恒温加热溶解病甲标本法
作者：王刚生 邓洁华 王凤琴 靳贵品 南国荣
单位：050000 石家庄，河北医科大学第二临床医学院皮 肤科真菌室
关键词：
中华皮肤科杂志980529 我们用20%NaOH溶液恒温加热溶解病甲标本法(简称恒温加热法)，对我科门诊拟诊为甲真菌病患者的病甲标本进行了实验研究，取得了满意效果，现报道如下。
一、临床资料
拟诊为甲真菌病患者150例，其中全营养不良型87例，远端侧位甲下型52例，白色浅表型11例。指甲106例，趾甲44例。取材前患者均未口服抗真菌药，2周内也未用过外用抗真菌药。随机分为试验组和对照组，试验组90例，男51例，女39例；年龄9～64岁；病程25天至12年。对照组60例，男33例，女27例；年龄17～52岁；病程1个月至6年。
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二、方法
1.恒温加热法：将病甲(甲板增厚、角质松解、变色，表面凹凸不平或光滑甲板呈不同颜色的改变)剪成1mm直径大小，3～5块置于载玻片上，加2～3 滴20% NaOH溶液，盖上盖玻片，放入恒温(65℃)水浴箱内的试管架表面，10～30分钟取出，轻压之呈云雾状，显微镜下观察，并与传统的刮取病甲的甲屑用10% KOH制片法做对照。
2.常温溶解病甲标本法(简称常温溶解法)：取病甲1mm直径大小，3～5块用20% NaOH制片，放在室温(18℃～22℃)内2～6小时，显微镜下观察。
3.对30例病甲标本分别用20% NaOH、恒温加热10分钟、20分钟、30分钟与20% NaOH、 常温加热2小时、4小时、6小时，10% NaOH常规法4小时、8小时、12小时，进行溶解病甲标本时间比较。
三、结果
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1.试验组用恒温加热法，90例中82例阳性，8例阴性，阳性率91.11%。对照组用10% KOH常规法，60例中31例阳性，29例阴性，阳性率51.67%，两组经统计学处理，χ2＝30.14，P<0. 01，有非常显著性差异。恒温加热法镜检时很容易找到大量的菌丝和孢子，其特点有三种情况：①成群分隔分支的菌丝体和孢子。②分隔菌丝或假菌丝和芽生孢子。③较粗分隔或分支的菌丝。第一种情况多见。
2.30例病甲标本用恒温加热法，10分钟时溶解9份(30%)、20分钟时溶解13份(73.33%)、30分钟时溶解8份(100%)。用常温溶解法，2小时溶解4份(13.33%)、4小时溶解21份(83.33%)，6小时溶解5份(100%) 。用10% NaOH制片法，4小时溶解6份(20%)、8小时溶解18份(80%)、12小时溶解6份(100%)。说明恒温加热法镜检阳性率高，溶解病甲速度快，方法优于10%、20%常温溶解法。
四、讨论
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直接镜检是真菌实验室诊断甲真菌病的重要手段，采取标本和制片的方法直接影响甲真菌病的诊断率。剪取病甲用恒温加热法，20～30分钟，病甲很快完全溶解，可使病甲深层的菌丝体完全暴露出来，诊断率达91.11%，接近甲病理的诊断率[1]。对于近端甲下型甲真菌病的取材，仍需采用传统的刮取甲屑的方法，但有些皮肤癣菌位于甲板深层时[2，3]，刮屑法不易取到大量菌丝体，而致假阴性结果。
恒温加热法与传统的KOH镜检法、10%和20% NaOH、常温溶解法比较，恒温加热法溶解病甲标本快、时间短、诊断率高、易推广，可作为实验室诊断甲真菌病的方法。
参考文献 1 周文明, 朱一元. 甲真菌病的实验诊断方法研究. 中华皮肤科杂志, 1997,30∶328-329.
2 张文娟, 蔡永明, 桑菊花, 等. 甲真菌病组织病理学检查及其意义. 中华皮肤科杂志, 1996,29∶352-353.
