生物疗法在荷瘤裸鼠体内的抗瘤效应
作者：吕同德 于兰 陈新民 邓芝云 张元平 杨霄鹏 张百炼
单位：吕同德 于兰 陈新民 邓芝云 张元平 杨霄鹏(兰州军区总医院实验科，兰州730050)；张百炼(甘肃省肿瘤研究所)
关键词：
细胞与分子免疫学杂志990117
肿瘤生物疗法是80年代兴起，并称之为肿瘤治疗的第4种模式〔1〕。目前，在临床上应用的主要是一些细胞因子(cytokines)和淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine activated killer cells,LAK细胞)，但治疗效果评价不一。为了进一步研究这些生物制品的抗瘤效应，本文做了如下探索。
1 材料和方法
1.1 实验动物和细胞 Ba1b/c裸鼠，6周～8周龄，共15只，分成1个对照组和4个实验组。脾细胞：取新鲜胎脾用RPMI-1640制备成1×1012/L细胞悬液，37℃、5%CO2条件下培养3d～5d。
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1.2 主要试剂 ①IL-2(军事医学科学院产品)，分别用生理盐水配制成1000U/ml和4000U/ml。②抗CD3mAb为军事医学科学院产品。
1.3 LAK细胞的制备
1.3.1 IL-2/LAK细胞取胎脾和胸腺制成细胞悬液，以5×109/L细胞浓度置于含IL-2(7×105U/L)和10%人AB血清的RPMI-1640完全培养基中，于37℃、5%CO2条件下培养。收集培养第3d～5d的细胞作为效应细胞。
1.3.2 CD3-IL-2/LAK细胞在常规制备的LAK细胞中，加入抗CD3mAb，诱导浓度为20μg/L。
1.4 低分化人胃癌细胞系裸鼠移植试验 收集对数生长期的胃癌细胞(GGC-8140)，制备成1×103/L细胞悬液，每只裸鼠背部皮下注射0.3ml。
, 百拇医药
1.5 LAK细胞的活性测定 按参考文献〔2〕的方法进行。
1.6 抗瘤试验 对照组注射生理盐水。实验组每只鼠于肿瘤局部每次分别注射IL-2(500U～4000U)，脾细胞(0.3×107～2×109),IL-2/LAK(IL-2为500U～2000U，LAK为0.5×107～2×109)和抗CD3mAbIL-2/LAK(IL-2为500U～2000U；LAK为0.5×107～2×109；抗CD3mAb为5ng～10ng),0.5ml/只，隔日1次，共18次。每次注射前测量肿瘤的大小，注射后定时观察动物的生活情况。
2 结果
2.1 荷胃癌裸鼠模型的建立 接种癌细胞2周后，皮下形成瘤结，瘤体大小不等，小者0.60cm×0.60cm,大者2.75cm×1.87cm,成瘤率达100%。病理形态学检查符合低分化人胃腺癌的特征。
, 百拇医药
2.2 几种生物疗法对荷瘤裸鼠生存时间的影响 荷瘤裸鼠当用生理盐水处理时，平均生存时间为34.0d;单纯注射IL-2组为44.3d；单纯注射脾细胞组为32.7d；注射IL-2/LAK细胞组为44.3d;而注射抗CD3mAb-IL-2/LAK细胞者则大于47.0d。
2.3 几种生物疗法对瘤体大小的影响 按上述方法共注射18次。注射抗CD3mAb-IL-2/LAK细胞组于注射第6次后，瘤体表面液化；注射第8次后,瘤体开始坏死缩小；注射第10次后,瘤体坏死脱落;注射第18次后,瘤体局部基本愈合(表1，图1)。其他4组均未能使瘤体缩小。
表1 几种生物疗法对瘤体大小的影响 处理方法
瘤体大小(cm)
处理前
处理后
, 百拇医药
生理盐水
0.88×0.88
1.80×1.80
IL-2
0.62×0.62
1.50×1.90
脾细胞
1.48×0.8
1.85×0.87
IL-2/LAK
0.71×0.71
1.17×1.12
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抗CD3mAb-IL-2/LAK
1.14×1.14
坏死、脱落
图1局部注射抗CD3mAb-IL-2/LAK细胞前后对瘤体的影响
A：瘤体大小为1.14cm×1.14cm;B:第8次注射后瘤体缩小至1.0cm×0.8cm；C：第18次注射后，瘤体脱落、愈合
3 讨论
70年代曾报道，输入特异性T淋巴细胞具有抗肿瘤的作用。80年代以来，又开展了以细胞因子和LAK细胞为特征的肿瘤生物疗法。
