银屑病与扁平苔藓中FasL和穿孔素的检测
作者：徐 娟 郑茂荣 方跃明 牟贤龙 孙君红
单位：200433 上海第二军医大学附属长海医院皮肤科
关键词：银屑病；扁平苔藓；FasL；穿孔素
中华皮肤科杂志990209 【摘 要】 目的 通过对银屑病与扁平苔藓中FasL和穿孔素的检测，研究这两种疾病中细胞毒性T淋巴细胞的作用方式。方法 免疫组化ABC法。结果 在银屑病组织中FasL和穿孔素均为阳性表达；在扁平苔藓组织中FasL为阴性表达，穿孔素为阳性表达。结论 在银屑病中，细胞毒性T淋巴细胞可能通过FasL和穿孔素两条途径起作用；在扁平苔藓中，细胞毒性T淋巴细胞的作用方式可能仅为穿孔素途径。
Detection of Fas-L and Perforin in Psoriasis and Lichen Planus
, http://www.100md.com
XU Juan,ZHEN Maorong,FANG Yueming,et al.
Department of Dermatology, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433
【Abstract】 Objective To study the mode of action of cytotoxic T lymphocytes in psoriasis and lichen planus by detecting Fas-L and perforin in the two diseases. Mehtods Immunohistochemical staining ABC method was used. Results Both Fas-L and perforin were positive expressed in psoriasis. Fas-L was not expressed and perforin was expressed in lichen planus. Conculsion Cytotoxic T lymphocytes might played a role through both Fas-L and perforin pathways in psoriasis. However, cytotoxic T lymphocytes might function through perforin pathway only.
, 百拇医药
【Key words】 Psoriasis Lichen planus Fas ligand Perforin
银屑病的发病机理目前尚不十分清楚，组织病理显示银屑病患者真皮中有轻、中度的炎性细胞浸润。Baker等[1]认为银屑病是一种以T细胞介导的角质形成细胞增生性疾病。而扁平苔藓的组织病理则显示在真皮上部接近表皮处有密集淋巴细胞呈带状浸润，目前多数学者认为细胞介导的免疫应答在扁平苔藓的发病中起着重要作用。因此，研究银屑病与扁平苔藓中T淋巴细胞的作用方式对于探讨银屑病与扁平苔藓的发病机理具有重要意义。
材料和方法
一、标本来源
采用1994～1997年我院保存的石蜡包埋组织块。寻常型银屑病15例，其中男8例，女7例，年龄11～68岁，平均年龄29.13岁，均为进行期银屑病。扁平苔藓12例(其中2例为色素性扁平苔藓)，其中男6例，女6例。年龄15～63岁，平均31.25岁。正常人皮肤组织6份，皆取自皮肤外科行重睑术、面部美容切除术者的皮肤，石蜡包埋作为对照组。测定前先将石蜡包埋组织块作常规组织切片及HE染色，在光镜下核对诊断，证实其病理诊断无误方采用。
, 百拇医药
二、试剂 兔抗人FasL多抗系北京中山公司产品。鼠抗人穿孔素单抗由美国Miami大学医学院Podack博士惠 赠。生物素化羊抗小鼠、羊抗兔单克隆抗体均系华美生物制品公司产品。
三、免疫组化染色方法
载玻片用多聚赖氨酸处理，脱蜡水化，以3% H2O2抑制内源性过氧化物酶20min。抗原修复：将切片置于柠檬酸盐缓冲液中(0.01mol/L,pH6.0)微波炉3档5min，修复2次，自然冷却至室温。加1抗4℃过夜，再加生物素化2抗37℃ 30min及亲和素-HRP复合物37℃ 60min，以上每1步骤后均以PBS缓冲液浸洗标本5min共3次，DAB显色，苏木素复染，封片。镜检观察结果，棕黄色为阳性结果。以PBS代替1抗作为阴性对照。
结 果
