四种中药复方对小鼠实验性皮炎作用的研究
作者：涂彩霞 林熙然 谷玲
单位：作者单位：116011 辽宁，大连医科大学附属第一医院皮肤科(涂彩霞 林熙然)，核医学科(谷玲)
关键词：皮炎；变应性接触性；中药
中华皮肤科杂志/980413 【摘要】 目的 为了探讨中医治则和方剂组成与治疗湿疹有关的实验药效学作用之间的关系。方法 利用小鼠二硝基氟苯变应性接触性皮炎动物模型，以具有抑制Ⅳ型变态反应的中药，组成4个不同的复方，进行动物实验。结果 兼有凉血活血、清热祛风、利湿多种功效的Ⅲ方(赤芍、栀子、荆芥、浮萍、茯苓)作用最好，并显示诱发皮炎后小鼠血浆降钙素基因相关肽降低，投与中药可对此具有上调的作用。结论 按中医理法选用具有抑制Ⅳ型变态反应的中药组方可在临床中进行验证。
The Effects of 4 Traditional Chinese Medicinal CompoundsonMurine DNFB Dermatitis Tu Caixia, Lin Xiran, Gu Lin.First Affiliated Hospital of Dalian Medical University 116011
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective To study the relationship betweenthe therapeutic principle and prescription of traditional Chinese medicine andthe experimental pharmacologic effects in relation to the treatment of eczema.Methods Murine DNFB allergic contact dermatitis was used as ananimal model, and was treated with 4 traditional Chinese medicinal compounds which werecomposed of Chinese materia medica with activities to suppress type Ⅳ allergicreaction. Results The results showed that the effect of compound Ⅲ composed of Paeoniae obovata Maxim(赤芍), Fructus Gardeniae(栀子), Herba Schizonepetae(荆芥), Herba Spirodelae(浮萍) and Poria(茯苓), possessingmultiple potencies of cooling and promoting blood, clearing heat, expelling wind and eliminating dampness, was strongest among the compounds tested, and the compound up-regulated the serum level of calcitonin gene-related peptide which was lowered in the mice with DNFB induced dermatitis. Conclusion It is suggested that the compounds with suppressive effect on type Ⅳ allergic reaction might improve the therapeutic effect inclinical practice.
, 百拇医药
【Key Words】 Dermatitis, allergic contact Medicine, traditional Chinese
湿疹的发病机理主要是Ⅳ型变态反应，已有报道[1]用小鼠二硝基氟苯(DNFB)变应性接触性皮炎动物模型，对治疗湿疹有效方剂中最常用的中药进行筛试，得到黄柏、栀子等15种中药对小鼠变应性接触性皮炎有显著抑制作用。我们选用上述中药，按中医理法组成4个不同的复方进行动物实验，考察中医治则和药味组合与实验药效的关系，以作为临床治疗的参考。
材料和方法
