系统性红斑狼疮患者抗中性粒细胞胞浆抗体的检测
作者：孟庆功 袁国华
单位：100853北京,解放军总医院风湿科
关键词：
中华皮肤科杂志990417
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是针对中性粒细胞和单核细胞胞浆蛋白的自身抗体。该抗体被普遍认为是系统性血管炎的标记抗体。间接免疫荧光法(IIF)检测ANCA有3种荧光图谱,胞浆型(c-ANCA)、核周型(p-ANCA)和非典型型(a-ANCA)。为探讨ANCA与系统性红斑狼疮(SLE)的关系及其临床意义,我们采用IIF法对63例SLE患者血清进行检测。
一、材料与方法
1.对象:SLE患者63例,为本科住院患者,年龄12～62岁,平均30岁,病程1个月至25年,平均3.8年。所有患者均符合美国风湿病协会1982年的诊断标准。另选择42例正常健康人作为对照。
, 百拇医药
2.ANCA检测:从正常献血员抗凝血中分离出中性粒细胞,用细胞离心涂片机制备抗原片,1000r/min离心4min,无水乙醇4℃固定5min,吹干。标本血清用0.01mol/LPBS1∶10稀释加在抗原片上,37℃孵育30min,PBS洗3次,每次5min,吹干。加1滴羊抗人IgG荧光抗体(军事医学科学院提供,用时1∶40稀释)于抗原片上,同上37℃孵育30min,PBS洗3次,吹干。加缓冲甘油封片,荧光显微镜下观察结果。中性粒细胞胞浆出现特异性荧光者为c-ANCA,细胞核周围出现特异性荧光者为p-ANCA,不典型荧光着色者为a-ANCA,胞浆及核周围均无特异荧光染色者为阴性。每例标本均进行2次以上检测证实。
3.抗核抗体(ANA)检测:以小鼠肝切片为底物,采用IIF。抗dsDNA抗体采用放射免疫分析法检测。抗ENA抗体采用对流免疫电泳法检测。
4.统计学处理:采用χ2检验。
, 百拇医药
二、结果
1.42份正常健康人血清均为阴性,63例SLE患者血清26例ANCA阳性(41.3%),其中p-ANCA15例,a-ANCA11例。
2.在ANCA阳性组,浆膜炎及多系统受累的SLE患者明显高于阴性组,而肝损害、肺部病变、皮损及心电图异常在两组之间没有差异(见表1)。抗dsDNA抗体阳性及中度以上贫血(血红蛋白<90g/L)的SLE患者在ANCA阳性组明显高于阴性组(见表2)。
表1 ANCA与SLE临床表现的关系[例数(%)]
临床表现
ANCA阳性(26例)
ANCA阴性(37例)
χ2值
, 百拇医药
P值
蝶形红斑
13(50.0)
16(43.2)
0.281
>0.05
盘状红斑及紫癜
19(73.1)
25(67.6)
0.220
>0.05
口腔溃疡
, 百拇医药 11(42.3)
17(45.9)
0.082
>0.05
腹水
4(15.4)
5(13.5)
0.044
>0.05
浆膜炎
13(50.0)
6(16.2)
8.274
, 百拇医药
<0.01
心电图异常
6(23.1)
14(37.8)
1.534
>0.05
肺部病变
4(15.4)
5(13.5)
0.044
>0.05
肝脏损害
6(23.1)
, 百拇医药
3(8.1)
2.794
>0.05
多系统受累
14(53.8)
9(24.3)
5.741
<0.05
表2 ANCA与SLE其它实验室检查的关系[例数(%)]
实验室检查
ANCA阳性(26例)
ANCA阴性(37例)
, 百拇医药
χ2值
P值
24h蛋白尿>0.15g/L
22(84.6)
30(81.1)
0.132
>0.05
血小板<100×109/L
5(19.2)
8(21.6)
0.053
>0.05
, http://www.100md.com
白细胞<4.0×109/L
10(38.5)
15(40.5)
0.028
>0.05
血红蛋白<110g/L
21(80.8)
22(59.5)
3.200
>0.05
<90g/L
12(46.2)
, 百拇医药
8(21.6)
4.241
<0.05
血沉>20mm/lh
22(84.6)
31(83.8)
0.008
>0.05
ANA阳性
26(100)
33(89.2)
3.000
, http://www.100md.com
>0.05
坑ds-DNA抗体阳性
10/10
8/17(47.1)
7.941
<0.01
抗Sm/抗阳性
5(19.2)
11(29.7)
0.888
>0.05
抗SSA/抗SSB阳性
, 百拇医药
10(38.5)
20(54.1)
1.488
>0.05
三、讨论
deBandt等[1]在11例SLE患者血清中检测出1例p-ANCA,4例a-ANCA。Lawton和Lee[2]在46例SLE患者中检测出14例p-ANCA。而我们在63例SLE患者中发现15例p-ANCA,11例a-ANCA。在SLE患者血清中未见有c-ANCA的报道。这些不同的荧光图型是由多种抗原成分所致。c-ANCA的主要抗原成分为蛋白酶3(PR3),p-ANCA的主要抗原成分为髓过氧化物酶(MPO),a-ANCA的抗原成分目前尚不清楚。Afelera等[3]的研究发现,抗中性粒细胞胞浆抗原和核抗原的免疫应答不同,本文结果也未发现ANA与ANCA有相关性。
, http://www.100md.com
