胰岛素样生长因子Ⅰ型受体蛋白及增殖细胞核抗原在银屑病皮损中的表达
作者：肖征 高进 胡长发 张建平 周利平
单位：430022 武汉市第一医院皮肤科
关键词：
中华皮肤科杂志980221.htm
胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)是膜表面受体，具有酪氨酸激酶活性。增殖细胞核抗原(PCNA)直接参与DNA合成，它们的表达对角朊细胞的增殖与分化可能具有调控作用。为此我们应用免疫组化技术分别研究IGF-IR及PCNA在正常人及银屑病患者表皮中的表达定位，以了解它们在银屑病发病机理中对角朊细胞的增殖与分化方面可能起的作用。
一、资料和方法
(一)资料：寻常型银屑病15例，均经HE染色组织病理学检查确诊证实，其中男7例，女8例，年龄13～67岁，活检取患者典型皮损；正常皮肤组织块6例，均源于外科整形手术，其中男女各3例，年龄20～50岁。所有标本均经10%福尔马林液固定，石蜡包埋。
, 百拇医药
(二)试剂：多聚赖氨酸(Sigma公司)，兔抗人IGF-IR多克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，鼠抗人PCNA(北京中山生物技术有限公司)，SPTM试剂盒(美国Zymed公司)。
(三)免疫组化染色：切片常规脱蜡至水，3%双氧水灭活内源性过氧化物酶，滴加10%羊血清，然后分别加入抗IGF-IR的多克隆抗体(1∶40)及抗PCNA的单克隆抗体(1∶50)4℃过夜，再加生物素标记二抗，37℃ 20分钟，最后滴加HRP标记的链霉亲和素，上述每一步均用PBS充分洗涤，DAB显色，苏木素轻度复染，常规脱水、透明、封片。 (四)对照：阳性对照：取已知阳性正常表皮；阴性对照：用PBS取代一抗，其余步骤相同。
(五)结果判断：在排除非特异性染色的情况下，细胞膜出现棕黄色为IGF-IR阳性细胞，细胞核出现棕黄色为PCNA阳性细胞，根据染色强度分为4级：(-)阴性，(+)淡棕色，(++)棕色，(+++)褐色。应用
, 百拇医药
附表 银屑病患者与正常人表皮中胰岛素样生长因子Ⅰ型受体
及增殖细胞核抗原的表达(
±s) 组 别
例数
胰岛素样生长因子Ⅰ型受体
增殖细胞核抗原
面密度
积分光密度
积分光密度
阳性细胞数
银屑病组
15
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17.5111±2.4718
17.1171±4.1205
6.4168±0.8437
10.1667±4.1673
正常人组
6
2.8933±0.6728
4.1145±0.9712
5.3907±1.4948
7.1667±1.4720
t值
, 百拇医药
-
13.9774
7.54
1.46
-
P值
-
<0.01
<0.01
>0.05
-
MPIAS-500多媒体彩色病理分析系统(同济医科大学太阳公司)，在42 560μm2测量窗口下进行测量，测得PCNA阳性细胞数及积分光密度值，在173 200μm2测量窗口下测得IGF-IR的总面积与测量窗面积之比即面密度，积分光密度值，并作t检验，进行统计学分析。 二、结果
, 百拇医药
15例银屑病患者表皮基底细胞层及棘细胞层细胞膜表面均可见棕色IGF-IR表达，颗粒层细胞膜表面可见淡黄色IGF-IR表达，角质层无表达；6例正常人表皮除基底细胞层细胞膜表面可见IGF-IR表达外，其余各层均未见表达；银屑病组及正常人均只有基底细胞层偶见核染成淡黄色的PCNA阳性细胞，其余各层均无表达。
2.银屑病患者IGF-IR的面密度值与正常人比较有显著性差异；他们的积分光密度值亦有显著性差异。银屑病患者与正常人表皮PCNA积分光密度值相比无显著性差异(P>0.05)；他们的阳性细胞数分别为10.1667±4.1673及7.1667±1.4720。详见附表。
三、讨论
IGF-IR是由α、β亚基组成的四聚体，其基因定位于人第15条染色体上，IGF-IR与IGF-I具有高度的亲和力，结合后可激活酪氨酸激酶活性，表现为细胞的增殖与分化作用。Krane等[1]用IGF-IR的单克隆抗体进行免疫组化研究发现银屑病表皮中IGF-IR过度表达，定位于基底层及棘层下部，与银屑病表皮中角朊细胞增殖的空间大小一致。Hodak等[2]也证实Krane等观点，并发现该受体的调节与不同的表皮分化状态有关，在高分化的上皮细胞膜，该受体的表达呈下调状态。我们应用IGF-IR的多克隆抗体研究银屑病皮损中的表达，发现IGF-IR在增殖活性很强的基底细胞层及棘细胞层膜表面表达，与文献报道一致[1～3]，而角质层没有IGF-IR表达，表明随着角朊细胞的逐渐分化完全，角朊细胞已不再表达IGF-IR，由此看来，IGF-IR可能与角朊细胞的分化也密切有关。我们通过图像分析技术，对银屑病角朊细胞及正常人角朊细胞表面IGF-IR的面密度与积分光密度值进行测量并作统计学分析，发现两者间存在显著性差异，说明银屑病表皮中IGF-IR的表达在数量与程度上与正常表皮不同，并显著高于正常表皮，提示通过对IGF-IR的研究可间接反映IGF-I对银屑病角朊细胞的促增殖与分化作用。PCNA是一种分子量为36 000的非组蛋白性核蛋白，它作为DNA聚合酶δ的辅助因子直接参与DNA合成，可出现在细胞周期G1后期、S期及G2期，是近年来出现的细胞增殖活性标记之一。银屑病角朊细胞分化不完全，PCNA表达与正常表皮无显著性差异，说明银屑病的角朊细胞是良性炎症性增殖，而IGF-IR可以作为反映银屑病角朊细胞增殖与分化程度的一个指标。
