银屑病患者白细胞流变性和白细胞CD18表达及血清sICAM-1浓度的变化
作者：刘成玉 王桂芝 谭润鸾
单位：266021 青岛医学院诊断学教研室(刘成玉 谭润鸾)，皮肤病研究所(王桂芝)
关键词：银屑病；细胞粘着分子；白细胞流变性
中华皮肤科杂志980205.htm 【摘要】 目的 探讨白细胞流变性和细胞粘附分子(CAMS)表达与银屑病的关系。方法 采用ELISA法、红细胞变形能力测定仪和体外血栓血小板粘附两用仪检测了115例银屑病患者和89例健康人白细胞CD18表达、血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)浓度、白细胞滤过指数(LFI)和白细胞粘附率(LAR)的变化。结果 银屑病患者白细胞CD18表达、sICAM-1浓度、LFI和LAR均明显增高，与对照组比较差异均有显著性，且随着银屑病皮损加重，各指标增高逐渐明显。银屑病患者LFI、LAR与白细胞CD18表达和sICAM-1浓度呈正相关，LFI与LAR呈正相关。结论 白细胞流变性异常和细胞粘附分子表达增高与银屑病发病及皮损严重程度有关。
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The Changes of Leukocyte Rheology, Expression of Leukocyte CD18 and the Concentration of Serum Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1 in Patients with Psoriasis Liu Chengyu, Wang Guizhi, Tan Runluan. Department of Diagnostics, Qingdao Medical College, Qingdao 266021
【Abstract】 Objective To explore the correlation between the leukocyte rheology, cell adhesion molecule(CAM) expression and psoriasis. Methods Enzyme linked immunosorbent assay(ELISA), erythrocyte deformability apparatus and in vitro thrombus and platelet adhesion dual-purpose apparatus were used to determine the changes of leukocyte CD18 expression, levels of serum soluble intercelular adhesion molecule-1(sICAM-1), and the changes of leukocyte filtration index(LFI) and leukocyte adhesion rate(LAR). Results The leukocyte CD18 expression, sICAM-1 level, LFI and LAR were significantly increased in patients with psoriasis than those in controls(P<0.01), and along with the exacerbation of psoriatic skin lesions all the above parameters increased (P<0.01). The LFI and LAR in the patients were positively correlated to the expression of leukocyte CD18 and the sICAM-1 concentration (r=0.718, 0.669, 0.626, 0.680, P<0.01), LFI was positively correlated to LAR (r=0.588, P<0.01). Conclusion These results indicated that the abnormalities of leukocyte rheology and the increase of CAMs expression were closely related to the pathogenesis of psoriasis and the severity of psoriatic skin lesions.
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【Key words】 Psoriasis Cell adhesion molecules Leukocyte rheology
研究表明，白细胞参与银屑病的发生与发展[1]，但外周血白细胞流变性、白细胞CD18表达及血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)浓度变化与银屑病的关系尚不清楚。为此，我们检测了115例银屑病患者白细胞变形能力(LD)、白细胞粘附功能(LAF)、白细胞CD18表达及血清sICAM-1浓度的变化，以探讨白细胞流变性和细胞粘附分子(CAMS)与银屑病的关系。
资料和方法
一、临床资料
(一)银屑病组：选择确诊的银屑病患者115例，男75例，女40例；平均年龄37.7±10.4岁。115例患者中，进行期46例，静止期32例，消退期37例。所有患者均未行糖皮质激素治疗。