1.动物：本院动物室提供的昆明种远交系雌性健康小鼠，体重25～30g。
2.试剂及药物：DNFB，以4∶1丙酮橄榄油为基质，配成0.25%和0.5%两种溶液，中药复方共4组，Ⅰ方：当归1.5g、赤芍2g、黄柏2g、泽泻1.5g、甘草1.5g；Ⅱ方：苍术1.5g、蝉蜕1g、双花2.5g、茯苓2.5g、黄连0.75g；Ⅲ方：荆芥1.5g、浮萍1.5g、茯苓2.5g、栀子1.5g、赤芍2g；Ⅳ方：泽泻1.5g、蝉蜕1.0g、木通1.0g、浮萍1.5g、防风1.5g。以上剂量为小鼠每公斤体重用量(相当于国家药典人体用量的10倍)，中药按传统煎药制成煎液，以上述剂量将煎液浓度校正为每10g体重每日灌饲煎液0.4ml。阳性对照药物氢化可的松，剂量为24mg*kg-1*d-1(相当于临床用量的10倍)，阴性对照为生理盐水。降钙素基因相关肽(CGRP)试剂购自东亚免疫技术研究所。
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3.方法：
(1)DNFB诱发皮炎：上述6组于实验前1日在小鼠腹部去毛，面积约3cm2。实验当日(第0日)和第1日于去毛部涂0.5% DNFB 25μl各1次致敏。第5日于小鼠左耳背面涂0.25% DNFB20μl诱发皮炎，于右耳涂基质20μl作对照。
(2)灌药：每组中药复方为一实验组，分别以氢化可的松及生理盐水作为阳性及阴性对照，共6组，每组10只小鼠。各组于第0、1、2日及第5日诱发前2小时和诱发后6小时灌药，每次0.2ml/10g体重，每日2次。
(3)观察指标：①耳厚度：于诱发前及诱发后24小时测量鼠耳中部厚度，计算诱发前后左耳厚度差及诱发后左、右耳厚度差。②耳重量：以直径0.6cm的金属打孔器在鼠耳中部取组织块，用分析天平称取耳重量，计算诱发后左、右耳组织块重量差。③真皮内单一核细胞及多形核白细胞数：将左右耳组织块制成常规HE染色切片，在光镜下用网形目镜测微尺以单盲法计数每mm2单一核细胞及多形核白细胞数。④血浆CGRP浓度测定：除前述6组外，另取10只小鼠，不用DNFB诱发皮炎，仅用生理盐水作为正常对照，经小鼠眼球取血1ml，注入含10% EDTA和抑肽酶的试管中，混匀，4℃，3000r/min，10分钟，分离血浆置于-25℃低温冰箱中待检，血浆CGRP浓度测定采用放射免疫分析法。
, 百拇医药
4.统计学处理：两样本均数t检验、方差分析及组间两两比较q检验。
结 果
1.对小鼠耳厚度及重量差的影响见表1。中药复方均与生理盐水组比较有显著性差异，以Ⅲ方作用最强。4种复方经方差分析S1、S2有显著性差异(P<0.05)；4种复方组间两两比较q检验，S2的Ⅲ方和Ⅰ方比较有显著性差异(P<0.05)。
2.对诱发后小鼠炎性浸润细胞的影响见表2。4种复方对诱发后小鼠左、右耳组织切片多形核白细胞及单一核细胞数的差值影响与生理盐水组比较均有显著性差异，以Ⅲ方作用为优。
3.对诱发后小鼠血浆CGRP浓度的影响见表3。正常对照组小鼠血浆浓度为251.2±57.3pg/ml，经DNFB诱发后生理盐水组小鼠血浆CGRP浓度明显降低(P<0.01)。4种复方对小鼠血浆CGRP水平降低有不同的上调作用，以中药Ⅲ方作用显著(P<0.05)。
, 百拇医药
表1 各组药物对小鼠耳厚度及重量差的
影响(
±s, n=10) 组 别
S1
S2
S3
生理盐水
9.38±3.15
8.97±3.01
2.55±0.80
氢化可的松
1.58±1.12(7.38)
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1.56±1.06(7.73)
0.57±0.23(6.50)
中药Ⅰ
4.85±2.53(3.54)
4.53±2.19(3.68)
1.39±0.84(3.17)
中药Ⅱ
3.60±1.90(4.41)
3.57±1.55(4.73)
1.05±0.65(4.59)
中药Ⅲ
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2.92±2.14(5.02)
2.64±2.15(4.74)
0.96±0.44(5.50)
中药Ⅳ
4.91±1.81(3.90)
4.62±1.85(3.89)
1.44±0.78(3.13)
注：S1：左耳诱发前、后的厚度差，S2：诱发后左、右耳的厚度差，S3：诱发后左、右耳组织块的重量差，括号内为与生理盐水组比较t值，P均<0.01
表2 各组诱发实验性皮炎后小鼠左、右耳组织切片多形核