FasL的表达：6例正常人皮肤组织中表皮FasL不表达，仅真皮个别组织细胞染色。15例银屑病组织中均有Fas-L的表达，阳性染色主要在真皮浅层浸润的淋巴细胞上，为胞膜染色，表皮FasL均为阴性表达(见图1)。而在12例扁平苔藓组织真表皮中FasL均为阴性表达。
, 百拇医药
图1 银屑病组织中FasL的阳性表达(×10)
穿孔素的表达：穿孔素在正常人皮肤组织中表皮及真皮均为阴性表达。15例银屑病组织中有12例为穿孔素阳性表达(见图2)，而在12例扁平苔藓中则有11例为阳性，阳性表达主要在浸润的淋巴细胞上，为胞浆染色。这两组疾病表皮中穿孔素均为阴性表达。
图2 银屑病组织中穿孔素的阳性表达(×10)
讨 论
T淋巴细胞特别是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和NK细胞是机体免疫监视中最主要的细胞，他们介导的细胞毒性(或杀伤)作用是一个复杂的、由多种途径引发的过程。目前研究结果表明细胞介导的细胞毒作用主要有两种作用方式：1穿孔素途径：激活的T细胞产生穿孔素、颗粒酶，首先是穿孔素致靶细胞穿孔，然后颗粒酶进入细胞内诱导靶细胞死亡[2]。2FasL(Fas配体，Fas ligand)途径：FasL是一种细胞表面分子，主要由活化的T细胞表达，它属于肿瘤坏死因子家族成员，并能与Fas抗原结合，从而诱导Fas阳性的细胞凋亡[3]。
, 百拇医药
我们的研究结果显示在银屑病组织中既有FasL的表达，又有穿孔素的表达，而在扁平苔藓组织中则仅有穿孔素的阳性表达，却无FasL的表达。从而提示银屑病中的细胞毒性淋巴细胞可能通过FasL和穿孔素两条途径起作用，而在扁平苔藓中则可能仅为穿孔素途径。银屑病的病理特点主要表现为表皮增厚、角质形成细胞过度增殖伴角化不全。对银屑病以往的研究多集中于各种细胞因子、有丝分裂原所起的作用，如认为肿瘤生长因子-α与表皮生长因子受体作用致使角质形成细胞过度增殖、表皮增厚[4]。近来细胞凋亡与银屑病关系的研究时有报道[5，6]。从我们的实验中可推测淋巴细胞通过FasL与Fas结合所致的角质形成细胞凋亡以及穿孔素途径引起的角质形成细胞凋亡在银屑病的发病中起重要作用。扁平苔藓病因不清，我们认为穿孔素引起的细胞凋亡在扁平苔藓发病中起重要作用。推测真皮中浸润的T淋巴细胞通过释放穿孔素从而引起角质形成细胞凋亡，致使基底细胞液化变性，造成基底膜受损。破坏的上皮细胞又可产生白介素-1等炎性因子，吸引更多淋巴细胞到病变部位，从而形成恶性循环，造成扁平苔藓皮损长期存在。
, 百拇医药
参考文献
1 Baker BS, Swain AF, Valdimarsson H, et al. T-cell subpopulations in the blood and skin of patients with psoriasis. Br J Dermatol, 1984,110:37-44.
2 Doherty PC. Cell-Mediated cytotoxicity. Cell, 1993,75:607-612.
3 Kagi D,Vignaux F, Ledermann B, et al. Fas and perforin pathways as major mechanisms of T cell mediated cytotoxicity. Science, 1994,265:528-530.
, 百拇医药 4 Nickoloff BJ. The cytokine network in psoriasis. Arch Dermatol, 1991,127:871-884.
5 Bianchi L, Farrace MC, Nini G, et al. Abnormal bcl-2 and “Tissue” transglutaminase expression in psoriatic skin. J Invest Dermatol, 1994,103:829-833.
6 Oishi M, Maeda K, Sugiyama S. Distribution of apoptosis-mediating Fas antigen in human skin and effects of anti-Fas monoclonal antibody on human epidermal keratinocyte and squamous cell carcinoma cell lines. Arch Dermatol Res, 1994,286:396-407.