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(二)对照组：选择健康体检者89例，男62例，女27例；平均年龄38.0±11.5岁。
二、方法
(一)LD测定：EDTA-2Na抗凝血，采用percoll梯度离心法分离白细胞，用Tris缓冲液(Tris 10mmol/L, CaCl2 2mmol/L，葡萄糖10mmol/L, NaCl 154mmol/L, pH7.40)洗涤3次后，用Tris缓冲液配制成3×109/L的白细胞悬液。采用DXC-300型核孔膜红细胞变形能力测定仪(上海医科大学研制，聚碳酸酯核孔滤膜厚10μm，孔径5μm，孔密度4×105/cm2)，于-1.96kPa压力下，测定缓冲液和白细胞悬液最初0.5ml的滤过时间tb和ts，计算白细胞滤过指数(LFI)
附表 银屑病患者LFI、LAR、白细胞CD18表达和sICAM-1测定结果 组 别
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例数
LFI
LAR(%)
CD18(A*min-1*μg-1)
sICAM-1(μg/L)
±s
t值*±s
t值*±s
t值*±s
, 百拇医药
t值*
对 照 组
89
3.94±0.06
-
23.58±4.30
-
2.66±0.21
-
150.39±58.36
-
银屑病组
, http://www.100md.com 115
5.89±0.11
25.36
65.40±10.26
36.76
5.88±0.40
6.87
306.88±78.30
17.6
进行期
46
7.26±0.14
, http://www.100md.com 35.82
84.25±15.50
38.25
7.85±0.48
7.92
426.48±86.45
21.47
静止期
32
5.35±0.10
18.40
56.96±8.67
, 百拇医药
27.14
5.26±0.37
5.84
291.50±62.20
11.39
消退期
37
4.28±0.07
12.31
48.06±7.21
24.48
4.07±0.26
, 百拇医药
3.55
288.72±58.17
7.64
*与对照组比较，P均<0.01；各指标在银屑病三期之间比较，F=18.35、16.24、21.05、19.63，P均<0.01作为LD的指标。LFI=ts/tb，LD与LFI呈反比关系，即LFI愈大，LD愈小；LFI愈小，LD愈大。
(二)LAF测定：采用WYJ-Ⅲ型体外血栓血小板粘附两用仪，测定粘附前后白细胞数量，计算白细胞粘附率(LAR)作为LAF的指标。LAR愈大，LAF愈大；LAR愈小，LAF愈小。
(三)白细胞CD18表达测定：采用文献[2]方法，结果以每分钟吸光度(A*min-1*μg-1)表示。
, 百拇医药
(四)血清sICAM-1测定：采用ELISA法[3]，药盒购自美国P & D System。
三、统计学方法
检测结果以±s表示，两组间结果比较采用t检验，三组间结果比较采用方差分析，相关关系采用直线相关分析。
结 果
银屑病患者LFI、LAR、白细胞CD18表达和血清sICAM-1浓度均明显增高，与对照组比较差异有极显著性(P<0.01)，各指标三期之间比较均有非常显著性差异(P<0.01)，且进行期患者各指标增高较其他两期更明显，详见附表。银屑病患者LFI、LAR与白细胞CD18表达(分别为r=0.718、0.669，P<0.01)和sICAM-1(分别为r=0.626、0.680，P<0.01)呈正相关，LFI与LAR呈正相关(r=0.588，P<0.01)。
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讨 论
本文结果显示，银屑病患者LD明显降低，LAF和白细胞CD18表达及血清sICAM-1浓度明显增高，且各指标增高随着银屑病皮损加重而明显，提示白细胞流变性异常和CAMS表达增高与银屑病发病及病情变化有密切关系。
白细胞之间及 白细胞与血管内皮细胞间的粘附是组织损伤的重要原因之一。研究表明，银屑病患者血清sICAM-1浓度明显增高，且与皮损严重程度有关[4]。本文结果显示，银屑病患者LAF、白细胞CD18表达及sICAM-1浓度明显增高，且与病变程度有关。同时，LAF增高与白细胞CD18表达和sICAM-1浓度呈正相关，提示LAF增高与白细胞CD18表达及sICAM-1浓度增高有关。而血清sICAM-1浓度增高与血管内皮细胞ICAM-1表达增高并脱落入血循环有关[4]。研究表明，LAF增高与活化的白细胞CD18表达增高有关[5]，而银屑病患者白细胞CD18表达及血管内皮细胞ICAM-1表达增高与肿瘤坏死因子α(TNFα)增高，诱导其表达有关[6]。白细胞CD18表达增高，除了使白细胞之间粘附增加外，还可使白细胞与ICAM-1相互作用，粘附于皮肤组织血管内皮细胞，形成小栓子阻塞毛细血管和造成皮肤微循环障碍。
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银屑病患者LAF增高，导致了白细胞之间及白细胞与血管内皮细胞粘附增高，使之不易通过毛细血管，引起LD降低。LD降低的白细胞可粘附于毛细血管内，阻塞毛细血管并浸润于表皮内。同时，LD降低的白细胞互相激活，释放多种活性物质，加重皮损区的损伤。本文结果显示，银屑病患者LFI与LAR呈正相关，提示LD降低与LAF增高互为因果，形成恶性循环，这可能正是银屑病患者皮损加重的重要原因之一。
参 考 文 献
1 Pigatto PD, Pigatto LB, Bigardi A, et al. Factors secreted by untreated psoriasis monocyte enhance neutrophil functions. J Invest Dermatol, 1990,94∶372-376.
