皮肤鳞状细胞癌中细胞外基质的分布形式与意义
作者：王建力 陈莉
单位：226001南通医学院附属医院皮肤科(王建力)；南通医学院病理教研室(陈莉)
关键词：癌；鳞状细胞纤连蛋白类层粘连蛋白
中华皮肤科杂志990403
【摘要】目的 观察细胞外基质中纤连蛋白、层粘连蛋白在皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)中的分布形式，探讨其与癌生物学行为的关系。方法 用纤连蛋白、层粘连蛋白、增殖细胞核抗原、p53抗体对50例皮肤鳞癌作免疫组化染色。结果 纤连蛋白、层粘连蛋白在皮肤鳞癌中显示3种分布形式，不连续巢周型、碎片型、血管间质型，这3种分布形式与癌生长、分化、增殖密切相关，3例分化好的膨胀巢状生长，在癌巢周有连续线状纤连蛋白、层粘连蛋白分布。结论 皮肤鳞癌中纤连蛋白、层粘连蛋白明显减少，浸润性癌中不一定均有基膜缺乏，癌浸润后可能需经过灶性组织分化，再进一步浸润与转移，纤连蛋白、层粘连蛋白的分布形式反应了癌的恶性程度。
, 百拇医药
Distribution of Extracellular Matrix in Squamous Cell Carcinoma
of Skin and Its Biological Significance
WANG Jianli, CHEN Li.
Department of Dermatology, Affiliated Hospital, Nantong Medical College, Nantong 226001
【Abstract】 Objective To find out the distribution of extracellular matrix (ECM) in squamous cell carcinoma (SSC) and explore its biological significance. Methods Fifty cases of SSC were studied by immunohistochemistry with antibodies to laminin (LN), fibronectin (FN), PCNA, and p53. Results Three types of distribution patterns were found. i.e., discontinuous peri-carcinoma nest type, fragmentary type, and vascular stroma type. The three types were correlated closely with the growth, differentiation and proliferation of tumor. Basement membrane was present in 3 cases with large invasive tumor nests, shown by continuous linear distribution of FN and LN. Conclusion The expressions of FN and LN decrease markedly, but the absence of basement membrane does not necessarily define invasive SSC, and the correlation of the presence of basement membrane and histologic pattern of invasive tumor suggests that SSC is capable of undergoing focal differentiation before invasion and metastasis have occurred. The distribution of FN and LN might represent the malignant degree of SSC.
, 百拇医药
【Key words】 Carcinoma, squamous cell Fibronectins Laminin
现已证明肿瘤组织中纤连蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)成分减少与肿瘤发生、发展、浸润、转移密切相关。增殖细胞核抗原(PCNA)和p53在调节细胞增殖中起重要作用，它们出现于细胞G1期，共同调节细胞从G1进入S期。本文通过免疫组化技术，观察FN、LN在50例皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)中的分布，分析其与癌生长、分化、增殖的关系。
材料与方法
1.材料：50例皮肤鳞癌选于本院及周围市、县级医院1983年至1993年10年间保存较好的蜡块，男41例，女9例，平均年龄59.6岁。取5例乳腺癌切缘正常皮肤作对照组。
2.方法：蜡块标本原经10%福尔马林固定24h，常规石蜡包埋，连续切片4μm厚。免疫组化LSAB法，使用抗体为FN(Sigma)1∶400,LN(Sigma)1∶1500,PCNA(PC10)(Dako)1∶30，p53(Do7)(Dako)1∶50，LSAB试剂盒(Sigma)1∶400，DAB显色。FN、LN染色切片中以血管基底膜显色作为阳性对照，PCNA和p53蛋白阳性对照分别选用高水平表达PCNA和p53蛋白的增殖性扁桃腺炎和食道鳞癌。PBS代替第一抗体作为阴性对照。
