肾上腺素β受体激动剂对小鼠上皮细胞分裂和表皮细胞分化的影响
作者：崔春华 林熙然
单位：崔春华 林熙然(指导者) 116011 大连医科大学附属第一医院皮肤科
关键词：
中华皮肤科杂志990230 银屑病皮损内cAMP含量降低、cGMP含量升高和cAMP/cGMP比值下降， 在造成表皮角朊细胞增生过快和表皮分化不全的银屑病基本变化中，起重要作用[1]。肾上腺素β受体激动剂通过激活腺苷酸环化酶(AC)，促进cAMP生成而提高细胞内cAMP含量和cAMP/cGMP 比值。曾有试探性报告将此类药物用于银屑病的临床治疗，我们在此基础上，对5种肾上腺素β受体激动剂与银屑病治疗有关的药效学作用进行系统的实验研究。
一、动物与药物
动物：健康昆明种远交系小鼠(大连医科大学动物中心提供)，体重20～30g。药物：异丙肾上腺素(上海禾丰制药有限公司)0.4mg/kg，硫酸特布他林(阿斯特拉无锡制药有限公司)4mg/kg， 丙卡特罗(中国大冢制药有限公司)0.02mg/kg，沙丁胺醇(江苏丹阳制药厂)4mg/kg，麻黄碱(山东新华制药厂)20mg/kg。一般实验用药剂量为临床用量的5～10倍。
, 百拇医药
二、方法
1. 药物对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响：取雌性小鼠腹腔注射乙烯雌酚，每日1次，每次0.2mg，连续注射3d后将实验动物分为6组，分别给予前述药物及生理盐水腹腔注射, 每日2次，连续3d。然后杀死小鼠，取阴道标本，石蜡包埋，HE染色。在光镜下计数有丝分裂指数。
2.药物对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成的影响：取雄性小鼠分为6组，分别给予前述药物及生理盐水，每日2次，连续14d。然后杀死小鼠，取尾部背部皮肤一长条，石蜡包埋，HE染色。在光镜下计数有颗粒层的鳞片数。
3.药物对小鼠血浆环核苷酸水平的影响：在实验2处死动物之际，立即眼眶取血1～2mL，用 125I-cAMP试剂盒及125I-cGMP试剂盒测量血浆cAMP和cGMP水平。
4.统计学分析采用两样本均数比较的t检验。
, 百拇医药
三、实验结果
1.5种药物对小鼠阴道上皮细胞分裂和鼠尾鳞片表皮分化的影响见表1。5种β受体激动剂均显著抑制小鼠阴道上皮细胞有丝分裂(P<0.05或P<0.01)，并显著促进小鼠尾部鳞片表皮颗粒层的形成(P均<0.01)。
表1 5种肾上腺素β受体激动剂对小鼠阴道上皮有丝分裂及鼠尾磷片表皮颗粒层形成的影响 组 别
有丝分裂指数
每100鳞片中有颗粒层鳞片数
n
±s
t
n±s
, 百拇医药
t
生理盐水
9
16.47±2.82
-
11
7.09±2.17
-
异丙肾上腺素
10
7.64±2.65
4.70**
11
, 百拇医药
15.09±5.19
4.73**
硫酸特布他林
11
8.47±1.75
4.79**
10
17.70±6.40
5.20**
丙卡特罗
10
6.76±2.16
, 百拇医药
5.50**
11
15.27±5.93
4.33**
沙丁胺醇
11
11.31±3.99
2.19*
11
12.55±3.64
4.30**
, 百拇医药 麻黄碱
11
8.00±1.75
5.11**
11
11.91±4.09
3.47**
注：与生理盐水比较*P<0.05,**P<0.01
2. 5种药物对小鼠血浆环核苷酸水平的影响见表2。硫酸特布他林、丙卡特罗和麻黄碱显著提高小鼠血浆cAMP水平(P<0.05或P<0.01 )，5种药物对小鼠血浆cGMP水平均无显著性(P>0.05)，异丙肾上腺素、硫酸特布他林、丙卡特罗和沙丁胺醇显著提高小鼠血浆cAMP/cGMP比值(P<0.05或<0.01 )。
, 百拇医药
表2 5种肾上腺素β受体激动剂对小鼠血浆环苷酸水平的影响 组 别
n
cAMP(×103nmol/L)
cGMP(×103nmol/L)
cAMP/cGMP(×103nmol/L)±s
t±s
t±s
, 百拇医药
t
生理盐水
8
40.66±22.24
-
20.27±13.02
-
2.39±1.34
-
异丙肾上腺素
10
60.78±35.69
1.39
, 百拇医药
14.20±4.41
1.39
4.23±1.62
2.59**
硫酸特布他林
10
77.97±20.57
3.70**
14.63±4.61
1.28
5.59±1.88
4.05**
, http://www.100md.com
丙卡特罗
8
94.29±30.28
4.02**
14.75±3.04
1.16
6.57±2.33
4.40**
沙丁胺醇
11
54.34±20.28
1.38