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白细胞及单一核细胞差值比较(±s,个/mm2) 组 别
多形核白细胞
单一核细胞
生理盐水
188.4±162.2
1548.7±656.3
氢化可的松
22.8±20.4
157.2±143.7
中药Ⅰ
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43.1±34.2
250.5±198.1
中药Ⅱ
37.0±32.9
239.9±205.9
中药Ⅲ
29.9±27.9
191.6±175.6
中药Ⅳ
46.0±34.8
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263.7±184.9
注：n=10，各组与生理盐水组比较，*P<0.05，**P<0.01
表3 各组药物对诱发实验性皮炎后小鼠血浆降钙素基因
相关肽浓度的影响 组 别
n±s(pg/ml)
t值
P值
生理盐水
10
156.3±41.8
, 百拇医药
-
-
氢化可的松
9
175.9±37.8
1.067
>0.05
中药Ⅰ
10
171.6±45.6
0.782
>0.05
中药Ⅱ
, 百拇医药
9
184.1±50.8
1.307
>0.05
中药Ⅲ
10
195.1±39.8
2.125
<0.05
中药Ⅳ
10
180.6±50.0
, http://www.100md.com
1.180
>0.05
*与生理盐水组比较
讨 论
我们利用小鼠DNFB变应性接触性皮炎动物模型，观察4种中药复方对Ⅳ型变态反应的作用，结果显示4种复方对小鼠变应性接触性皮炎均有明显抑制作用，提示中药治疗湿疹的作用机理与抑制Ⅳ型变态反应以及抗炎作用有关。
欲求中药方剂具有良好的临床疗效，首先要重视组方的理法，而组成一个方剂的药物所具有的功效，则是理法的体现。通过多种定量指标的观察，显示在四种复方中以Ⅲ号方对小鼠DNFB变应性接触性皮炎的抑制作用最强。考察这4种复方所体现的治则及其成分中药的功能，Ⅰ方主要是活血凉血清热，Ⅱ方为清热祛风利湿，Ⅳ方为祛风利湿，而Ⅲ方则兼有凉血活血、清热祛风利湿的作用，较其他3方全面。因此我们认为，应用药效学实验中具有抑制Ⅳ型变态反应及炎症的中药于临床治疗，如能同时重视中医理法指导下的方剂药物组合，或许可能获得更好的疗效。
, 百拇医药
CGRP是一种神经肽。Lorens等[2]报道唑酮诱导的小鼠耳部接触性皮炎，其组织内CGRP含量明显低于对照侧耳组织，据此认为CGRP在Ⅳ型变态反应中起作用。本实验小鼠诱发皮炎后，其血中CGRP降低，支持Lorens等关于CGRP参与Ⅳ型变态反应的观点。投用中药的小鼠血浆CGRP降低的程度较未投药者减轻，其中以Ⅲ方作用最显著，与其抑制皮炎的作用相一致。上述结果提示中药对CGRP的降低具有上调作用，而这一调节作用与对Ⅳ型变态反应的抑制有关。
Hosoi等[3]报道CGRP可抑制Ⅳ型变态反应抗原递呈细胞郎格罕细胞的功能。中药可能通过对小鼠血浆CGRP的上调作用，导致郎格罕细胞功能下降而抑制Ⅳ型变态反应。
参 考 文 献
1 Lin XR, Meng XM. A composition analysis and pharmacodynamic study on Chinese traditional prescriptions used to treat eczema. Proc 4th Chn-Jpn Joint Meet Dermatol. Chengdu: Soc Dermatol, Chn Med Ass, 1994.115.
, 百拇医药
2 Lorens EK, Elvar T. Tachykinins and calcitonin gene-related peptide inoxazolone-induced allergic contact dermatitis in mice. J Invest Dermatol, 1990,94∶761-763.
3 Hosoi J, Murphy GF, Egan CL, et al. Regulation of Langerhans cell function by nerves containing calcitonin gene-related peptide. Nature, 1993,363∶159-163.