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以往研究证实，LAK细胞可直接杀伤肿瘤细胞，抑制瘤细胞转移，延长荷瘤小鼠存活时间〔3，4〕，但临床应用效果评价不一。我们以荷胃癌裸鼠为模型，分别观察了脾细胞、IL-2,IL-2/LAK细胞及抗CD3mAb-IL-2/LAK细胞的抗瘤效应。结果表明，最后一种生物疗法具有延长荷瘤裸鼠的存活时间，并能使瘤体缩小、坏死、脱落及愈合的效应，与Anderson等〔5〕关于抗CD3mAb和IL-2与LAK细胞联合培养可明显增加LAK细胞数量及其杀伤活性的报道相似。这一实验研究的结果，对临床上采用以LAK细胞为代表的肿瘤生物疗法具有一定的参考意义。
作者简介：吕同德，男，44岁，副主任医师，医学硕士
兰州市小西湖西街98号，Tel.(0931)8975222
参考文献
[1]田志刚，孙纳.肿瘤治疗的第4种模式—生物疗法.实用肿瘤学杂志，1991；5：76-79
, 百拇医药
[2]韩福刚，许红兵，梁厚勤.LAK细胞和IL-2治疗晚期肝癌10例.中华肿瘤杂志，1991；13(2)：145-147
[3]Rosenberg SA. Observation on the systemic administation of autologous LAK cells and IL-2 to patients with metastatic cancer. NEJM, 1985；-313(23): 1485-1492
[4]Rosenberg SA. A progress report on the treatment of 157 patients with advanced cancer using LAK cells and IL-2 or high-dose IL-2 alone. NEJM, 1987；316(15): 889-897
[5]Anderson PM, Blazar BR， Bach FH, et al. Anti-CD3+ IL-2 stimulated murine killer cells in vitro generation and in vivo antitumor activity. J Immunol, 1989; 142(4):1383-1394
(收稿 1998-05-25 修回 1998-06-15), 百拇医药
单位：吕同德 于兰 陈新民 邓芝云 张元平 杨霄鹏(兰州军区总医院实验科，兰州730050)；张百炼(甘肃省肿瘤研究所)
关键词：
细胞与分子免疫学杂志990117
肿瘤生物疗法是80年代兴起，并称之为肿瘤治疗的第4种模式〔1〕。目前，在临床上应用的主要是一些细胞因子(cytokines)和淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine activated killer cells,LAK细胞)，但治疗效果评价不一。为了进一步研究这些生物制品的抗瘤效应，本文做了如下探索。
1 材料和方法
1.1 实验动物和细胞 Ba1b/c裸鼠，6周～8周龄，共15只，分成1个对照组和4个实验组。脾细胞：取新鲜胎脾用RPMI-1640制备成1×1012/L细胞悬液，37℃、5%CO2条件下培养3d～5d。
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1.2 主要试剂 ①IL-2(军事医学科学院产品)，分别用生理盐水配制成1000U/ml和4000U/ml。②抗CD3mAb为军事医学科学院产品。
1.3 LAK细胞的制备
1.3.1 IL-2/LAK细胞取胎脾和胸腺制成细胞悬液，以5×109/L细胞浓度置于含IL-2(7×105U/L)和10%人AB血清的RPMI-1640完全培养基中，于37℃、5%CO2条件下培养。收集培养第3d～5d的细胞作为效应细胞。
1.3.2 CD3-IL-2/LAK细胞在常规制备的LAK细胞中，加入抗CD3mAb，诱导浓度为20μg/L。
1.4 低分化人胃癌细胞系裸鼠移植试验 收集对数生长期的胃癌细胞(GGC-8140)，制备成1×103/L细胞悬液，每只裸鼠背部皮下注射0.3ml。
, 百拇医药
1.5 LAK细胞的活性测定 按参考文献〔2〕的方法进行。
1.6 抗瘤试验 对照组注射生理盐水。实验组每只鼠于肿瘤局部每次分别注射IL-2(500U～4000U)，脾细胞(0.3×107～2×109),IL-2/LAK(IL-2为500U～2000U，LAK为0.5×107～2×109)和抗CD3mAbIL-2/LAK(IL-2为500U～2000U；LAK为0.5×107～2×109；抗CD3mAb为5ng～10ng),0.5ml/只，隔日1次，共18次。每次注射前测量肿瘤的大小，注射后定时观察动物的生活情况。
