乳房Paget病肿瘤组织中Bcl－2、Bax、雌激素和孕激素受体表达的研究
作者：方红 孙国均 沈奇范
单位：方红 沈奇范(310003 杭州市，浙江大学医学院附属第一医院皮肤科)；孙国均(附属第二医院皮肤科)
关键词：
中华皮肤科杂志000226
乳房Paget病(MPD)是一种特殊类型的皮肤肿瘤，患者往往合并下方乳腺癌[1]。近年来，乳腺肿瘤组织中癌基因、抑癌基因以及凋亡相关基因研究报道日益增多，揭示乳腺癌的发生发展涉及到上述基因之间的相互作用[2]。我们采用SP免疫组化方法，观察Bcl-2、Bax在MPD及其下方乳腺癌中的表达，并与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达情况进行比较，旨在探讨凋亡相关基因与MPD的发病关系以及MPD与下方乳腺癌之间的关系。
一、材料与方法
, 百拇医药
1.标本：MPD患者26例，均为女性，年龄30～77岁，平均诊断年龄56.5岁。左侧乳头及乳晕病变14例，右侧乳头及乳晕病变12例。正常人对照5例，取自成人躯干部,为外科整形切除多余之皮肤标本。
2.试剂：第一抗体抗Bcl-2(N-19)和抗Bax(N-20)抗体为兔抗人多克隆抗体；第一抗体抗ER和抗PR抗体为鼠抗人单克隆抗体。所有抗体均为美国SantaCruz公司产品，购自北京中山生物技术公司。
3.标本均经3.33mol/L(10%)中性福尔马林固定，石蜡包埋。连续组织切片厚4μm,分别进行HE染色及免疫组化染色。免疫组化步骤：脱蜡至水后加枸橼酸缓冲液10mmol/L(pH6.0)95℃10min，正常羊血清封闭15min，分别加入4种一抗(浓度均为1∶100)，室温孵育4h，加生物素-SP标记二抗，室温孵育30min。DAB显色，苏木素复染封片。上述各步骤间均用PBS洗涤3次，每次5min。用已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
, 百拇医药
4.结果判断标准：根据Paget细胞及乳腺癌细胞着染数目及染色深浅分别记0～3分。着染细胞数目超过肿瘤细胞数>50%3分，25%～50%2分，5%～24%1分，<5%为0分。染色深度以多数细胞的呈色反应为准：深棕色为3分，棕黄色2分，淡棕色1分，不着色0分。上述2项指标积分数分4级：强阳性(+++)5～6分，阳性(++)3～4分，弱阳性(+)2分，阴性(-)0分。5.统计学处理：采用计算机SPSS统计软件包的联列表资料χ2检验法。
二、结果
1.病理形态：所有病例均在表皮见到典型Paget细胞。5例为单纯MPD,21例系MPD合并下方乳腺癌，其中浸润性导管癌10例，单纯癌4例，导管内癌7例。高分化者16例，大多数Paget细胞核淡染居中，核浆比例小，分裂象少见，Paget细胞呈散在或小巢状分布；低分化者10例，多数Paget细胞核深染偏位，细胞呈印戒状，分裂象易见，细胞呈巢或呈腺泡或腺管状结构。
, 百拇医药
2.免疫组化染色结果：Bcl-2和Bax阳性染色以细胞浆为主，呈棕黄色颗粒着色；ER、PR阳性染色为细胞浆及细胞核棕黄色颗粒着色。26例MPD中，Bcl-2蛋白表达阳性16例，阳性率为61.5%；Bax蛋白表达阳性19例，阳性率为73.1%；ER阳性18例，阳性率69.2%；PR阳性17例，阳性率65.4%，详见表1。一些病例Paget细胞同时表达2种或2种以上蛋白，Paget细胞同时表达Bcl-2与Bax或ER或PR蛋白情况详见表2。
21例Paget病合并下方乳腺癌，其乳腺癌细胞Bcl-2、Bax、ER和PR的表达阳性率分别为81.0%、85.7%、71.4%和71.4%。
正常人皮肤基底细胞可见Bcl-2阳性表达，其上方角质形成细胞则呈阴性表达，而Bax阳性表达见于表皮上层邻近角质层及角质层。正常皮肤角质形成细胞及大小汗腺均不表达ER、PR。
表1Bcl-2、Bax、雌激素受体和孕激素受体在乳房Paget病中的表达 组 别
, http://www.100md.com
例数
Bcl-2
Bax
雌激素受
体孕激素受体
-
+
++
+++
-
+
++
+++
, 百拇医药 -
+
++
+++
-
+
++
+++
高分化组
16
3
8
5
0
, 百拇医药
5
6
4
1
3
11
1
1
4
9
2
1
低分化组
10
, 百拇医药
7
3
0
0
2
4
4
0
5
3
1
1
5
4
, 百拇医药
1
0
合 计
26
10
11
5
0
7
10
8
1
8
14
, http://www.100md.com
2
2
9
13
3
1
表2 乳房Paget病中Bcl-2分别与Bax、雌激素受体、孕激素受体同时表达(%) 组 别