辽宁省教委资助课题
(收稿：1997-08-01 修回：1998-01-23), 百拇医药
单位：作者单位：116011 辽宁，大连医科大学附属第一医院皮肤科(涂彩霞 林熙然)，核医学科(谷玲)
关键词：皮炎；变应性接触性；中药
中华皮肤科杂志/980413 【摘要】 目的 为了探讨中医治则和方剂组成与治疗湿疹有关的实验药效学作用之间的关系。方法 利用小鼠二硝基氟苯变应性接触性皮炎动物模型，以具有抑制Ⅳ型变态反应的中药，组成4个不同的复方，进行动物实验。结果 兼有凉血活血、清热祛风、利湿多种功效的Ⅲ方(赤芍、栀子、荆芥、浮萍、茯苓)作用最好，并显示诱发皮炎后小鼠血浆降钙素基因相关肽降低，投与中药可对此具有上调的作用。结论 按中医理法选用具有抑制Ⅳ型变态反应的中药组方可在临床中进行验证。
The Effects of 4 Traditional Chinese Medicinal CompoundsonMurine DNFB Dermatitis Tu Caixia, Lin Xiran, Gu Lin.First Affiliated Hospital of Dalian Medical University 116011
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective To study the relationship betweenthe therapeutic principle and prescription of traditional Chinese medicine andthe experimental pharmacologic effects in relation to the treatment of eczema.Methods Murine DNFB allergic contact dermatitis was used as ananimal model, and was treated with 4 traditional Chinese medicinal compounds which werecomposed of Chinese materia medica with activities to suppress type Ⅳ allergicreaction. Results The results showed that the effect of compound Ⅲ composed of Paeoniae obovata Maxim(赤芍), Fructus Gardeniae(栀子), Herba Schizonepetae(荆芥), Herba Spirodelae(浮萍) and Poria(茯苓), possessingmultiple potencies of cooling and promoting blood, clearing heat, expelling wind and eliminating dampness, was strongest among the compounds tested, and the compound up-regulated the serum level of calcitonin gene-related peptide which was lowered in the mice with DNFB induced dermatitis. Conclusion It is suggested that the compounds with suppressive effect on type Ⅳ allergic reaction might improve the therapeutic effect inclinical practice.
, 百拇医药
【Key Words】 Dermatitis, allergic contact Medicine, traditional Chinese
湿疹的发病机理主要是Ⅳ型变态反应，已有报道[1]用小鼠二硝基氟苯(DNFB)变应性接触性皮炎动物模型，对治疗湿疹有效方剂中最常用的中药进行筛试，得到黄柏、栀子等15种中药对小鼠变应性接触性皮炎有显著抑制作用。我们选用上述中药，按中医理法组成4个不同的复方进行动物实验，考察中医治则和药味组合与实验药效的关系，以作为临床治疗的参考。
材料和方法
1.动物：本院动物室提供的昆明种远交系雌性健康小鼠，体重25～30g。