研究认为,ANCA能刺激活性氧离子(ROS)的释放,引起组织损伤[4]。对比ANCA阳性和阴性SLE患者的临床资料,在ANCA阳性患者中浆膜炎发生率为50%,而在ANCA阴性患者中仅为16.2%,二者差异有显著性(P<0.01)。在ANCA阳性组,多系统受累(53.8%)及中度以上贫血者(46.2%)均明显 高于ANCA阴性组(P<0.05)，提示ANCA与SLE的病情活动有关。Egner等[5]也观察到ANCA在SLE发 病或病情复发时升高。有人发现,活动性狼疮肾炎患者血清中ANCA阳性率明显高于非活动性狼疮肾炎患者。而血清抗dsDNA抗体在活动性狼疮肾炎患者血清中也普遍升高。本文结果显示,在ANCA阳性组抗dsDNA抗体阳性率明显高于ANCA阴性组(P<0.01)，推测ANCA可能与活动性狼疮肾炎有关。
参考文献
1 de Bandt M,Meyer O,Haim T,et al. Antineutrophil cytoplasmic antibodies in rheumatoid arthritis patients.Br J Rheumatol,1996,35:38-43.
, 百拇医药
2 Lawton JWM,Lee SS. Antineutrophil cytoplasmic antibody (ANCA) in systemic lupus erythematosus (SLE).Am J Kidney Dis,1991,2:200.
3 Afelera A,Sebastiani GD,Galeazzi M, et al.Antineutrophil cytoplasmic antibodies in synovial fluid and in serum of patients with rheumatoid arthritis and other types of synovitis.Rheumatol,1996,23:10-15.
4 Ewert BH,Jennette JC,Falk RJ. The pathogenic role of antineutrophil cytoplasmic autoantibodies.Am J Kidney Dis,1991,2:188-195.
5 Egner W, Chapel HM. Titration of antibodies against neutrophil cytoplasmic antigens is useful in monitoring disease activity in systemic vasculitides.Clin Exp Immunol,1990,82:244.
(收稿：1998-08-03修回：1998-12-21), 百拇医药
单位：100853北京,解放军总医院风湿科
关键词：
中华皮肤科杂志990417
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是针对中性粒细胞和单核细胞胞浆蛋白的自身抗体。该抗体被普遍认为是系统性血管炎的标记抗体。间接免疫荧光法(IIF)检测ANCA有3种荧光图谱,胞浆型(c-ANCA)、核周型(p-ANCA)和非典型型(a-ANCA)。为探讨ANCA与系统性红斑狼疮(SLE)的关系及其临床意义,我们采用IIF法对63例SLE患者血清进行检测。
一、材料与方法
1.对象:SLE患者63例,为本科住院患者,年龄12～62岁,平均30岁,病程1个月至25年,平均3.8年。所有患者均符合美国风湿病协会1982年的诊断标准。另选择42例正常健康人作为对照。
, 百拇医药
2.ANCA检测:从正常献血员抗凝血中分离出中性粒细胞,用细胞离心涂片机制备抗原片,1000r/min离心4min,无水乙醇4℃固定5min,吹干。标本血清用0.01mol/LPBS1∶10稀释加在抗原片上,37℃孵育30min,PBS洗3次,每次5min,吹干。加1滴羊抗人IgG荧光抗体(军事医学科学院提供,用时1∶40稀释)于抗原片上,同上37℃孵育30min,PBS洗3次,吹干。加缓冲甘油封片,荧光显微镜下观察结果。中性粒细胞胞浆出现特异性荧光者为c-ANCA,细胞核周围出现特异性荧光者为p-ANCA,不典型荧光着色者为a-ANCA,胞浆及核周围均无特异荧光染色者为阴性。每例标本均进行2次以上检测证实。
3.抗核抗体(ANA)检测:以小鼠肝切片为底物,采用IIF。抗dsDNA抗体采用放射免疫分析法检测。抗ENA抗体采用对流免疫电泳法检测。
4.统计学处理:采用χ2检验。
, 百拇医药
二、结果
1.42份正常健康人血清均为阴性,63例SLE患者血清26例ANCA阳性(41.3%),其中p-ANCA15例,a-ANCA11例。
2.在ANCA阳性组,浆膜炎及多系统受累的SLE患者明显高于阴性组,而肝损害、肺部病变、皮损及心电图异常在两组之间没有差异(见表1)。抗dsDNA抗体阳性及中度以上贫血(血红蛋白<90g/L)的SLE患者在ANCA阳性组明显高于阴性组(见表2)。
表1 ANCA与SLE临床表现的关系[例数(%)]
临床表现
ANCA阳性(26例)
ANCA阴性(37例)
χ2值
, 百拇医药
P值
蝶形红斑
13(50.0)
16(43.2)
0.281
>0.05
盘状红斑及紫癜
19(73.1)
25(67.6)
0.220
>0.05
口腔溃疡
, 百拇医药 11(42.3)