2 陈峻, 龚肖畸. ELISA法检测兔中性粒细胞CD18的表达. 中国免疫学杂志, 1994,10∶224-226.
, 百拇医药
3 Inuzuka H, Seita T, Okamoto K, et al. A sensitive ELISA for the characterization of two forms of circulating intercellular adhesion molecule-1 in human plasma. Biol Pharm Bull, 1995,18∶1036-1042.
4 Schopf RE, Naumann S, Rehader M, et al. Soluble intercellular adhesion molecule-1 levels in patients with psoriasis. Br J Dermatol, 1993,128∶34-37.
5 Mazzone A, Deservi S, Ricevuti G, et al. Increased expression of neutrophil and monocyte adhesion molecule in unstable coronary artery disease. Circulation, 1993,88∶358-363.
6 杨贵贞主编. 免疫生物工程纲要与技术. 长春: 吉林科学技术出版社, 1991.201.
(收稿：1997-03-17 修回：1997-11-18), 百拇医药
单位：266021 青岛医学院诊断学教研室(刘成玉 谭润鸾)，皮肤病研究所(王桂芝)
关键词：银屑病；细胞粘着分子；白细胞流变性
中华皮肤科杂志980205.htm 【摘要】 目的 探讨白细胞流变性和细胞粘附分子(CAMS)表达与银屑病的关系。方法 采用ELISA法、红细胞变形能力测定仪和体外血栓血小板粘附两用仪检测了115例银屑病患者和89例健康人白细胞CD18表达、血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)浓度、白细胞滤过指数(LFI)和白细胞粘附率(LAR)的变化。结果 银屑病患者白细胞CD18表达、sICAM-1浓度、LFI和LAR均明显增高，与对照组比较差异均有显著性，且随着银屑病皮损加重，各指标增高逐渐明显。银屑病患者LFI、LAR与白细胞CD18表达和sICAM-1浓度呈正相关，LFI与LAR呈正相关。结论 白细胞流变性异常和细胞粘附分子表达增高与银屑病发病及皮损严重程度有关。
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The Changes of Leukocyte Rheology, Expression of Leukocyte CD18 and the Concentration of Serum Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1 in Patients with Psoriasis Liu Chengyu, Wang Guizhi, Tan Runluan. Department of Diagnostics, Qingdao Medical College, Qingdao 266021
【Abstract】 Objective To explore the correlation between the leukocyte rheology, cell adhesion molecule(CAM) expression and psoriasis. Methods Enzyme linked immunosorbent assay(ELISA), erythrocyte deformability apparatus and in vitro thrombus and platelet adhesion dual-purpose apparatus were used to determine the changes of leukocyte CD18 expression, levels of serum soluble intercelular adhesion molecule-1(sICAM-1), and the changes of leukocyte filtration index(LFI) and leukocyte adhesion rate(LAR). Results The leukocyte CD18 expression, sICAM-1 level, LFI and LAR were significantly increased in patients with psoriasis than those in controls(P<0.01), and along with the exacerbation of psoriatic skin lesions all the above parameters increased (P<0.01). The LFI and LAR in the patients were positively correlated to the expression of leukocyte CD18 and the sICAM-1 concentration (r=0.718, 0.669, 0.626, 0.680, P<0.01), LFI was positively correlated to LAR (r=0.588, P<0.01). Conclusion These results indicated that the abnormalities of leukocyte rheology and the increase of CAMs expression were closely related to the pathogenesis of psoriasis and the severity of psoriatic skin lesions.