(收稿：1998-06-13 修回：1998-11-18), 百拇医药
单位：200433 上海第二军医大学附属长海医院皮肤科
关键词：银屑病；扁平苔藓；FasL；穿孔素
中华皮肤科杂志990209 【摘 要】 目的 通过对银屑病与扁平苔藓中FasL和穿孔素的检测，研究这两种疾病中细胞毒性T淋巴细胞的作用方式。方法 免疫组化ABC法。结果 在银屑病组织中FasL和穿孔素均为阳性表达；在扁平苔藓组织中FasL为阴性表达，穿孔素为阳性表达。结论 在银屑病中，细胞毒性T淋巴细胞可能通过FasL和穿孔素两条途径起作用；在扁平苔藓中，细胞毒性T淋巴细胞的作用方式可能仅为穿孔素途径。
Detection of Fas-L and Perforin in Psoriasis and Lichen Planus
, http://www.100md.com
XU Juan,ZHEN Maorong,FANG Yueming,et al.
Department of Dermatology, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433
【Abstract】 Objective To study the mode of action of cytotoxic T lymphocytes in psoriasis and lichen planus by detecting Fas-L and perforin in the two diseases. Mehtods Immunohistochemical staining ABC method was used. Results Both Fas-L and perforin were positive expressed in psoriasis. Fas-L was not expressed and perforin was expressed in lichen planus. Conculsion Cytotoxic T lymphocytes might played a role through both Fas-L and perforin pathways in psoriasis. However, cytotoxic T lymphocytes might function through perforin pathway only.
, 百拇医药
【Key words】 Psoriasis Lichen planus Fas ligand Perforin
银屑病的发病机理目前尚不十分清楚，组织病理显示银屑病患者真皮中有轻、中度的炎性细胞浸润。Baker等[1]认为银屑病是一种以T细胞介导的角质形成细胞增生性疾病。而扁平苔藓的组织病理则显示在真皮上部接近表皮处有密集淋巴细胞呈带状浸润，目前多数学者认为细胞介导的免疫应答在扁平苔藓的发病中起着重要作用。因此，研究银屑病与扁平苔藓中T淋巴细胞的作用方式对于探讨银屑病与扁平苔藓的发病机理具有重要意义。
材料和方法
一、标本来源
采用1994～1997年我院保存的石蜡包埋组织块。寻常型银屑病15例，其中男8例，女7例，年龄11～68岁，平均年龄29.13岁，均为进行期银屑病。扁平苔藓12例(其中2例为色素性扁平苔藓)，其中男6例，女6例。年龄15～63岁，平均31.25岁。正常人皮肤组织6份，皆取自皮肤外科行重睑术、面部美容切除术者的皮肤，石蜡包埋作为对照组。测定前先将石蜡包埋组织块作常规组织切片及HE染色，在光镜下核对诊断，证实其病理诊断无误方采用。
, 百拇医药
二、试剂 兔抗人FasL多抗系北京中山公司产品。鼠抗人穿孔素单抗由美国Miami大学医学院Podack博士惠 赠。生物素化羊抗小鼠、羊抗兔单克隆抗体均系华美生物制品公司产品。
三、免疫组化染色方法
载玻片用多聚赖氨酸处理，脱蜡水化，以3% H2O2抑制内源性过氧化物酶20min。抗原修复：将切片置于柠檬酸盐缓冲液中(0.01mol/L,pH6.0)微波炉3档5min，修复2次，自然冷却至室温。加1抗4℃过夜，再加生物素化2抗37℃ 30min及亲和素-HRP复合物37℃ 60min，以上每1步骤后均以PBS缓冲液浸洗标本5min共3次，DAB显色，苏木素复染，封片。镜检观察结果，棕黄色为阳性结果。以PBS代替1抗作为阴性对照。
结 果