, 百拇医药
3.判断标准：按WHO分类将皮肤鳞癌分为Ⅰ～Ⅳ级；将癌组织生长方式分为巢性膨胀性生长(A型)，此型有器官样结构，间质与癌巢分界清楚；细梁、索状或单个细胞浸润于间质中(B型)[1]；PCNA和p53蛋白表达的判断标准为[2]：p53蛋白和PCNA阳性表达定位于癌细胞核内，连续观察5～10个高倍视野，平均每个视野阳性细胞占<10%为(+)，10%~50%o为(++),>50%为(+++)，无p53表达为阴性。
结果
1.正常皮肤中FN、LN表达在表皮真皮连接处，皮肤附属器及血管周围基底膜中呈连续均匀细线状。真皮胶原纤维束间亦有短线状或颗粒状分布，LN染色较FN淡。正常皮肤基底层细胞呈PCNA阳性，p53蛋白阴性表达。
2.皮肤鳞癌中FN、LN表达有3种形式：①不连续巢周型9例(18%)(图1)，②巢周碎片型14例(28%)，③血管间质型27例(54%)，部分癌细胞胞浆内有FN、LN表达。所有病例中均可见到PCNA阳性表达细胞，在癌巢边缘PCNA阳性较明显，在癌分化差的区域PCNA阳性细胞成簇出现，主要分布于分化较差的增殖区。
, 百拇医药
图1 免疫组化LSAB法染色纤连蛋白、层粘边蛋白在癌巢周围呈线状表达(×100)
3.皮肤鳞癌中FN、LN分布形式与癌生长、分化、增殖的关系(见表1)：由表可见当癌呈A型生长时FN、LN以癌周碎片型分布为主，在B型生长中以血管间质型分布为主，两型中FN、LN分布差异有显著性(χ2=6.39,P<0.05);高分化Ⅰ级癌以碎片型分布为主,其余Ⅱ~Ⅳ级癌均以血管间质型为主,各级中FN、LN分布差异有显著性(χ2=11.74,P<0.05);随癌细胞增殖活跃,癌巢周围FN、LN分布减少,且以血管间质型为主.PCNA表达不同强度中FN、LN分布差异有显著性(χ2=9.717,P<0.05).当P53蛋白表达增强时,FN、LN以血管间质型为主,当P53阴性时,FN、LN在癌巢周呈不连续线状或碎片状分布(χ2=14.50,P<0.05).50例皮肤鳞癌中有3例低分化癌发生附近淋巴结转移,在原发灶中癌巢周围FN、LN明显缺失,FN、LN主要以血管间质型为主,癌细胞PCNA、P53均为强阳性.
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表1皮肤鳞癌生长方式、分级、增殖与纤连蛋白、层粘连蛋白分布形式的关系
例数
不连续巢周型(%)
碎片型(%)
血管间质型(%)
生长方式
A型
21
5(23.8)
9(42.9)
7(33.3)
B型
, 百拇医药
29
4(13.8)
5(17.2)
20(69.0)
组织分级
Ⅰ
18
5(27.8)
9(50.0)
4(22.2)
Ⅱ
23
3(13.0)
, 百拇医药
4(17.4)
16(69.6)
Ⅲ~Ⅳ
9
1
1
7
PCNA表达
+
12
4(33.3)
6(50.0)
2(16.7)
, 百拇医药
++
23
4(17.4)
5(21.7)
14(60.9)
+++
15
1(6.7)
3(20.0)
11(73.3)
P53表达
-
22
, 百拇医药
7(31.8)
9(40.9)
6(27.3)
+
16
2(12.5)
4(25.0)
10(62.5)
++
6
0
1
5
, http://www.100md.com
+++
6
0
0
6
括号内数值为构成比
50例皮肤鳞癌中有3例高分化浅表浸润性鳞癌，细胞呈A型生长，在癌巢周可见有FN、LN呈连续细线状分布，此时PCNA弱阳性，p53蛋白呈阴性表达。
讨论
本文结果表明皮肤鳞癌分化从高到低，癌细胞的生长模式亦从A型发展到B型，FN、LN分布逐渐减少到消失，分布形式亦发生显著变化，从癌周不连续线状碎片型到缺失，表现为血管间质型分布。p53蛋白与PCNA均调节细胞增殖，表达于细胞周期G1后期到S期，两者表达具有同步性。癌细胞增殖使细胞外环境改变，后者又使细胞内p53基因突变，使癌细胞内p53蛋白聚集，表达增强。癌细胞中PCNA、p53蛋白表达与癌周FN、LN表达呈负相关，与FN、LN在血管间质中表达呈正相关，说明增殖活跃的癌细胞产生FN、LN能力减弱，相反增殖细胞促进间质细胞产生FN、LN。有3例高分化A型生长的表浅浸润性癌，虽然癌组织已突破基底膜向下浸润，但癌周仍有完整线状FN、LN分布，因此我们赞成Wael的观点[1]，浸润癌并不一定都有基底膜丧失，不同意Visser等[3]试图用基底膜染色估价微浸润癌的观点。值得指出浸润性鳞癌细胞外基底膜的存在，既说明该细胞具有来源细胞的功能，也说明这种由癌细胞产生的非正常基底膜已不具有正常上皮基膜的屏障作用。
, 百拇医药
参考文献
1 Wael A, Sakr M, Richard J, et al. Distribution of basement membrane in squamous cell carcinoma of the head and neck. Hum Pathol, 1987,18:1043- 1046.
2 王建力，陈莉.皮肤鳞状细胞癌分级与p53蛋白和增殖细胞核抗原表达及与巨噬细胞反应的关系.中华皮肤科杂志，1997，30：253-255.
