的选择 可根据药物的溶解度特性选择蒸馏水，0.1mol/L HCl，pH 3～8缓冲液作溶出介质，当药物不易溶时，可选择助溶剂异丙醇、乙醇、十二烷基硫酸钠等，用量尽可能低，一般<0.5%。要有文献依据和研究资料，必要时应与生物利用度比较。
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5.1.3 转速的选择 转篮法一般选择100转/min，浆法一般选择50转/min(转篮法的1/2)。溶出曲线一般要求达到全溶出。
5.1.4 检测方法的选择 一般选择UV对照品法及HPLC法，要有方法学研究。汇总见表4。
表4 溶出度测定方法 实验方法
剂 型
转速(转/min)
温 度
第一法(转篮法)
胶囊，胃滞留片
100
37℃
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第二法(浆法)
片剂
50或75
37℃
第三法(小杯法)
贴剂,小规格制剂
32或37℃
试验条件选定后，用同一批样品6片测定6次溶出曲线，以考察方法的重现性。测定3～5批样品，绘制其1次溶出曲线，以考察生产工艺的稳定性。根据溶出曲线及样品的定点测定结果，制定切实可行的限度标准。一般取30或45min，溶出大于75%～80%。
5.2 需要注意的问题
5.2.1 设计溶出度测定方法时，要注意介质脱气、温度控制、取样位置固定等，这些都会影响检测结果的差异，还应考虑体内外相关性，体外溶出曲线尽量与体内释放一致。
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5.2.2 溶出曲线一般取5～7个时间点分别取样测定，定点取样时间点尽量在拐点处，溶出曲线研究要注意全溶出问题。常释制剂一般取样时间为5，10，15，20，30，45min，最后规定30或45min，溶出大于75%～80%。
5.2.3 均一性试验应进行每个取样点测试，计算RSD值，以最后一点6个溶出数据计算，一般要求<5%。
5.2.4 要考察辅料、胶囊壳及滤材对测定结果有无干扰以及克服干扰的方法，尤其对于末端吸收的药物，更要注意。如果胶囊壳有UV吸收，应进行空囊壳6粒测定，进行校正，计算校正因子一般要求<20%。多数情况考虑到试验条件改变会对校正因子产生影响，或以空胶囊壳对照在实际的抽验中很难做到，所以最好改为HPLC法进行测定。
5.2.5 复方制剂原则上各组分均要测定溶出度。对各组分溶出度的测定可采用不同的体系，根据实际试验结果考虑制定合适的标准。
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5.2.6 对治疗量与中毒量相接近的口服固体制剂(包括易溶性药品)，应控制2个时间点的溶出量(第一点不应溶出过多)。如一平喘药，胃肠反应比较大，国外产品15min时溶出45%左右，国内仿制品15min时溶出80%左右。这就必须调整处方，再进行研究。反之象一些快速催眠药，希望达到速释效果，第一点会要求溶出快,15min>60%,45min>75%。
5.2.7 控、缓释制剂标准中应测定3个时间点的释放量，一般0.2～2h释放<30%(是否有突释现象)，中间点(4～6h)释放30%～70%，最后一点(7～12h)释放>75%。
5.2.8 小剂量(<100mg)固体制剂：采用小杯法100～250ml介质，溶出曲线一般可选3～4个时间点。
5.2.9 肠溶制剂：按中国药典规定，在胃酸中释放<10%，在pH为6.8磷酸缓冲液溶出释放，要求主药的回收率>90%。
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5.2.10 仿制进口品应附1批进口样品溶出曲线，缓控释制剂应附1批普通制剂溶出曲线，画在一张图上进行比较。
对于一些溶解性很好的药物，也应做溶出度研究，但不一定订入质量标准中。
6 质量标准中分析方法确定的方法学研究技术要求
在质量标准中有许多涉及分析方法的内容：有关物质考察、残留溶剂检查、含量测定、溶出度及释放度检查。分析方法包括：TLC，HPLC，GC，UV等方法，首先要进行系统适应性研究，对分析方法基本确定后要进行方法的准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性研究。
6.1 准确度 指该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回收率表示。
6.1.1 含量测定方法回收率测定 用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定结果比较。
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6.1.2 有关物质及残留溶剂定量测定方法回收率测定 可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如不能得到杂质和降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。
6.1.3 数据要求 制备3个不同浓度的样品，各测定3次，对9次测定结果进行评价。含量测定方法可选择含量的80%，100%，120%3个浓度进行。溶出度测定方法可选择溶出的50%，80%，100%3个浓度进行。杂质定量测定方法的回收率可选择杂质量的±20%3个浓度进行。
