多药耐药性相关蛋白MRP在胃癌耐药细胞SGC7901中的表达
作者：安华章 毕锋 刘志国 樊代明
单位：第四军医大学西京医院消化病研究所，西安，71003
关键词：
细胞与分子免疫学杂志990223
肿瘤多药耐药性的产生是导致临床上化疗失败的主要原因。本研究观测了胃癌阿霉素耐药细胞SGC7901/Adr中，多药耐药相关蛋白(multidrug resistance related protein,MRP)的表达，以了解其在胃癌细胞耐药中的作用。
1 材料和方法
1.1 药物与试剂 阿霉素(adriamycin,ADR)(Farmitalia carlo Erba)，RPMI-1640(Gibco)，QCRL1杂交瘤上清(加拿大Cole教授惠赠[1])。
, 百拇医药
1.2 细胞培养 人胃低分化腺癌细胞系SGC7901(军事医学科学院惠赠)常规培养于RPMI1640完全培养液内(含10%小牛血清、青霉素1×105U/L及链霉素100mg/L)。SGC7901/Adr[2]持续培养于含0.05mg/L阿霉素的培养液中，实验前2周，改用不含药物的培养液培养。
1.3 MRP表达的分析 取对数生长期SGC7901细胞和SGC7901/Adr细胞,经0.25%胰酶消化后，以800r/min离心收集细胞，冷PBS洗涤2次，台盼蓝染色计数活细胞>95%，再用冷PBS悬浮细胞呈单细胞悬液(5×109细胞/L)。取100μl单细胞悬液，于4℃加入0.5%多聚甲醛(PBS)固定30min，封闭液洗涤(PBS+10%BSA+0.5%正常山羊血清)。加含0.1%Tween-20的封闭液100μl,4℃孵育30min，再加工作浓度的一抗混匀，孵育1h。实验中，以SGC7901细胞为对照：加正常小鼠IgG(1∶500稀释)；以SGC7901和SGC7901/Adr细胞为实验组：加MRP特异性mAb(QCRL-1杂交瘤上清1∶20稀释)。以封闭液洗涤2次，加1∶50荧光标记的山羊抗小鼠IgG，混匀，4℃孵育30min，以PBS洗涤2次，重悬于1ml含1%多聚甲醛的PBS中，以流式细胞仪检测细胞的荧光强度。
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2 结果和讨论
流式细胞仪间接免疫荧光检测表明，MRP在SGC7901细胞、SGC7901/Adr细胞及对照细胞中的表达阳性率和荧光强度，分别为：1.6%、64，14.5%、580及3.5%、138；MRP在SGC7901/Adr细胞中的表达阳性率及荧光强度明显高于SGC7901细胞(P<0.01)。
细胞内药物蓄积减少是最先发现、也是最常见的导致肿瘤产生耐药性的原因。应用流式细胞仪对细胞内Adr荧光强度进行分析表明，胃癌耐药细胞SGC7901/Adr细胞内药物蓄积的减少,可能是其产生多药耐药性的主要机制之一[2]。近年发现，耐药细胞膜表面的P-gp作为药物泵对药物的主动外运,是细胞内药物蓄积减少的主要原因。MRP也具有主动外运细胞内药物的功能[3]。在多数实验中，Adr诱导的耐药细胞具有MRP介导的多药耐药性。因此,我们设想SGC7901/Adr细胞膜表面可能会有MRP的过度表达。我们利用mAbQCRL-1检测了SGC7901细胞和SGC7901/Adr细胞中MRP的表达。流式细胞仪间接免疫荧光强度分析表明,SGC7901/Adr细胞中MRP的表达水平高于SGC7901细胞。MRP的过度表达，可能是SGC7901/Adr细胞产生耐药性的主要分子基础之一。李明峰等[4]发现，胃癌耐药细胞SGC7901/Adr过度表达一种相对分子质量(Mr)为110000的糖蛋白，并与其细胞内药物蓄积的减少有关。关于SGC7901/Adr细胞有无该膜蛋白的过度表达有待于进一步研究。
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作者简介：安华章，男，30岁，博士生。西安市长乐西路15号,Tel.(029)3375229
参考文献
[1]Hipfner DR, Gauldie SD, Deeley RG, et al. Detection of the Mr 190 000 multidrug resistance protein, MRP with monoclonal antibodies. Cancer Res，1994;54:5788～ 5792
[2]安华章，周绍娟，樊代明.一株胃癌耐药细胞系的建立及其耐药的可能机制.现代消化病及内镜杂志，1997;2(2):108～110
[3]Cale SPC, Bhardwaj G, Gerlach JH, et al. Overexpression of a transporter gene in a multidrug-resistant human lung cancer cell line. Science，1992;258:1650～1654
[4]李明峰,樊代明,周绍娟.胃癌细胞耐药相关性单克隆抗体的制备及初步鉴定.现代肿瘤医学，1995;3(3):143～145
收稿：1998-06-11
修回：1999-02-05, http://www.100md.com