3 Visser R, Vander B, Haveuith MG. Immunocytochemical detection of basement membrane antigens in the histopathological evaluation of laryngeal dysplasia and neoplasia. Histopathology, 1986,10:171-175.
收稿：1998-08-13修回：1998-12-28, http://www.100md.com
单位：226001南通医学院附属医院皮肤科(王建力)；南通医学院病理教研室(陈莉)
关键词：癌；鳞状细胞纤连蛋白类层粘连蛋白
中华皮肤科杂志990403
【摘要】目的 观察细胞外基质中纤连蛋白、层粘连蛋白在皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)中的分布形式，探讨其与癌生物学行为的关系。方法 用纤连蛋白、层粘连蛋白、增殖细胞核抗原、p53抗体对50例皮肤鳞癌作免疫组化染色。结果 纤连蛋白、层粘连蛋白在皮肤鳞癌中显示3种分布形式，不连续巢周型、碎片型、血管间质型，这3种分布形式与癌生长、分化、增殖密切相关，3例分化好的膨胀巢状生长，在癌巢周有连续线状纤连蛋白、层粘连蛋白分布。结论 皮肤鳞癌中纤连蛋白、层粘连蛋白明显减少，浸润性癌中不一定均有基膜缺乏，癌浸润后可能需经过灶性组织分化，再进一步浸润与转移，纤连蛋白、层粘连蛋白的分布形式反应了癌的恶性程度。
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Distribution of Extracellular Matrix in Squamous Cell Carcinoma
of Skin and Its Biological Significance
WANG Jianli, CHEN Li.
Department of Dermatology, Affiliated Hospital, Nantong Medical College, Nantong 226001
【Abstract】 Objective To find out the distribution of extracellular matrix (ECM) in squamous cell carcinoma (SSC) and explore its biological significance. Methods Fifty cases of SSC were studied by immunohistochemistry with antibodies to laminin (LN), fibronectin (FN), PCNA, and p53. Results Three types of distribution patterns were found. i.e., discontinuous peri-carcinoma nest type, fragmentary type, and vascular stroma type. The three types were correlated closely with the growth, differentiation and proliferation of tumor. Basement membrane was present in 3 cases with large invasive tumor nests, shown by continuous linear distribution of FN and LN. Conclusion The expressions of FN and LN decrease markedly, but the absence of basement membrane does not necessarily define invasive SSC, and the correlation of the presence of basement membrane and histologic pattern of invasive tumor suggests that SSC is capable of undergoing focal differentiation before invasion and metastasis have occurred. The distribution of FN and LN might represent the malignant degree of SSC.
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【Key words】 Carcinoma, squamous cell Fibronectins Laminin
现已证明肿瘤组织中纤连蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)成分减少与肿瘤发生、发展、浸润、转移密切相关。增殖细胞核抗原(PCNA)和p53在调节细胞增殖中起重要作用，它们出现于细胞G1期，共同调节细胞从G1进入S期。本文通过免疫组化技术，观察FN、LN在50例皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)中的分布，分析其与癌生长、分化、增殖的关系。
材料与方法
1.材料：50例皮肤鳞癌选于本院及周围市、县级医院1983年至1993年10年间保存较好的蜡块，男41例，女9例，平均年龄59.6岁。取5例乳腺癌切缘正常皮肤作对照组。
2.方法：蜡块标本原经10%福尔马林固定24h，常规石蜡包埋，连续切片4μm厚。免疫组化LSAB法，使用抗体为FN(Sigma)1∶400,LN(Sigma)1∶1500,PCNA(PC10)(Dako)1∶30，p53(Do7)(Dako)1∶50，LSAB试剂盒(Sigma)1∶400，DAB显色。FN、LN染色切片中以血管基底膜显色作为阳性对照，PCNA和p53蛋白阳性对照分别选用高水平表达PCNA和p53蛋白的增殖性扁桃腺炎和食道鳞癌。PBS代替第一抗体作为阴性对照。