2.试剂及药物：DNFB，以4∶1丙酮橄榄油为基质，配成0.25%和0.5%两种溶液，中药复方共4组，Ⅰ方：当归1.5g、赤芍2g、黄柏2g、泽泻1.5g、甘草1.5g；Ⅱ方：苍术1.5g、蝉蜕1g、双花2.5g、茯苓2.5g、黄连0.75g；Ⅲ方：荆芥1.5g、浮萍1.5g、茯苓2.5g、栀子1.5g、赤芍2g；Ⅳ方：泽泻1.5g、蝉蜕1.0g、木通1.0g、浮萍1.5g、防风1.5g。以上剂量为小鼠每公斤体重用量(相当于国家药典人体用量的10倍)，中药按传统煎药制成煎液，以上述剂量将煎液浓度校正为每10g体重每日灌饲煎液0.4ml。阳性对照药物氢化可的松，剂量为24mg*kg-1*d-1(相当于临床用量的10倍)，阴性对照为生理盐水。降钙素基因相关肽(CGRP)试剂购自东亚免疫技术研究所。
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3.方法：
(1)DNFB诱发皮炎：上述6组于实验前1日在小鼠腹部去毛，面积约3cm2。实验当日(第0日)和第1日于去毛部涂0.5% DNFB 25μl各1次致敏。第5日于小鼠左耳背面涂0.25% DNFB20μl诱发皮炎，于右耳涂基质20μl作对照。
(2)灌药：每组中药复方为一实验组，分别以氢化可的松及生理盐水作为阳性及阴性对照，共6组，每组10只小鼠。各组于第0、1、2日及第5日诱发前2小时和诱发后6小时灌药，每次0.2ml/10g体重，每日2次。
(3)观察指标：①耳厚度：于诱发前及诱发后24小时测量鼠耳中部厚度，计算诱发前后左耳厚度差及诱发后左、右耳厚度差。②耳重量：以直径0.6cm的金属打孔器在鼠耳中部取组织块，用分析天平称取耳重量，计算诱发后左、右耳组织块重量差。③真皮内单一核细胞及多形核白细胞数：将左右耳组织块制成常规HE染色切片，在光镜下用网形目镜测微尺以单盲法计数每mm2单一核细胞及多形核白细胞数。④血浆CGRP浓度测定：除前述6组外，另取10只小鼠，不用DNFB诱发皮炎，仅用生理盐水作为正常对照，经小鼠眼球取血1ml，注入含10% EDTA和抑肽酶的试管中，混匀，4℃，3000r/min，10分钟，分离血浆置于-25℃低温冰箱中待检，血浆CGRP浓度测定采用放射免疫分析法。
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4.统计学处理：两样本均数t检验、方差分析及组间两两比较q检验。
结 果
1.对小鼠耳厚度及重量差的影响见表1。中药复方均与生理盐水组比较有显著性差异，以Ⅲ方作用最强。4种复方经方差分析S1、S2有显著性差异(P<0.05)；4种复方组间两两比较q检验，S2的Ⅲ方和Ⅰ方比较有显著性差异(P<0.05)。
2.对诱发后小鼠炎性浸润细胞的影响见表2。4种复方对诱发后小鼠左、右耳组织切片多形核白细胞及单一核细胞数的差值影响与生理盐水组比较均有显著性差异，以Ⅲ方作用为优。
3.对诱发后小鼠血浆CGRP浓度的影响见表3。正常对照组小鼠血浆浓度为251.2±57.3pg/ml，经DNFB诱发后生理盐水组小鼠血浆CGRP浓度明显降低(P<0.01)。4种复方对小鼠血浆CGRP水平降低有不同的上调作用，以中药Ⅲ方作用显著(P<0.05)。
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表1 各组药物对小鼠耳厚度及重量差的
影响(
±s, n=10) 组 别S1
S2
S3
生理盐水
9.38±3.15
8.97±3.01
2.55±0.80
氢化可的松
1.58±1.12(7.38)
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1.56±1.06(7.73)
0.57±0.23(6.50)
中药Ⅰ
4.85±2.53(3.54)
4.53±2.19(3.68)
1.39±0.84(3.17)
中药Ⅱ
3.60±1.90(4.41)
3.57±1.55(4.73)
1.05±0.65(4.59)
中药Ⅲ
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2.92±2.14(5.02)
2.64±2.15(4.74)
0.96±0.44(5.50)
中药Ⅳ
4.91±1.81(3.90)
4.62±1.85(3.89)
1.44±0.78(3.13)
注：S1：左耳诱发前、后的厚度差，S2：诱发后左、右耳的厚度差，S3：诱发后左、右耳组织块的重量差，括号内为与生理盐水组比较t值，P均<0.01
表2 各组诱发实验性皮炎后小鼠左、右耳组织切片多形核
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白细胞及单一核细胞差值比较(
±s,个/mm2) 组 别多形核白细胞