单位：第四军医大学西京医院消化病研究所，西安，71003
关键词：
细胞与分子免疫学杂志990223
肿瘤多药耐药性的产生是导致临床上化疗失败的主要原因。本研究观测了胃癌阿霉素耐药细胞SGC7901/Adr中，多药耐药相关蛋白(multidrug resistance related protein,MRP)的表达，以了解其在胃癌细胞耐药中的作用。
1 材料和方法
1.1 药物与试剂 阿霉素(adriamycin,ADR)(Farmitalia carlo Erba)，RPMI-1640(Gibco)，QCRL1杂交瘤上清(加拿大Cole教授惠赠[1])。
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1.2 细胞培养 人胃低分化腺癌细胞系SGC7901(军事医学科学院惠赠)常规培养于RPMI1640完全培养液内(含10%小牛血清、青霉素1×105U/L及链霉素100mg/L)。SGC7901/Adr[2]持续培养于含0.05mg/L阿霉素的培养液中，实验前2周，改用不含药物的培养液培养。
1.3 MRP表达的分析 取对数生长期SGC7901细胞和SGC7901/Adr细胞,经0.25%胰酶消化后，以800r/min离心收集细胞，冷PBS洗涤2次，台盼蓝染色计数活细胞>95%，再用冷PBS悬浮细胞呈单细胞悬液(5×109细胞/L)。取100μl单细胞悬液，于4℃加入0.5%多聚甲醛(PBS)固定30min，封闭液洗涤(PBS+10%BSA+0.5%正常山羊血清)。加含0.1%Tween-20的封闭液100μl,4℃孵育30min，再加工作浓度的一抗混匀，孵育1h。实验中，以SGC7901细胞为对照：加正常小鼠IgG(1∶500稀释)；以SGC7901和SGC7901/Adr细胞为实验组：加MRP特异性mAb(QCRL-1杂交瘤上清1∶20稀释)。以封闭液洗涤2次，加1∶50荧光标记的山羊抗小鼠IgG，混匀，4℃孵育30min，以PBS洗涤2次，重悬于1ml含1%多聚甲醛的PBS中，以流式细胞仪检测细胞的荧光强度。
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2 结果和讨论
流式细胞仪间接免疫荧光检测表明，MRP在SGC7901细胞、SGC7901/Adr细胞及对照细胞中的表达阳性率和荧光强度，分别为：1.6%、64，14.5%、580及3.5%、138；MRP在SGC7901/Adr细胞中的表达阳性率及荧光强度明显高于SGC7901细胞(P<0.01)。
细胞内药物蓄积减少是最先发现、也是最常见的导致肿瘤产生耐药性的原因。应用流式细胞仪对细胞内Adr荧光强度进行分析表明，胃癌耐药细胞SGC7901/Adr细胞内药物蓄积的减少,可能是其产生多药耐药性的主要机制之一[2]。近年发现，耐药细胞膜表面的P-gp作为药物泵对药物的主动外运,是细胞内药物蓄积减少的主要原因。MRP也具有主动外运细胞内药物的功能[3]。在多数实验中，Adr诱导的耐药细胞具有MRP介导的多药耐药性。因此,我们设想SGC7901/Adr细胞膜表面可能会有MRP的过度表达。我们利用mAbQCRL-1检测了SGC7901细胞和SGC7901/Adr细胞中MRP的表达。流式细胞仪间接免疫荧光强度分析表明,SGC7901/Adr细胞中MRP的表达水平高于SGC7901细胞。MRP的过度表达，可能是SGC7901/Adr细胞产生耐药性的主要分子基础之一。李明峰等[4]发现，胃癌耐药细胞SGC7901/Adr过度表达一种相对分子质量(Mr)为110000的糖蛋白，并与其细胞内药物蓄积的减少有关。关于SGC7901/Adr细胞有无该膜蛋白的过度表达有待于进一步研究。
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作者简介：安华章，男，30岁，博士生。西安市长乐西路15号,Tel.(029)3375229
参考文献
[1]Hipfner DR, Gauldie SD, Deeley RG, et al. Detection of the Mr 190 000 multidrug resistance protein, MRP with monoclonal antibodies. Cancer Res，1994;54:5788～ 5792
[2]安华章，周绍娟，樊代明.一株胃癌耐药细胞系的建立及其耐药的可能机制.现代消化病及内镜杂志，1997;2(2):108～110
[3]Cale SPC, Bhardwaj G, Gerlach JH, et al. Overexpression of a transporter gene in a multidrug-resistant human lung cancer cell line. Science，1992;258:1650～1654
[4]李明峰,樊代明,周绍娟.胃癌细胞耐药相关性单克隆抗体的制备及初步鉴定.现代肿瘤医学，1995;3(3):143～145
收稿：1998-06-11
修回：1999-02-05, http://www.100md.com