性罪错妇女生殖道人乳头瘤病毒检测及型别分析
作者：张丽芳 郑飞云 林巧爱 朱雪琼 陈素华 包其郁
单位：325003 温州医学院微生物学教研室(张丽芳 林巧爱 包其郁)；温州医学院附属第一医院妇产科(郑飞云)；温州医学院附属第二医院妇产科(朱雪琼 陈素华)
关键词：
中国皮肤科杂志980322 为了解人乳头瘤病毒(HPV)及其型别在本地区高危人群中的流行情况，我们采用HPV的共同引物(general primer,GP)对41例性罪错妇女、46例对照组宫颈标本进行聚合酶链反应(PCR)检测，再用型特异性引物(SP)6、11、16、18对GP-HPV阳性标本进行扩增分型，现报道如下。
一、材料和方法
1.标本来源：于1996年12月，随机选择温州市妇女劳教所性罪错妇女41例，年龄18～40岁，刮取宫颈脱落细胞标本，共41份；同时随机选择本院附属二院妇科门诊要求体检的育龄妇女46例，作为正常人
, http://www.100md.com
表1 各组生殖道标 本HPV及其型别检出结果 组别
例数
GP-HPV(+)
各型HPV检出数
多重型别检出数(二型以上)
例数
%
6
11
16
18
其它
, 百拇医药 性罪错组
41
26
63.4
5
7
7
14
6
8
正常人群组
46
3
6.5
, 百拇医药
0
0
1
0
2
0
χ2=31.58，P<0.01
表2 性罪错妇女性 伴数与生殖道HPV及其型别的检出关系 性 伴数
例数
GP-HPV(+)
各型HPV检出数
多重型别检出数(二型以上)
, 百拇医药
例数
%
6
11
16
18
其它
2～10
15
6
40.0
0
4
1
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1
2
1
11～30
15
10
66.7
2
2
4
5
2
5
31～
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11
10
90.9
3
1
2
8
2
2
χ2=7.20，P<0.05 群对照。
2.标本处理：脱落细胞标本用pH7.0、66mmol/L的PBS缓冲液洗涤、离心，经蛋白酶K 55℃ 作用3小时后，于95℃ 10分钟灭活，收集离心后上清液，-20℃保存备用，作为PCR模板 。
, 百拇医药
3.引物合成：本研究HPV引物由美国Loyola大学医学研究中心周健博士惠赠，GP扩增139-14 5bp，序列为：5′-TTTGTTACTGTGGTAGATAC-3′、5′-GA
AAAATAAACTGTAAATCA-3 ′；SP6扩增28 0bp，序列为：5′-TTTGTTACTGTGGTAGATAC-3′、5′-GAAAAATAAACTGTAAATCA -3′；SP11扩增3 60bp，序列为：5′-GGAATACATGCGCCATGTGC-3′、5′-CGAGCAGACGTCCGTCCTCG-3′；SP 16扩增 152bp，序列为：5′-TGCTAGTGCTTATGCAGCAA-3′、5′-ATTTACTGCAACATTGGTAC-3′；S P1 8扩增216bp，序列为：5′-AAGGATGCTGCACCGGCTGA-3′，5′-CACGCACACGCTTGGCAGGT-3 ′。
4.PCR操作：每50μl反应体系中，含引物50μmol/L，dNTP 200μmol/L，Taq酶1.5U，模板用量10μl；反应步骤为92℃ 60秒变性，55℃ 120秒复性，72℃ 90秒引物延伸，共进行35个循环。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，在紫外反射仪下观察记录。
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5.数据统计：各组别HPV检出率的比较，采用χ2检验。
二、结果
1.PCR扩增产物分析：GP、SP6、SP11、SP16、SP18五组引物均能准确扩增出相应的扩增产物，反应结果清晰易辨，见图1。
2.各组标本HPV及型别阳性检出率见表1。性罪错组HPV阳性检出率 (63.4%)较对照组(6.5%)有显著性差异(χ2=31.58，P<0.01)；HPV 型别以18型检出为多见，占HPV阳性的53.8%(14/26)；二型以上的多重型别检出率为30.8% (8/26)，其中HPV16+18、6+18、6+16+18、6+11+16+18各1例，11+16、6+11+18各2例。
3.性伴数与HPV及其型别的检出关系见表2。随着性伴人数(据受检者主诉)
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1、3、5、7、9分别为SP6 、SP11、SP18、SP16、GP五组引物扩增的HPV阳性对照；2、4、6、8、10分别为相应引物扩增的HPV阳性标本；11、12为GP引物扩增的阴性标本
图1 PCR扩增产物分析
的增加，HPV的阳性检出率呈上升趋势，经检验有显著性差异(χ2=7.20，P<0.05)；尤以HPV18的阳性检出率随性伴数增高而增高(χ2=12.32，P[ WTBZ <0.01)。
三、讨论