FasL的表达：6例正常人皮肤组织中表皮FasL不表达，仅真皮个别组织细胞染色。15例银屑病组织中均有Fas-L的表达，阳性染色主要在真皮浅层浸润的淋巴细胞上，为胞膜染色，表皮FasL均为阴性表达(见图1)。而在12例扁平苔藓组织真表皮中FasL均为阴性表达。
, 百拇医药
图1 银屑病组织中FasL的阳性表达(×10)
穿孔素的表达：穿孔素在正常人皮肤组织中表皮及真皮均为阴性表达。15例银屑病组织中有12例为穿孔素阳性表达(见图2)，而在12例扁平苔藓中则有11例为阳性，阳性表达主要在浸润的淋巴细胞上，为胞浆染色。这两组疾病表皮中穿孔素均为阴性表达。
图2 银屑病组织中穿孔素的阳性表达(×10)
讨 论
T淋巴细胞特别是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和NK细胞是机体免疫监视中最主要的细胞，他们介导的细胞毒性(或杀伤)作用是一个复杂的、由多种途径引发的过程。目前研究结果表明细胞介导的细胞毒作用主要有两种作用方式：1穿孔素途径：激活的T细胞产生穿孔素、颗粒酶，首先是穿孔素致靶细胞穿孔，然后颗粒酶进入细胞内诱导靶细胞死亡[2]。2FasL(Fas配体，Fas ligand)途径：FasL是一种细胞表面分子，主要由活化的T细胞表达，它属于肿瘤坏死因子家族成员，并能与Fas抗原结合，从而诱导Fas阳性的细胞凋亡[3]。
, 百拇医药
我们的研究结果显示在银屑病组织中既有FasL的表达，又有穿孔素的表达，而在扁平苔藓组织中则仅有穿孔素的阳性表达，却无FasL的表达。从而提示银屑病中的细胞毒性淋巴细胞可能通过FasL和穿孔素两条途径起作用，而在扁平苔藓中则可能仅为穿孔素途径。银屑病的病理特点主要表现为表皮增厚、角质形成细胞过度增殖伴角化不全。对银屑病以往的研究多集中于各种细胞因子、有丝分裂原所起的作用，如认为肿瘤生长因子-α与表皮生长因子受体作用致使角质形成细胞过度增殖、表皮增厚[4]。近来细胞凋亡与银屑病关系的研究时有报道[5，6]。从我们的实验中可推测淋巴细胞通过FasL与Fas结合所致的角质形成细胞凋亡以及穿孔素途径引起的角质形成细胞凋亡在银屑病的发病中起重要作用。扁平苔藓病因不清，我们认为穿孔素引起的细胞凋亡在扁平苔藓发病中起重要作用。推测真皮中浸润的T淋巴细胞通过释放穿孔素从而引起角质形成细胞凋亡，致使基底细胞液化变性，造成基底膜受损。破坏的上皮细胞又可产生白介素-1等炎性因子，吸引更多淋巴细胞到病变部位，从而形成恶性循环，造成扁平苔藓皮损长期存在。
, 百拇医药
参考文献
1 Baker BS, Swain AF, Valdimarsson H, et al. T-cell subpopulations in the blood and skin of patients with psoriasis. Br J Dermatol, 1984,110:37-44.
2 Doherty PC. Cell-Mediated cytotoxicity. Cell, 1993,75:607-612.
3 Kagi D,Vignaux F, Ledermann B, et al. Fas and perforin pathways as major mechanisms of T cell mediated cytotoxicity. Science, 1994,265:528-530.
, 百拇医药 4 Nickoloff BJ. The cytokine network in psoriasis. Arch Dermatol, 1991,127:871-884.
5 Bianchi L, Farrace MC, Nini G, et al. Abnormal bcl-2 and “Tissue” transglutaminase expression in psoriatic skin. J Invest Dermatol, 1994,103:829-833.
6 Oishi M, Maeda K, Sugiyama S. Distribution of apoptosis-mediating Fas antigen in human skin and effects of anti-Fas monoclonal antibody on human epidermal keratinocyte and squamous cell carcinoma cell lines. Arch Dermatol Res, 1994,286:396-407.
(收稿：1998-06-13 修回：1998-11-18), 百拇医药