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【Key words】 Psoriasis Cell adhesion molecules Leukocyte rheology
研究表明，白细胞参与银屑病的发生与发展[1]，但外周血白细胞流变性、白细胞CD18表达及血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)浓度变化与银屑病的关系尚不清楚。为此，我们检测了115例银屑病患者白细胞变形能力(LD)、白细胞粘附功能(LAF)、白细胞CD18表达及血清sICAM-1浓度的变化，以探讨白细胞流变性和细胞粘附分子(CAMS)与银屑病的关系。
资料和方法
一、临床资料
(一)银屑病组：选择确诊的银屑病患者115例，男75例，女40例；平均年龄37.7±10.4岁。115例患者中，进行期46例，静止期32例，消退期37例。所有患者均未行糖皮质激素治疗。
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(二)对照组：选择健康体检者89例，男62例，女27例；平均年龄38.0±11.5岁。
二、方法
(一)LD测定：EDTA-2Na抗凝血，采用percoll梯度离心法分离白细胞，用Tris缓冲液(Tris 10mmol/L, CaCl2 2mmol/L，葡萄糖10mmol/L, NaCl 154mmol/L, pH7.40)洗涤3次后，用Tris缓冲液配制成3×109/L的白细胞悬液。采用DXC-300型核孔膜红细胞变形能力测定仪(上海医科大学研制，聚碳酸酯核孔滤膜厚10μm，孔径5μm，孔密度4×105/cm2)，于-1.96kPa压力下，测定缓冲液和白细胞悬液最初0.5ml的滤过时间tb和ts，计算白细胞滤过指数(LFI)
附表 银屑病患者LFI、LAR、白细胞CD18表达和sICAM-1测定结果 组 别
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例数
LFI
LAR(%)
CD18(A*min-1*μg-1)
sICAM-1(μg/L)
±st值*
±st值*
±st值*
±s, 百拇医药
t值*
对 照 组
89
3.94±0.06
-
23.58±4.30
-
2.66±0.21
-
150.39±58.36
-
银屑病组
, http://www.100md.com 115
5.89±0.11
25.36
65.40±10.26
36.76
5.88±0.40
6.87
306.88±78.30
17.6
进行期
46
7.26±0.14
, http://www.100md.com 35.82
84.25±15.50
38.25
7.85±0.48
7.92
426.48±86.45
21.47
静止期
32
5.35±0.10
18.40
56.96±8.67
, 百拇医药
27.14
5.26±0.37
5.84
291.50±62.20
11.39
消退期
37
4.28±0.07
12.31
48.06±7.21
24.48
4.07±0.26
, 百拇医药
3.55
288.72±58.17
7.64
*与对照组比较，P均<0.01；各指标在银屑病三期之间比较，F=18.35、16.24、21.05、19.63，P均<0.01作为LD的指标。LFI=ts/tb，LD与LFI呈反比关系，即LFI愈大，LD愈小；LFI愈小，LD愈大。
(二)LAF测定：采用WYJ-Ⅲ型体外血栓血小板粘附两用仪，测定粘附前后白细胞数量，计算白细胞粘附率(LAR)作为LAF的指标。LAR愈大，LAF愈大；LAR愈小，LAF愈小。
(三)白细胞CD18表达测定：采用文献[2]方法，结果以每分钟吸光度(A*min-1*μg-1)表示。
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(四)血清sICAM-1测定：采用ELISA法[3]，药盒购自美国P & D System。
三、统计学方法
检测结果以±s表示，两组间结果比较采用t检验，三组间结果比较采用方差分析，相关关系采用直线相关分析。
结 果