近年来研究已表明，HPV是STD病原之一，其某些型别与宫颈上皮的不典型增生及宫颈癌发生发展相关。通常认为HPV16和18是致癌的高危型别，而HPV6、11则是致癌的低危型别。国外学者对HPV与性传播的相关性作过许多研究，发现HPV是妇女生殖道最常见的STD病原。Baken 等[1]报道采用PCR方法检测HPV，在STD门诊女性患者中阳性检 出率高达72%。本文性罪错妇女宫颈HPV的阳性检出率为63.4%，高危型别的检出占HPV阳性 的80.5%(21/26)，尤以HPV18型的检出为高，占其中的53.8%(14/26)。表明性罪错人群HPV 感染以高危型别、尤其18型为主。
, 百拇医药
多数研究表明HPV感染与性伴数关系最为密切[1～3]。Evander 等[2]对276例妇女进行2年的追踪调查，发现HPV16是感染的主要型别。Franco等[3]对718例无症状妇女进行HPV感染研究后提出，HPV的感染与多个性伴及初次性交年龄相关，尤其高危型别感染与之具显著相关性。本文性罪错妇女中，HPV的阳性检出率较对照组有显著性差异(P<0.01)；且随性伴人数增加而增高。提示HPV感染与性传播有关。
参考文献
1 Baken LA, Koutsky LA, Kuypers J, et al. Genital human pa pillomavirus infection among male and female sex partners: prevalence and typesp ecific concordance. J Infect Dis, 1995,171∶429-432.
, 百拇医药
2 Evander M, Edlund K, Gustafsson A, et al. Human papillomavirus infectio n is tra nsient in young woman: a population-based cohort study. J Infect Dis, 1995,171 ∶1026-1030.
3 Franco EL, Villa LL, Ruiz A, et al. Transmission of cervical human papi llomavir us infection by sexual activity: differences between low and high oncogenic risk types. J Infect Dis, 1995,172∶756-763., 百拇医药
单位：325003 温州医学院微生物学教研室(张丽芳 林巧爱 包其郁)；温州医学院附属第一医院妇产科(郑飞云)；温州医学院附属第二医院妇产科(朱雪琼 陈素华)
关键词：
中国皮肤科杂志980322 为了解人乳头瘤病毒(HPV)及其型别在本地区高危人群中的流行情况，我们采用HPV的共同引物(general primer,GP)对41例性罪错妇女、46例对照组宫颈标本进行聚合酶链反应(PCR)检测，再用型特异性引物(SP)6、11、16、18对GP-HPV阳性标本进行扩增分型，现报道如下。
一、材料和方法
1.标本来源：于1996年12月，随机选择温州市妇女劳教所性罪错妇女41例，年龄18～40岁，刮取宫颈脱落细胞标本，共41份；同时随机选择本院附属二院妇科门诊要求体检的育龄妇女46例，作为正常人
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表1 各组生殖道标 本HPV及其型别检出结果 组别
例数
GP-HPV(+)
各型HPV检出数
多重型别检出数(二型以上)
例数
%
6
11
16
18
其它
, 百拇医药 性罪错组
41
26
63.4
5
7
7
14
6
8
正常人群组
46
3
6.5
, 百拇医药
0
0
1
0
2
0
χ2=31.58，P<0.01
表2 性罪错妇女性 伴数与生殖道HPV及其型别的检出关系 性 伴数
例数
GP-HPV(+)
各型HPV检出数
多重型别检出数(二型以上)
, 百拇医药
例数
%
6
11
16
18
其它
2～10
15
6
40.0
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11～30
15
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66.7
2
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4
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2
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31～
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11
10
90.9
3
1
2
8
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χ2=7.20，P<0.05 群对照。
2.标本处理：脱落细胞标本用pH7.0、66mmol/L的PBS缓冲液洗涤、离心，经蛋白酶K 55℃ 作用3小时后，于95℃ 10分钟灭活，收集离心后上清液，-20℃保存备用，作为PCR模板 。
, 百拇医药