17(45.9)
0.082
>0.05
腹水
4(15.4)
5(13.5)
0.044
>0.05
浆膜炎
13(50.0)
6(16.2)
8.274
, 百拇医药
<0.01
心电图异常
6(23.1)
14(37.8)
1.534
>0.05
肺部病变
4(15.4)
5(13.5)
0.044
>0.05
肝脏损害
6(23.1)
, 百拇医药
3(8.1)
2.794
>0.05
多系统受累
14(53.8)
9(24.3)
5.741
<0.05
表2 ANCA与SLE其它实验室检查的关系[例数(%)]
实验室检查
ANCA阳性(26例)
ANCA阴性(37例)
, 百拇医药
χ2值
P值
24h蛋白尿>0.15g/L
22(84.6)
30(81.1)
0.132
>0.05
血小板<100×109/L
5(19.2)
8(21.6)
0.053
>0.05
, http://www.100md.com
白细胞<4.0×109/L
10(38.5)
15(40.5)
0.028
>0.05
血红蛋白<110g/L
21(80.8)
22(59.5)
3.200
>0.05
<90g/L
12(46.2)
, 百拇医药
8(21.6)
4.241
<0.05
血沉>20mm/lh
22(84.6)
31(83.8)
0.008
>0.05
ANA阳性
26(100)
33(89.2)
3.000
, http://www.100md.com
>0.05
坑ds-DNA抗体阳性
10/10
8/17(47.1)
7.941
<0.01
抗Sm/抗阳性
5(19.2)
11(29.7)
0.888
>0.05
抗SSA/抗SSB阳性
, 百拇医药
10(38.5)
20(54.1)
1.488
>0.05
三、讨论
deBandt等[1]在11例SLE患者血清中检测出1例p-ANCA,4例a-ANCA。Lawton和Lee[2]在46例SLE患者中检测出14例p-ANCA。而我们在63例SLE患者中发现15例p-ANCA,11例a-ANCA。在SLE患者血清中未见有c-ANCA的报道。这些不同的荧光图型是由多种抗原成分所致。c-ANCA的主要抗原成分为蛋白酶3(PR3),p-ANCA的主要抗原成分为髓过氧化物酶(MPO),a-ANCA的抗原成分目前尚不清楚。Afelera等[3]的研究发现,抗中性粒细胞胞浆抗原和核抗原的免疫应答不同,本文结果也未发现ANA与ANCA有相关性。
, http://www.100md.com
研究认为,ANCA能刺激活性氧离子(ROS)的释放,引起组织损伤[4]。对比ANCA阳性和阴性SLE患者的临床资料,在ANCA阳性患者中浆膜炎发生率为50%,而在ANCA阴性患者中仅为16.2%,二者差异有显著性(P<0.01)。在ANCA阳性组,多系统受累(53.8%)及中度以上贫血者(46.2%)均明显 高于ANCA阴性组(P<0.05)，提示ANCA与SLE的病情活动有关。Egner等[5]也观察到ANCA在SLE发 病或病情复发时升高。有人发现,活动性狼疮肾炎患者血清中ANCA阳性率明显高于非活动性狼疮肾炎患者。而血清抗dsDNA抗体在活动性狼疮肾炎患者血清中也普遍升高。本文结果显示,在ANCA阳性组抗dsDNA抗体阳性率明显高于ANCA阴性组(P<0.01)，推测ANCA可能与活动性狼疮肾炎有关。
参考文献
1 de Bandt M,Meyer O,Haim T,et al. Antineutrophil cytoplasmic antibodies in rheumatoid arthritis patients.Br J Rheumatol,1996,35:38-43.
, 百拇医药
2 Lawton JWM,Lee SS. Antineutrophil cytoplasmic antibody (ANCA) in systemic lupus erythematosus (SLE).Am J Kidney Dis,1991,2:200.
3 Afelera A,Sebastiani GD,Galeazzi M, et al.Antineutrophil cytoplasmic antibodies in synovial fluid and in serum of patients with rheumatoid arthritis and other types of synovitis.Rheumatol,1996,23:10-15.
4 Ewert BH,Jennette JC,Falk RJ. The pathogenic role of antineutrophil cytoplasmic autoantibodies.Am J Kidney Dis,1991,2:188-195.
5 Egner W, Chapel HM. Titration of antibodies against neutrophil cytoplasmic antigens is useful in monitoring disease activity in systemic vasculitides.Clin Exp Immunol,1990,82:244.
(收稿：1998-08-03修回：1998-12-21), 百拇医药