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志谢 同济医科大学免疫病理教研室刘绍春教授
参 考 文 献
1 Krane JT, Gottlieb AB, Carter DM, et al. The insulin-like growth factor 1 receptor is over expressed in psoriatic epidermis, but is differentially regulated from the epidermal growth factor receptor. J Exp Med, 1992,175∶1081-1090.
2 Hodak E, Gottlieb AB, Anzilotti M, et al. The insulin-like growth factor 1 receptor is expressed by epithelial cells with proliferative potential in human epidermis and skin appendages: correlation of increased expression with epidermal hyperplasia. J Invest Dermatol, 1996,106∶564-570.
3 何春涤, 陈洪铎, 王雅坤, 等. 几种皮肤良恶性肿瘤p53蛋白及增殖细胞核抗原表达的观察. 中华皮肤科杂志, 1996,29∶440-441.
(收稿：1997-08-20 修回：1997-12-22), 百拇医药
单位：430022 武汉市第一医院皮肤科
关键词：
中华皮肤科杂志980221.htm
胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)是膜表面受体，具有酪氨酸激酶活性。增殖细胞核抗原(PCNA)直接参与DNA合成，它们的表达对角朊细胞的增殖与分化可能具有调控作用。为此我们应用免疫组化技术分别研究IGF-IR及PCNA在正常人及银屑病患者表皮中的表达定位，以了解它们在银屑病发病机理中对角朊细胞的增殖与分化方面可能起的作用。
一、资料和方法
(一)资料：寻常型银屑病15例，均经HE染色组织病理学检查确诊证实，其中男7例，女8例，年龄13～67岁，活检取患者典型皮损；正常皮肤组织块6例，均源于外科整形手术，其中男女各3例，年龄20～50岁。所有标本均经10%福尔马林液固定，石蜡包埋。
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(二)试剂：多聚赖氨酸(Sigma公司)，兔抗人IGF-IR多克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，鼠抗人PCNA(北京中山生物技术有限公司)，SPTM试剂盒(美国Zymed公司)。
(三)免疫组化染色：切片常规脱蜡至水，3%双氧水灭活内源性过氧化物酶，滴加10%羊血清，然后分别加入抗IGF-IR的多克隆抗体(1∶40)及抗PCNA的单克隆抗体(1∶50)4℃过夜，再加生物素标记二抗，37℃ 20分钟，最后滴加HRP标记的链霉亲和素，上述每一步均用PBS充分洗涤，DAB显色，苏木素轻度复染，常规脱水、透明、封片。 (四)对照：阳性对照：取已知阳性正常表皮；阴性对照：用PBS取代一抗，其余步骤相同。
(五)结果判断：在排除非特异性染色的情况下，细胞膜出现棕黄色为IGF-IR阳性细胞，细胞核出现棕黄色为PCNA阳性细胞，根据染色强度分为4级：(-)阴性，(+)淡棕色，(++)棕色，(+++)褐色。应用
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附表 银屑病患者与正常人表皮中胰岛素样生长因子Ⅰ型受体
及增殖细胞核抗原的表达(
±s) 组 别例数
胰岛素样生长因子Ⅰ型受体
增殖细胞核抗原
面密度
积分光密度
积分光密度
阳性细胞数
银屑病组
15
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17.5111±2.4718