银屑病患者LFI、LAR、白细胞CD18表达和血清sICAM-1浓度均明显增高，与对照组比较差异有极显著性(P<0.01)，各指标三期之间比较均有非常显著性差异(P<0.01)，且进行期患者各指标增高较其他两期更明显，详见附表。银屑病患者LFI、LAR与白细胞CD18表达(分别为r=0.718、0.669，P<0.01)和sICAM-1(分别为r=0.626、0.680，P<0.01)呈正相关，LFI与LAR呈正相关(r=0.588，P<0.01)。
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讨 论
本文结果显示，银屑病患者LD明显降低，LAF和白细胞CD18表达及血清sICAM-1浓度明显增高，且各指标增高随着银屑病皮损加重而明显，提示白细胞流变性异常和CAMS表达增高与银屑病发病及病情变化有密切关系。
白细胞之间及 白细胞与血管内皮细胞间的粘附是组织损伤的重要原因之一。研究表明，银屑病患者血清sICAM-1浓度明显增高，且与皮损严重程度有关[4]。本文结果显示，银屑病患者LAF、白细胞CD18表达及sICAM-1浓度明显增高，且与病变程度有关。同时，LAF增高与白细胞CD18表达和sICAM-1浓度呈正相关，提示LAF增高与白细胞CD18表达及sICAM-1浓度增高有关。而血清sICAM-1浓度增高与血管内皮细胞ICAM-1表达增高并脱落入血循环有关[4]。研究表明，LAF增高与活化的白细胞CD18表达增高有关[5]，而银屑病患者白细胞CD18表达及血管内皮细胞ICAM-1表达增高与肿瘤坏死因子α(TNFα)增高，诱导其表达有关[6]。白细胞CD18表达增高，除了使白细胞之间粘附增加外，还可使白细胞与ICAM-1相互作用，粘附于皮肤组织血管内皮细胞，形成小栓子阻塞毛细血管和造成皮肤微循环障碍。
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银屑病患者LAF增高，导致了白细胞之间及白细胞与血管内皮细胞粘附增高，使之不易通过毛细血管，引起LD降低。LD降低的白细胞可粘附于毛细血管内，阻塞毛细血管并浸润于表皮内。同时，LD降低的白细胞互相激活，释放多种活性物质，加重皮损区的损伤。本文结果显示，银屑病患者LFI与LAR呈正相关，提示LD降低与LAF增高互为因果，形成恶性循环，这可能正是银屑病患者皮损加重的重要原因之一。
参 考 文 献
1 Pigatto PD, Pigatto LB, Bigardi A, et al. Factors secreted by untreated psoriasis monocyte enhance neutrophil functions. J Invest Dermatol, 1990,94∶372-376.
2 陈峻, 龚肖畸. ELISA法检测兔中性粒细胞CD18的表达. 中国免疫学杂志, 1994,10∶224-226.
, 百拇医药
3 Inuzuka H, Seita T, Okamoto K, et al. A sensitive ELISA for the characterization of two forms of circulating intercellular adhesion molecule-1 in human plasma. Biol Pharm Bull, 1995,18∶1036-1042.
4 Schopf RE, Naumann S, Rehader M, et al. Soluble intercellular adhesion molecule-1 levels in patients with psoriasis. Br J Dermatol, 1993,128∶34-37.
5 Mazzone A, Deservi S, Ricevuti G, et al. Increased expression of neutrophil and monocyte adhesion molecule in unstable coronary artery disease. Circulation, 1993,88∶358-363.
6 杨贵贞主编. 免疫生物工程纲要与技术. 长春: 吉林科学技术出版社, 1991.201.
(收稿：1997-03-17 修回：1997-11-18), 百拇医药