2 结果
2.1 荷胃癌裸鼠模型的建立 接种癌细胞2周后，皮下形成瘤结，瘤体大小不等，小者0.60cm×0.60cm,大者2.75cm×1.87cm,成瘤率达100%。病理形态学检查符合低分化人胃腺癌的特征。
, 百拇医药
2.2 几种生物疗法对荷瘤裸鼠生存时间的影响 荷瘤裸鼠当用生理盐水处理时，平均生存时间为34.0d;单纯注射IL-2组为44.3d；单纯注射脾细胞组为32.7d；注射IL-2/LAK细胞组为44.3d;而注射抗CD3mAb-IL-2/LAK细胞者则大于47.0d。
2.3 几种生物疗法对瘤体大小的影响 按上述方法共注射18次。注射抗CD3mAb-IL-2/LAK细胞组于注射第6次后，瘤体表面液化；注射第8次后,瘤体开始坏死缩小；注射第10次后,瘤体坏死脱落;注射第18次后,瘤体局部基本愈合(表1，图1)。其他4组均未能使瘤体缩小。
表1 几种生物疗法对瘤体大小的影响 处理方法
瘤体大小(cm)
处理前
处理后
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生理盐水
0.88×0.88
1.80×1.80
IL-2
0.62×0.62
1.50×1.90
脾细胞
1.48×0.8
1.85×0.87
IL-2/LAK
0.71×0.71
1.17×1.12
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抗CD3mAb-IL-2/LAK
1.14×1.14
坏死、脱落
图1局部注射抗CD3mAb-IL-2/LAK细胞前后对瘤体的影响
A：瘤体大小为1.14cm×1.14cm;B:第8次注射后瘤体缩小至1.0cm×0.8cm；C：第18次注射后，瘤体脱落、愈合
3 讨论
70年代曾报道，输入特异性T淋巴细胞具有抗肿瘤的作用。80年代以来，又开展了以细胞因子和LAK细胞为特征的肿瘤生物疗法。
, http://www.100md.com
以往研究证实，LAK细胞可直接杀伤肿瘤细胞，抑制瘤细胞转移，延长荷瘤小鼠存活时间〔3，4〕，但临床应用效果评价不一。我们以荷胃癌裸鼠为模型，分别观察了脾细胞、IL-2,IL-2/LAK细胞及抗CD3mAb-IL-2/LAK细胞的抗瘤效应。结果表明，最后一种生物疗法具有延长荷瘤裸鼠的存活时间，并能使瘤体缩小、坏死、脱落及愈合的效应，与Anderson等〔5〕关于抗CD3mAb和IL-2与LAK细胞联合培养可明显增加LAK细胞数量及其杀伤活性的报道相似。这一实验研究的结果，对临床上采用以LAK细胞为代表的肿瘤生物疗法具有一定的参考意义。
作者简介：吕同德，男，44岁，副主任医师，医学硕士
兰州市小西湖西街98号，Tel.(0931)8975222
参考文献
[1]田志刚，孙纳.肿瘤治疗的第4种模式—生物疗法.实用肿瘤学杂志，1991；5：76-79
, 百拇医药
[2]韩福刚，许红兵，梁厚勤.LAK细胞和IL-2治疗晚期肝癌10例.中华肿瘤杂志，1991；13(2)：145-147
[3]Rosenberg SA. Observation on the systemic administation of autologous LAK cells and IL-2 to patients with metastatic cancer. NEJM, 1985；-313(23): 1485-1492
[4]Rosenberg SA. A progress report on the treatment of 157 patients with advanced cancer using LAK cells and IL-2 or high-dose IL-2 alone. NEJM, 1987；316(15): 889-897
[5]Anderson PM, Blazar BR， Bach FH, et al. Anti-CD3+ IL-2 stimulated murine killer cells in vitro generation and in vivo antitumor activity. J Immunol, 1989; 142(4):1383-1394
(收稿 1998-05-25 修回 1998-06-15), 百拇医药