3 伍燕兵, 雷鹏程. 甲真菌病的病理学诊断研究. 中华皮肤科杂志, 1996,29∶353 -354., 百拇医药
单位：050000 石家庄，河北医科大学第二临床医学院皮 肤科真菌室
关键词：
中华皮肤科杂志980529 我们用20%NaOH溶液恒温加热溶解病甲标本法(简称恒温加热法)，对我科门诊拟诊为甲真菌病患者的病甲标本进行了实验研究，取得了满意效果，现报道如下。
一、临床资料
拟诊为甲真菌病患者150例，其中全营养不良型87例，远端侧位甲下型52例，白色浅表型11例。指甲106例，趾甲44例。取材前患者均未口服抗真菌药，2周内也未用过外用抗真菌药。随机分为试验组和对照组，试验组90例，男51例，女39例；年龄9～64岁；病程25天至12年。对照组60例，男33例，女27例；年龄17～52岁；病程1个月至6年。
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二、方法
1.恒温加热法：将病甲(甲板增厚、角质松解、变色，表面凹凸不平或光滑甲板呈不同颜色的改变)剪成1mm直径大小，3～5块置于载玻片上，加2～3 滴20% NaOH溶液，盖上盖玻片，放入恒温(65℃)水浴箱内的试管架表面，10～30分钟取出，轻压之呈云雾状，显微镜下观察，并与传统的刮取病甲的甲屑用10% KOH制片法做对照。
2.常温溶解病甲标本法(简称常温溶解法)：取病甲1mm直径大小，3～5块用20% NaOH制片，放在室温(18℃～22℃)内2～6小时，显微镜下观察。
3.对30例病甲标本分别用20% NaOH、恒温加热10分钟、20分钟、30分钟与20% NaOH、 常温加热2小时、4小时、6小时，10% NaOH常规法4小时、8小时、12小时，进行溶解病甲标本时间比较。
三、结果
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1.试验组用恒温加热法，90例中82例阳性，8例阴性，阳性率91.11%。对照组用10% KOH常规法，60例中31例阳性，29例阴性，阳性率51.67%，两组经统计学处理，χ2＝30.14，P<0. 01，有非常显著性差异。恒温加热法镜检时很容易找到大量的菌丝和孢子，其特点有三种情况：①成群分隔分支的菌丝体和孢子。②分隔菌丝或假菌丝和芽生孢子。③较粗分隔或分支的菌丝。第一种情况多见。
2.30例病甲标本用恒温加热法，10分钟时溶解9份(30%)、20分钟时溶解13份(73.33%)、30分钟时溶解8份(100%)。用常温溶解法，2小时溶解4份(13.33%)、4小时溶解21份(83.33%)，6小时溶解5份(100%) 。用10% NaOH制片法，4小时溶解6份(20%)、8小时溶解18份(80%)、12小时溶解6份(100%)。说明恒温加热法镜检阳性率高，溶解病甲速度快，方法优于10%、20%常温溶解法。
四、讨论
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直接镜检是真菌实验室诊断甲真菌病的重要手段，采取标本和制片的方法直接影响甲真菌病的诊断率。剪取病甲用恒温加热法，20～30分钟，病甲很快完全溶解，可使病甲深层的菌丝体完全暴露出来，诊断率达91.11%，接近甲病理的诊断率[1]。对于近端甲下型甲真菌病的取材，仍需采用传统的刮取甲屑的方法，但有些皮肤癣菌位于甲板深层时[2，3]，刮屑法不易取到大量菌丝体，而致假阴性结果。
恒温加热法与传统的KOH镜检法、10%和20% NaOH、常温溶解法比较，恒温加热法溶解病甲标本快、时间短、诊断率高、易推广，可作为实验室诊断甲真菌病的方法。
参考文献 1 周文明, 朱一元. 甲真菌病的实验诊断方法研究. 中华皮肤科杂志, 1997,30∶328-329.
2 张文娟, 蔡永明, 桑菊花, 等. 甲真菌病组织病理学检查及其意义. 中华皮肤科杂志, 1996,29∶352-353.
3 伍燕兵, 雷鹏程. 甲真菌病的病理学诊断研究. 中华皮肤科杂志, 1996,29∶353 -354., 百拇医药