17.1171±4.1205
6.4168±0.8437
10.1667±4.1673
正常人组
6
2.8933±0.6728
4.1145±0.9712
5.3907±1.4948
7.1667±1.4720
t值
, 百拇医药
-
13.9774
7.54
1.46
-
P值
-
<0.01
<0.01
>0.05
-
MPIAS-500多媒体彩色病理分析系统(同济医科大学太阳公司)，在42 560μm2测量窗口下进行测量，测得PCNA阳性细胞数及积分光密度值，在173 200μm2测量窗口下测得IGF-IR的总面积与测量窗面积之比即面密度，积分光密度值，并作t检验，进行统计学分析。 二、结果
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15例银屑病患者表皮基底细胞层及棘细胞层细胞膜表面均可见棕色IGF-IR表达，颗粒层细胞膜表面可见淡黄色IGF-IR表达，角质层无表达；6例正常人表皮除基底细胞层细胞膜表面可见IGF-IR表达外，其余各层均未见表达；银屑病组及正常人均只有基底细胞层偶见核染成淡黄色的PCNA阳性细胞，其余各层均无表达。
2.银屑病患者IGF-IR的面密度值与正常人比较有显著性差异；他们的积分光密度值亦有显著性差异。银屑病患者与正常人表皮PCNA积分光密度值相比无显著性差异(P>0.05)；他们的阳性细胞数分别为10.1667±4.1673及7.1667±1.4720。详见附表。
三、讨论
IGF-IR是由α、β亚基组成的四聚体，其基因定位于人第15条染色体上，IGF-IR与IGF-I具有高度的亲和力，结合后可激活酪氨酸激酶活性，表现为细胞的增殖与分化作用。Krane等[1]用IGF-IR的单克隆抗体进行免疫组化研究发现银屑病表皮中IGF-IR过度表达，定位于基底层及棘层下部，与银屑病表皮中角朊细胞增殖的空间大小一致。Hodak等[2]也证实Krane等观点，并发现该受体的调节与不同的表皮分化状态有关，在高分化的上皮细胞膜，该受体的表达呈下调状态。我们应用IGF-IR的多克隆抗体研究银屑病皮损中的表达，发现IGF-IR在增殖活性很强的基底细胞层及棘细胞层膜表面表达，与文献报道一致[1～3]，而角质层没有IGF-IR表达，表明随着角朊细胞的逐渐分化完全，角朊细胞已不再表达IGF-IR，由此看来，IGF-IR可能与角朊细胞的分化也密切有关。我们通过图像分析技术，对银屑病角朊细胞及正常人角朊细胞表面IGF-IR的面密度与积分光密度值进行测量并作统计学分析，发现两者间存在显著性差异，说明银屑病表皮中IGF-IR的表达在数量与程度上与正常表皮不同，并显著高于正常表皮，提示通过对IGF-IR的研究可间接反映IGF-I对银屑病角朊细胞的促增殖与分化作用。PCNA是一种分子量为36 000的非组蛋白性核蛋白，它作为DNA聚合酶δ的辅助因子直接参与DNA合成，可出现在细胞周期G1后期、S期及G2期，是近年来出现的细胞增殖活性标记之一。银屑病角朊细胞分化不完全，PCNA表达与正常表皮无显著性差异，说明银屑病的角朊细胞是良性炎症性增殖，而IGF-IR可以作为反映银屑病角朊细胞增殖与分化程度的一个指标。
, http://www.100md.com
志谢 同济医科大学免疫病理教研室刘绍春教授
参 考 文 献
1 Krane JT, Gottlieb AB, Carter DM, et al. The insulin-like growth factor 1 receptor is over expressed in psoriatic epidermis, but is differentially regulated from the epidermal growth factor receptor. J Exp Med, 1992,175∶1081-1090.
2 Hodak E, Gottlieb AB, Anzilotti M, et al. The insulin-like growth factor 1 receptor is expressed by epithelial cells with proliferative potential in human epidermis and skin appendages: correlation of increased expression with epidermal hyperplasia. J Invest Dermatol, 1996,106∶564-570.
3 何春涤, 陈洪铎, 王雅坤, 等. 几种皮肤良恶性肿瘤p53蛋白及增殖细胞核抗原表达的观察. 中华皮肤科杂志, 1996,29∶440-441.
(收稿：1997-08-20 修回：1997-12-22), 百拇医药