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3.判断标准：按WHO分类将皮肤鳞癌分为Ⅰ～Ⅳ级；将癌组织生长方式分为巢性膨胀性生长(A型)，此型有器官样结构，间质与癌巢分界清楚；细梁、索状或单个细胞浸润于间质中(B型)[1]；PCNA和p53蛋白表达的判断标准为[2]：p53蛋白和PCNA阳性表达定位于癌细胞核内，连续观察5～10个高倍视野，平均每个视野阳性细胞占<10%为(+)，10%~50%o为(++),>50%为(+++)，无p53表达为阴性。
结果
1.正常皮肤中FN、LN表达在表皮真皮连接处，皮肤附属器及血管周围基底膜中呈连续均匀细线状。真皮胶原纤维束间亦有短线状或颗粒状分布，LN染色较FN淡。正常皮肤基底层细胞呈PCNA阳性，p53蛋白阴性表达。
2.皮肤鳞癌中FN、LN表达有3种形式：①不连续巢周型9例(18%)(图1)，②巢周碎片型14例(28%)，③血管间质型27例(54%)，部分癌细胞胞浆内有FN、LN表达。所有病例中均可见到PCNA阳性表达细胞，在癌巢边缘PCNA阳性较明显，在癌分化差的区域PCNA阳性细胞成簇出现，主要分布于分化较差的增殖区。
, 百拇医药
图1 免疫组化LSAB法染色纤连蛋白、层粘边蛋白在癌巢周围呈线状表达(×100)
3.皮肤鳞癌中FN、LN分布形式与癌生长、分化、增殖的关系(见表1)：由表可见当癌呈A型生长时FN、LN以癌周碎片型分布为主，在B型生长中以血管间质型分布为主，两型中FN、LN分布差异有显著性(χ2=6.39,P<0.05);高分化Ⅰ级癌以碎片型分布为主,其余Ⅱ~Ⅳ级癌均以血管间质型为主,各级中FN、LN分布差异有显著性(χ2=11.74,P<0.05);随癌细胞增殖活跃,癌巢周围FN、LN分布减少,且以血管间质型为主.PCNA表达不同强度中FN、LN分布差异有显著性(χ2=9.717,P<0.05).当P53蛋白表达增强时,FN、LN以血管间质型为主,当P53阴性时,FN、LN在癌巢周呈不连续线状或碎片状分布(χ2=14.50,P<0.05).50例皮肤鳞癌中有3例低分化癌发生附近淋巴结转移,在原发灶中癌巢周围FN、LN明显缺失,FN、LN主要以血管间质型为主,癌细胞PCNA、P53均为强阳性.
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表1皮肤鳞癌生长方式、分级、增殖与纤连蛋白、层粘连蛋白分布形式的关系
例数
不连续巢周型(%)
碎片型(%)
血管间质型(%)
生长方式
A型
21
5(23.8)
9(42.9)
7(33.3)
B型
, 百拇医药
29
4(13.8)
5(17.2)
20(69.0)
组织分级
Ⅰ
18
5(27.8)
9(50.0)
4(22.2)
Ⅱ
23
3(13.0)
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4(17.4)
16(69.6)
Ⅲ~Ⅳ
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PCNA表达
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12
4(33.3)
6(50.0)
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P53表达
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括号内数值为构成比
50例皮肤鳞癌中有3例高分化浅表浸润性鳞癌，细胞呈A型生长，在癌巢周可见有FN、LN呈连续细线状分布，此时PCNA弱阳性，p53蛋白呈阴性表达。
讨论
本文结果表明皮肤鳞癌分化从高到低，癌细胞的生长模式亦从A型发展到B型，FN、LN分布逐渐减少到消失，分布形式亦发生显著变化，从癌周不连续线状碎片型到缺失，表现为血管间质型分布。p53蛋白与PCNA均调节细胞增殖，表达于细胞周期G1后期到S期，两者表达具有同步性。癌细胞增殖使细胞外环境改变，后者又使细胞内p53基因突变，使癌细胞内p53蛋白聚集，表达增强。癌细胞中PCNA、p53蛋白表达与癌周FN、LN表达呈负相关，与FN、LN在血管间质中表达呈正相关，说明增殖活跃的癌细胞产生FN、LN能力减弱，相反增殖细胞促进间质细胞产生FN、LN。有3例高分化A型生长的表浅浸润性癌，虽然癌组织已突破基底膜向下浸润，但癌周仍有完整线状FN、LN分布，因此我们赞成Wael的观点[1]，浸润癌并不一定都有基底膜丧失，不同意Visser等[3]试图用基底膜染色估价微浸润癌的观点。值得指出浸润性鳞癌细胞外基底膜的存在，既说明该细胞具有来源细胞的功能，也说明这种由癌细胞产生的非正常基底膜已不具有正常上皮基膜的屏障作用。
, 百拇医药
参考文献
1 Wael A, Sakr M, Richard J, et al. Distribution of basement membrane in squamous cell carcinoma of the head and neck. Hum Pathol, 1987,18:1043- 1046.
2 王建力，陈莉.皮肤鳞状细胞癌分级与p53蛋白和增殖细胞核抗原表达及与巨噬细胞反应的关系.中华皮肤科杂志，1997，30：253-255.
3 Visser R, Vander B, Haveuith MG. Immunocytochemical detection of basement membrane antigens in the histopathological evaluation of laryngeal dysplasia and neoplasia. Histopathology, 1986,10:171-175.
收稿：1998-08-13修回：1998-12-28, http://www.100md.com