, 百拇医药
12.35±3.51
1.92
4.43±1.21
3.46**
麻黄碱
10
82.03±37.63
2.74*
16.25±5.98
0.87
4.44±2.60
2.01
, http://www.100md.com
注：与生理盐水比较*P<0.05,**P<0.01
四、讨论
5种肾上腺素β受体激动剂均显著抑制小鼠阴道上皮有丝分裂，并显著促进鼠尾鳞片表皮颗粒层形成。因此，它们均可能具有纠正银屑病表皮增生过快和分化不全两方面的作用。5种药物中，硫酸特布他林、丙卡特罗和沙丁胺醇可长期用药[2，3],符合银屑病内用药的要求，具有较好的应用前景。异丙肾上腺素和麻黄碱不宜长期内用，可以尝试局部应用。Das等局部应用异丙肾上腺素软膏治疗12例银屑病患者，使损害表皮的糖原含量明显减少，鳞屑消失。本研究为这些药物的进一步临床应用提供了实验依据。
硫酸特布他林、丙卡特罗和麻黄碱3种药物显著提高小鼠血浆cAMP水平，提示药物通过cAMP级联起作用。异丙肾上腺素和沙丁胺醇对小鼠血浆cAMP的提高不够显著,可能由于细胞内cAMP只有部分渗至血浆中得以测出。异丙肾上腺素、硫酸特布他林、丙卡特罗和沙丁胺淳4种药物显著提高cAMP/cGMP比值。可见，药物对细胞cAMP/cGMP比值的影响比对cAMP的影响更为显著，并提示cAMP/cGMP比值在调节细胞增殖与分化中更具重要性。
, 百拇医药
参考文献
1 Moschella SL, Harley HJ. Dermatology. Vol 1. 2nd ed. Philadelphia:Saunder Co,1985.502-505.
2 Schaffler K, Reeh PW. Induction and reduction of muscle tremor upon acute and repeated administration of the beta 2-agonist terbutaline, salbutamol and tulobuterol. Int J Clin Pharmacol Ther Toxicol, 1987, 25:673-682.
3 刘国华,徐永昭. 新药特药手册. 第1版. 沈阳:辽宁科学技术出版社, 1995.295.
(收稿：1998-08-11 修回：1998-12-14), 百拇医药
单位：崔春华 林熙然(指导者) 116011 大连医科大学附属第一医院皮肤科
关键词：
中华皮肤科杂志990230 银屑病皮损内cAMP含量降低、cGMP含量升高和cAMP/cGMP比值下降， 在造成表皮角朊细胞增生过快和表皮分化不全的银屑病基本变化中，起重要作用[1]。肾上腺素β受体激动剂通过激活腺苷酸环化酶(AC)，促进cAMP生成而提高细胞内cAMP含量和cAMP/cGMP 比值。曾有试探性报告将此类药物用于银屑病的临床治疗，我们在此基础上，对5种肾上腺素β受体激动剂与银屑病治疗有关的药效学作用进行系统的实验研究。
一、动物与药物
动物：健康昆明种远交系小鼠(大连医科大学动物中心提供)，体重20～30g。药物：异丙肾上腺素(上海禾丰制药有限公司)0.4mg/kg，硫酸特布他林(阿斯特拉无锡制药有限公司)4mg/kg， 丙卡特罗(中国大冢制药有限公司)0.02mg/kg，沙丁胺醇(江苏丹阳制药厂)4mg/kg，麻黄碱(山东新华制药厂)20mg/kg。一般实验用药剂量为临床用量的5～10倍。
, 百拇医药
二、方法
1. 药物对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响：取雌性小鼠腹腔注射乙烯雌酚，每日1次，每次0.2mg，连续注射3d后将实验动物分为6组，分别给予前述药物及生理盐水腹腔注射, 每日2次，连续3d。然后杀死小鼠，取阴道标本，石蜡包埋，HE染色。在光镜下计数有丝分裂指数。
2.药物对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成的影响：取雄性小鼠分为6组，分别给予前述药物及生理盐水，每日2次，连续14d。然后杀死小鼠，取尾部背部皮肤一长条，石蜡包埋，HE染色。在光镜下计数有颗粒层的鳞片数。
3.药物对小鼠血浆环核苷酸水平的影响：在实验2处死动物之际，立即眼眶取血1～2mL，用 125I-cAMP试剂盒及125I-cGMP试剂盒测量血浆cAMP和cGMP水平。
4.统计学分析采用两样本均数比较的t检验。
, 百拇医药
三、实验结果
1.5种药物对小鼠阴道上皮细胞分裂和鼠尾鳞片表皮分化的影响见表1。5种β受体激动剂均显著抑制小鼠阴道上皮细胞有丝分裂(P<0.05或P<0.01)，并显著促进小鼠尾部鳞片表皮颗粒层的形成(P均<0.01)。