6.2 精密度 指在规定的测试条件下，同一个均匀样品经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般用相对标准偏差表示。
用3个不同浓度样品，各测定3次；或把被测物浓度当作100测5～6次。测定结果进行统计，计算RSD值。
6.3 专属性 指在其他成分(杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。在含量测定和有关物质检查中均应考虑其专属性。
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6.3.1 色谱法说明专属性时，应附代表性图谱，图中应标明诸成分的位置。
6.3.2 在杂质可获得的情况下，可向试样中加入一定量杂质，考察杂质能否分离。
6.3.3 在杂质或降解产物不能获得的情况下，可将含有杂质的试样进行测定后与另一个经验证的方法比较结果。应对比检出杂质的个数及含量。
6.3.4 可用产品的原料、最终母液、粗制品、中间体、辅料，尽可能制备一些可能产生的不良反应产物及降解产物的样本(成品经酸、碱水解，光照，高温，氧化等取得)进行色谱分析。
6.3.5 色谱法中分离度要符合要求：主要指主成分与杂质的Rf或分离度>1.5，被测有关物质的峰与其相邻的有关物质的峰分离度>1.2。
6.3.6 对一、二类新药必要时可采用光二极管阵列检测和GC-MS，LC-MS检测进行纯度检查。
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6.4 检测限 指试样中被测物能被检测出的最低量。一般有2种方法：①非仪器分析目视法：用已知浓度的被测物,试验出能被可靠地检测出的最低浓度量。②信噪比法：一般以信噪比3∶1或2∶1时相应浓度或注入仪器的量确定。应附测试图谱，说明测试过程及检测限结果。
6.5 定量限 有关物质定量测定时应确定定量限，指被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定的准确度和精密度。常用信噪比法，10∶1时相应的浓度或注入仪器的量为定量限。
6.6 线性 至少制备5份供试样品(应在规定范围内测定线性关系)。以测得的响应信号作为被测浓度的函数作图，再用最小二乘法进行线性回归。要求列出回归方程、相关系数、线性图，一般要求r>0.999。
6.7 范围 根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果要求确定测试方法适用的高低限浓度或量的区间。①原料药和制剂含量线性范围应为测试浓度80%～120%。②含量均匀度测定线性范围应为测试浓度70%～130%。③溶出度、释放度测定线性范围应为溶出限度±20%。④有关物质测定线性范围应为定量限度±20%。⑤如果含量测定与有关物质检查同时测定，归一化法,线性范围应为杂质限度的-20%～含量限度(上限)+20%。
, 百拇医药
6.8 耐受性 指在测定条件有小的变化时，测定结果不受影响的承受能力。如果测定方法要求苛刻，应在方法中注明。
主要考虑因素有被测溶液的稳定性；HPLC法中流动相pH值，色谱柱型号，柱温，流速，检测波长，不同的仪器等；GC法中色谱柱、固定相、柱温、进样口、检测口温度等。
其中最低定量限、耐受性试验都是新的要求。汇总分析方法确证的试验要求，见表5，为新药研究者提供参考。表5 各种分析方法确证的试验要求 项 目
方 法
准确度
精密度
专属性
检测限
, 百拇医药
定量限
线性
范围
耐受性
有关物质检查
定量
HPLC
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+
+
-
+
+
+
, 百拇医药
+
限度
HPLC
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-
+
+
-
-
-
+
TLC
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+
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-
-
+
含量测定
HPLC
+
+
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-
-
+
, 百拇医药
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+
UV
+
+
+
-
-
+
+
+
溶出度测定
HPLC
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+
+
UV
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+
-
-
-
+
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+
+
有机溶媒残留量
GC
+
+
+
-
+
+
+
+
通过以上说明，我们对质量标准的建立进行总结：外观要详述，理化常数要确切，鉴别要专属性强，检查：对影响药品安全、有效的杂质要进行控制，尤其是有关物质，含量测定要进行方法学研究。质量标准要真正起到药品质量可控的作用。
[作者简介]马玉楠(1961-)，女，副主任药师，现任生物制品及体外诊断试剂组组长。
(收稿日期：2000-08-11), http://www.100md.com