p21与p53蛋白在银屑病皮损中的表达
作者：徐世正 王宏伟 王秀丽 熊腊元
单位：430060 武汉，湖北医科大学附属第一医院皮肤性病科
关键词：
中华皮肤科杂志980218.htm 银屑病是一种皮肤表皮细胞良性增生性疾病，其发病机理仍不清楚。近年来发现ras基因和p53基因与肿瘤细胞的增生有关[1～3]。为探讨ras基因和p53基因与银屑病皮损发生、发展的关系，我们分别对13例银屑病患者皮损内ras基因表达的p21蛋白和p53基因表达的p53蛋白进行了免疫组化研究。
一、病例和方法
1.病例资料：随机选择1996年5～12月门诊就诊的13例进行期斑块状银屑病患者，其中男8例，女5例；年龄19～50岁；病程半年至10年。诊断依据临床表现及组织病理学检查。4例正常人对照来自皮肤外伤患者创口周边外观正常皮肤。
, 百拇医药
2.试剂：鼠抗人多克隆p21抗体、鼠抗人p53单克隆抗体均为美国Santa Cruz公司产品，批号分别为SC817、SC126。链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物(SABC)试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供。防脱片剂APES为Sigma公司产品。
3.免疫组化染色：载玻片先以APES处理，石蜡包埋组织连续制厚4～5μm的切片。切片经脱蜡、水化，再以3% H2O2灭活内源性酶，微波修复抗原及正常山羊血清分别处理标本，然后分别滴加p21和p53单抗(稀释度均为1∶50)，4℃过夜，先后滴加生物素化二抗及SABC复合物。以上每一步骤前均以0.1mol/L PBS缓冲液(pH7.4)充分浸洗标本，最后DAB显色，苏木素轻度复染、脱水、透明、封片。每次实验均用已知阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
4.判断标准：①p21蛋白表达：免疫组化染色阳性为棕黄色，不着色为阴性；p21蛋白定位于胞浆及胞膜。②p53蛋白表达：染色阳性为棕黄色，不着色为阴性；p53蛋白定位于细胞核。参照Garcia[4]的判断方法，确定上述二种蛋白阳性反应细胞的半定量分级：细胞浅棕黄色为1，深棕黄色为2；阳性细胞比例<20%为1，20%～50%为2，50%以上者为3。上述两项相加等于2～2.9者为弱阳性(+)，3～3.9者为阳性()，≥4者为强阳性()。
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二、结果
正常人皮肤表皮中未见p21蛋白和p53蛋白表达。13例银屑病患者皮损中全部出现p21蛋白阳性染色，其中p21阳性4例，强阳性9例，阳性细胞弥漫分布于除角质层外的表皮全层细胞(图1)。但是，13例进行期银屑病患者皮损中p53蛋白表达全部阴性。p21蛋白和p53蛋白的阳性对照均为棕黄色阳性细胞，阴性均无棕黄色着色。
三、讨论
本研究表明，在正常皮肤表皮中p21蛋白和p53蛋白表达均为阴性。而在13例进行期银屑病患者皮损中，p21则全部出现阳性表达，除角质层外，阳性细胞弥漫分布于基底层及棘细胞层。p21过度表达提示其参与银屑病患者皮损角朊细胞增殖、分化的调节，并与银屑病皮损角朊细胞的过度增生及分化密切相关。本研究未
, http://www.100md.com 图1 银屑病皮损表皮细胞p21蛋白
强阳性表达(×20)
能检出p53蛋白在银屑病皮损内的表达，而且13例皮损中全部阴性。说明p53蛋白对银屑病皮损的发生影响不大。
参 考 文 献
1 Kobayshi H, Yasuda H, Ohkawara A, et al. Enhanced exprssion of ras gene products psoriatic epidermis. Arch Dermatol Res, 1988,280∶259-263.
2 Inohara S, Kitagawa K, Kitano Y. Coexpression of p21 waf1/cip1 and p53 in sunexposed normal epidermis, but not neoplastic epidermis. Br J Dermatol, 1996,135∶717-720.
, http://www.100md.com
3 Bond JA, Blaydes JP, Rowson J, et al. Mutant p53 rescues human diploid cells from senescence without inhibiting the induction of SDI1/WAF1. Cancer Res, 1995,55∶2404-2409.
4 Garcia RL, Coltrera MD, Gown AW. Analysis of proliferative grade using anti PCNA/cyclin monoclonal antibodies in fixed, embedded tissues: comparison with flow cytometric analysis. Am J Pathol, 1989,134∶733.