3.引物合成：本研究HPV引物由美国Loyola大学医学研究中心周健博士惠赠，GP扩增139-14 5bp，序列为：5′-TTTGTTACTGTGGTAGATAC-3′、5′-GA
AAAATAAACTGTAAATCA-3 ′；SP6扩增28 0bp，序列为：5′-TTTGTTACTGTGGTAGATAC-3′、5′-GAAAAATAAACTGTAAATCA -3′；SP11扩增3 60bp，序列为：5′-GGAATACATGCGCCATGTGC-3′、5′-CGAGCAGACGTCCGTCCTCG-3′；SP 16扩增 152bp，序列为：5′-TGCTAGTGCTTATGCAGCAA-3′、5′-ATTTACTGCAACATTGGTAC-3′；S P1 8扩增216bp，序列为：5′-AAGGATGCTGCACCGGCTGA-3′，5′-CACGCACACGCTTGGCAGGT-3 ′。
4.PCR操作：每50μl反应体系中，含引物50μmol/L，dNTP 200μmol/L，Taq酶1.5U，模板用量10μl；反应步骤为92℃ 60秒变性，55℃ 120秒复性，72℃ 90秒引物延伸，共进行35个循环。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，在紫外反射仪下观察记录。
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5.数据统计：各组别HPV检出率的比较，采用χ2检验。
二、结果
1.PCR扩增产物分析：GP、SP6、SP11、SP16、SP18五组引物均能准确扩增出相应的扩增产物，反应结果清晰易辨，见图1。
2.各组标本HPV及型别阳性检出率见表1。性罪错组HPV阳性检出率 (63.4%)较对照组(6.5%)有显著性差异(χ2=31.58，P<0.01)；HPV 型别以18型检出为多见，占HPV阳性的53.8%(14/26)；二型以上的多重型别检出率为30.8% (8/26)，其中HPV16+18、6+18、6+16+18、6+11+16+18各1例，11+16、6+11+18各2例。
3.性伴数与HPV及其型别的检出关系见表2。随着性伴人数(据受检者主诉)
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1、3、5、7、9分别为SP6 、SP11、SP18、SP16、GP五组引物扩增的HPV阳性对照；2、4、6、8、10分别为相应引物扩增的HPV阳性标本；11、12为GP引物扩增的阴性标本
图1 PCR扩增产物分析
的增加，HPV的阳性检出率呈上升趋势，经检验有显著性差异(χ2=7.20，P<0.05)；尤以HPV18的阳性检出率随性伴数增高而增高(χ2=12.32，P[ WTBZ <0.01)。
三、讨论
近年来研究已表明，HPV是STD病原之一，其某些型别与宫颈上皮的不典型增生及宫颈癌发生发展相关。通常认为HPV16和18是致癌的高危型别，而HPV6、11则是致癌的低危型别。国外学者对HPV与性传播的相关性作过许多研究，发现HPV是妇女生殖道最常见的STD病原。Baken 等[1]报道采用PCR方法检测HPV，在STD门诊女性患者中阳性检 出率高达72%。本文性罪错妇女宫颈HPV的阳性检出率为63.4%，高危型别的检出占HPV阳性 的80.5%(21/26)，尤以HPV18型的检出为高，占其中的53.8%(14/26)。表明性罪错人群HPV 感染以高危型别、尤其18型为主。
, 百拇医药
多数研究表明HPV感染与性伴数关系最为密切[1～3]。Evander 等[2]对276例妇女进行2年的追踪调查，发现HPV16是感染的主要型别。Franco等[3]对718例无症状妇女进行HPV感染研究后提出，HPV的感染与多个性伴及初次性交年龄相关，尤其高危型别感染与之具显著相关性。本文性罪错妇女中，HPV的阳性检出率较对照组有显著性差异(P<0.01)；且随性伴人数增加而增高。提示HPV感染与性传播有关。
参考文献
1 Baken LA, Koutsky LA, Kuypers J, et al. Genital human pa pillomavirus infection among male and female sex partners: prevalence and typesp ecific concordance. J Infect Dis, 1995,171∶429-432.
, 百拇医药
2 Evander M, Edlund K, Gustafsson A, et al. Human papillomavirus infectio n is tra nsient in young woman: a population-based cohort study. J Infect Dis, 1995,171 ∶1026-1030.
3 Franco EL, Villa LL, Ruiz A, et al. Transmission of cervical human papi llomavir us infection by sexual activity: differences between low and high oncogenic risk types. J Infect Dis, 1995,172∶756-763., 百拇医药