表1 5种肾上腺素β受体激动剂对小鼠阴道上皮有丝分裂及鼠尾磷片表皮颗粒层形成的影响 组 别
有丝分裂指数
每100鳞片中有颗粒层鳞片数
n
±st
n
±s, 百拇医药
t
生理盐水
9
16.47±2.82
-
11
7.09±2.17
-
异丙肾上腺素
10
7.64±2.65
4.70**
11
, 百拇医药
15.09±5.19
4.73**
硫酸特布他林
11
8.47±1.75
4.79**
10
17.70±6.40
5.20**
丙卡特罗
10
6.76±2.16
, 百拇医药
5.50**
11
15.27±5.93
4.33**
沙丁胺醇
11
11.31±3.99
2.19*
11
12.55±3.64
4.30**
, 百拇医药 麻黄碱
11
8.00±1.75
5.11**
11
11.91±4.09
3.47**
注：与生理盐水比较*P<0.05,**P<0.01
2. 5种药物对小鼠血浆环核苷酸水平的影响见表2。硫酸特布他林、丙卡特罗和麻黄碱显著提高小鼠血浆cAMP水平(P<0.05或P<0.01 )，5种药物对小鼠血浆cGMP水平均无显著性(P>0.05)，异丙肾上腺素、硫酸特布他林、丙卡特罗和沙丁胺醇显著提高小鼠血浆cAMP/cGMP比值(P<0.05或<0.01 )。
, 百拇医药
表2 5种肾上腺素β受体激动剂对小鼠血浆环苷酸水平的影响 组 别
n
cAMP(×103nmol/L)
cGMP(×103nmol/L)
cAMP/cGMP(×103nmol/L)
±st
±st
±s, 百拇医药
t
生理盐水
8
40.66±22.24
-
20.27±13.02
-
2.39±1.34
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异丙肾上腺素
10
60.78±35.69
1.39
, 百拇医药
14.20±4.41
1.39
4.23±1.62
2.59**
硫酸特布他林
10
77.97±20.57
3.70**
14.63±4.61
1.28
5.59±1.88
4.05**
, http://www.100md.com
丙卡特罗
8
94.29±30.28
4.02**
14.75±3.04
1.16
6.57±2.33
4.40**
沙丁胺醇
11
54.34±20.28
1.38
, 百拇医药
12.35±3.51
1.92
4.43±1.21
3.46**
麻黄碱
10
82.03±37.63
2.74*
16.25±5.98
0.87
4.44±2.60
2.01
, http://www.100md.com
注：与生理盐水比较*P<0.05,**P<0.01
四、讨论
5种肾上腺素β受体激动剂均显著抑制小鼠阴道上皮有丝分裂，并显著促进鼠尾鳞片表皮颗粒层形成。因此，它们均可能具有纠正银屑病表皮增生过快和分化不全两方面的作用。5种药物中，硫酸特布他林、丙卡特罗和沙丁胺醇可长期用药[2，3],符合银屑病内用药的要求，具有较好的应用前景。异丙肾上腺素和麻黄碱不宜长期内用，可以尝试局部应用。Das等局部应用异丙肾上腺素软膏治疗12例银屑病患者，使损害表皮的糖原含量明显减少，鳞屑消失。本研究为这些药物的进一步临床应用提供了实验依据。
硫酸特布他林、丙卡特罗和麻黄碱3种药物显著提高小鼠血浆cAMP水平，提示药物通过cAMP级联起作用。异丙肾上腺素和沙丁胺醇对小鼠血浆cAMP的提高不够显著,可能由于细胞内cAMP只有部分渗至血浆中得以测出。异丙肾上腺素、硫酸特布他林、丙卡特罗和沙丁胺淳4种药物显著提高cAMP/cGMP比值。可见，药物对细胞cAMP/cGMP比值的影响比对cAMP的影响更为显著，并提示cAMP/cGMP比值在调节细胞增殖与分化中更具重要性。
, 百拇医药
参考文献
1 Moschella SL, Harley HJ. Dermatology. Vol 1. 2nd ed. Philadelphia:Saunder Co,1985.502-505.
2 Schaffler K, Reeh PW. Induction and reduction of muscle tremor upon acute and repeated administration of the beta 2-agonist terbutaline, salbutamol and tulobuterol. Int J Clin Pharmacol Ther Toxicol, 1987, 25:673-682.
3 刘国华,徐永昭. 新药特药手册. 第1版. 沈阳:辽宁科学技术出版社, 1995.295.
(收稿：1998-08-11 修回：1998-12-14), 百拇医药