单一核细胞
生理盐水
188.4±162.2
1548.7±656.3
氢化可的松
22.8±20.4
157.2±143.7
中药Ⅰ
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43.1±34.2
250.5±198.1
中药Ⅱ
37.0±32.9
239.9±205.9
中药Ⅲ
29.9±27.9
191.6±175.6
中药Ⅳ
46.0±34.8
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注：n=10，各组与生理盐水组比较，*P<0.05，**P<0.01
表3 各组药物对诱发实验性皮炎后小鼠血浆降钙素基因
相关肽浓度的影响 组 别
n
±s(pg/ml)t值
P值
生理盐水
10
156.3±41.8
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-
-
氢化可的松
9
175.9±37.8
1.067
>0.05
中药Ⅰ
10
171.6±45.6
0.782
>0.05
中药Ⅱ
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9
184.1±50.8
1.307
>0.05
中药Ⅲ
10
195.1±39.8
2.125
<0.05
中药Ⅳ
10
180.6±50.0
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>0.05
*与生理盐水组比较
讨 论
我们利用小鼠DNFB变应性接触性皮炎动物模型，观察4种中药复方对Ⅳ型变态反应的作用，结果显示4种复方对小鼠变应性接触性皮炎均有明显抑制作用，提示中药治疗湿疹的作用机理与抑制Ⅳ型变态反应以及抗炎作用有关。
欲求中药方剂具有良好的临床疗效，首先要重视组方的理法，而组成一个方剂的药物所具有的功效，则是理法的体现。通过多种定量指标的观察，显示在四种复方中以Ⅲ号方对小鼠DNFB变应性接触性皮炎的抑制作用最强。考察这4种复方所体现的治则及其成分中药的功能，Ⅰ方主要是活血凉血清热，Ⅱ方为清热祛风利湿，Ⅳ方为祛风利湿，而Ⅲ方则兼有凉血活血、清热祛风利湿的作用，较其他3方全面。因此我们认为，应用药效学实验中具有抑制Ⅳ型变态反应及炎症的中药于临床治疗，如能同时重视中医理法指导下的方剂药物组合，或许可能获得更好的疗效。
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CGRP是一种神经肽。Lorens等[2]报道唑酮诱导的小鼠耳部接触性皮炎，其组织内CGRP含量明显低于对照侧耳组织，据此认为CGRP在Ⅳ型变态反应中起作用。本实验小鼠诱发皮炎后，其血中CGRP降低，支持Lorens等关于CGRP参与Ⅳ型变态反应的观点。投用中药的小鼠血浆CGRP降低的程度较未投药者减轻，其中以Ⅲ方作用最显著，与其抑制皮炎的作用相一致。上述结果提示中药对CGRP的降低具有上调作用，而这一调节作用与对Ⅳ型变态反应的抑制有关。
Hosoi等[3]报道CGRP可抑制Ⅳ型变态反应抗原递呈细胞郎格罕细胞的功能。中药可能通过对小鼠血浆CGRP的上调作用，导致郎格罕细胞功能下降而抑制Ⅳ型变态反应。
参 考 文 献
1 Lin XR, Meng XM. A composition analysis and pharmacodynamic study on Chinese traditional prescriptions used to treat eczema. Proc 4th Chn-Jpn Joint Meet Dermatol. Chengdu: Soc Dermatol, Chn Med Ass, 1994.115.
, 百拇医药
2 Lorens EK, Elvar T. Tachykinins and calcitonin gene-related peptide inoxazolone-induced allergic contact dermatitis in mice. J Invest Dermatol, 1990,94∶761-763.
3 Hosoi J, Murphy GF, Egan CL, et al. Regulation of Langerhans cell function by nerves containing calcitonin gene-related peptide. Nature, 1993,363∶159-163.
辽宁省教委资助课题
(收稿：1997-08-01 修回：1998-01-23), 百拇医药