(收稿：1997-04-17 修回：1997-08-29), http://www.100md.com
单位：430060 武汉，湖北医科大学附属第一医院皮肤性病科
关键词：
中华皮肤科杂志980218.htm 银屑病是一种皮肤表皮细胞良性增生性疾病，其发病机理仍不清楚。近年来发现ras基因和p53基因与肿瘤细胞的增生有关[1～3]。为探讨ras基因和p53基因与银屑病皮损发生、发展的关系，我们分别对13例银屑病患者皮损内ras基因表达的p21蛋白和p53基因表达的p53蛋白进行了免疫组化研究。
一、病例和方法
1.病例资料：随机选择1996年5～12月门诊就诊的13例进行期斑块状银屑病患者，其中男8例，女5例；年龄19～50岁；病程半年至10年。诊断依据临床表现及组织病理学检查。4例正常人对照来自皮肤外伤患者创口周边外观正常皮肤。
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2.试剂：鼠抗人多克隆p21抗体、鼠抗人p53单克隆抗体均为美国Santa Cruz公司产品，批号分别为SC817、SC126。链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物(SABC)试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供。防脱片剂APES为Sigma公司产品。
3.免疫组化染色：载玻片先以APES处理，石蜡包埋组织连续制厚4～5μm的切片。切片经脱蜡、水化，再以3% H2O2灭活内源性酶，微波修复抗原及正常山羊血清分别处理标本，然后分别滴加p21和p53单抗(稀释度均为1∶50)，4℃过夜，先后滴加生物素化二抗及SABC复合物。以上每一步骤前均以0.1mol/L PBS缓冲液(pH7.4)充分浸洗标本，最后DAB显色，苏木素轻度复染、脱水、透明、封片。每次实验均用已知阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
4.判断标准：①p21蛋白表达：免疫组化染色阳性为棕黄色，不着色为阴性；p21蛋白定位于胞浆及胞膜。②p53蛋白表达：染色阳性为棕黄色，不着色为阴性；p53蛋白定位于细胞核。参照Garcia[4]的判断方法，确定上述二种蛋白阳性反应细胞的半定量分级：细胞浅棕黄色为1，深棕黄色为2；阳性细胞比例<20%为1，20%～50%为2，50%以上者为3。上述两项相加等于2～2.9者为弱阳性(+)，3～3.9者为阳性()，≥4者为强阳性()。
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二、结果
正常人皮肤表皮中未见p21蛋白和p53蛋白表达。13例银屑病患者皮损中全部出现p21蛋白阳性染色，其中p21阳性4例，强阳性9例，阳性细胞弥漫分布于除角质层外的表皮全层细胞(图1)。但是，13例进行期银屑病患者皮损中p53蛋白表达全部阴性。p21蛋白和p53蛋白的阳性对照均为棕黄色阳性细胞，阴性均无棕黄色着色。
三、讨论
本研究表明，在正常皮肤表皮中p21蛋白和p53蛋白表达均为阴性。而在13例进行期银屑病患者皮损中，p21则全部出现阳性表达，除角质层外，阳性细胞弥漫分布于基底层及棘细胞层。p21过度表达提示其参与银屑病患者皮损角朊细胞增殖、分化的调节，并与银屑病皮损角朊细胞的过度增生及分化密切相关。本研究未
, http://www.100md.com 图1 银屑病皮损表皮细胞p21蛋白
强阳性表达(×20)
能检出p53蛋白在银屑病皮损内的表达，而且13例皮损中全部阴性。说明p53蛋白对银屑病皮损的发生影响不大。
参 考 文 献
1 Kobayshi H, Yasuda H, Ohkawara A, et al. Enhanced exprssion of ras gene products psoriatic epidermis. Arch Dermatol Res, 1988,280∶259-263.
2 Inohara S, Kitagawa K, Kitano Y. Coexpression of p21 waf1/cip1 and p53 in sunexposed normal epidermis, but not neoplastic epidermis. Br J Dermatol, 1996,135∶717-720.
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3 Bond JA, Blaydes JP, Rowson J, et al. Mutant p53 rescues human diploid cells from senescence without inhibiting the induction of SDI1/WAF1. Cancer Res, 1995,55∶2404-2409.
4 Garcia RL, Coltrera MD, Gown AW. Analysis of proliferative grade using anti PCNA/cyclin monoclonal antibodies in fixed, embedded tissues: comparison with flow cytometric analysis. Am J Pathol, 1989,134∶733.
(收稿：1997-04-17 修回：1997-08-29), http://www.100md.com