例数
Bax
雌激素受体
孕激素受体
高分化组
, http://www.100md.com 16
10(62.5)
11(68.8)
10(62.5)
低分化组
10
2(20.0)
2(20.0)
2(20.0)
合 计
26
12(46.2)
13(50.0)
, 百拇医药
12(46.2)
三、讨论
本文结果与文献报道乳腺癌的表达结果相类似。乳腺癌细胞Bcl-2表达与预后好的临床及组织学指标呈正相关。而Bax的表达则与肿瘤组织学分型、分级、ER、PR等无关[3，4]。研究显示，乳腺癌细胞同时表达Bcl-2与Bax和细胞的分化程度呈正相关[4]。二者同时表达阳性提示乳腺癌细胞凋亡调控机制障碍轻，增殖力和侵袭力弱，细胞分化好，因而患者预后好。
合并乳腺癌的21例MPD中，其下方乳腺癌细胞的Bcl-2表达大多与表皮Paget细胞的表达相对应，12例Paget细胞与乳腺癌细胞均为阳性表达，3例均呈阴性表达，符合率达71.4%。乳腺癌细胞的ER、PR表达则与Paget细胞的表达呈高度一致。二者均表达ER、PR的有14例，均不表达的有6例，符合率达95.2%，仅1例Paget细胞的ER、PR表达阴性，而乳腺癌细胞ER表达阳性，PR表达弱阳性。正常皮肤组织中，不论角质形成细胞及大小汗腺均无ER、PR表达。上述结果强烈提示Paget细胞与乳腺癌细胞具有共同的生物学特性。另外，我们在一些组织切片中也发现，乳腺癌细胞与表皮Paget细胞呈连续移行状态。因此，我们认为，大部分MPD表皮Paget细胞源自于乳腺癌细胞，小部分不合并乳腺癌的MPD或Paget细胞与乳腺癌细胞凋亡相关基因表达不一致的MPD,其Paget细胞可能来源于表皮原始干细胞，有待进一步研究。
, http://www.100md.com
文献报道[5，6]，乳腺癌中Bcl-2表达与ER、PR表达呈正相关，提示乳腺癌中Bcl-2受雌激素调节。本文的结果表明Paget细胞的Bcl-2表达与ER或PR表达亦呈一定的相关性，高分化组同时表达阳性率高于低分化组，我们认为MPD可能亦属于激素依赖性肿瘤，对于ER或PR表达阳性的患者，如同乳腺癌患者一样，使用抗雌激素辅助治疗或内分泌治疗是否会有良好的前景，值得进一步探讨。
参 考 文 献
1.Vielh P,Validire P,Kheirallah S. Paget′ disease of the nipple without clinically and radiologically detectable breast tumor. Pathol Res Pract, 1993,189:150- 155.
2.Gee JMW, Robertson JFR, Ellis IO， et al. Immunocytochemical localization of Bcl- 2 protein in human breast cancers and its relationship to a series of prognostic markers and response to endocarine therapy. Int J Cancer,1994,59:619- 628.
, 百拇医药
3.Berardo MD, Elledge RM, Moor CD,et al. bcl- 2 and apoptosis in lymph node positive breast carcinoma. Cancer, 1998,82:1296- 1302.
4.陈丽荣，张苏展，王海军，等.凋亡相关基因在乳腺癌的表达及其预后的关系.中国癌症杂志，1998， 8:160- 162.
5.Bhargava V, Kell DL, van de Rijn M， et al. Bcl- 2 immunoreactivity in breast carcinoma correlates with hormone receptor positivity. Am J Pathol, 1994,145:535- 540.
6.Gasparini G, Barbareschi M, Doglioni C, et al. Expression of bcl- 2 protein predicts efficacy of adjuvant treatments in operable node positive breast cancer. Clin Cancer Res,1995, 1:189- 198.
收稿日期：1999-05-17, 百拇医药
单位：方红 沈奇范(310003 杭州市，浙江大学医学院附属第一医院皮肤科)；孙国均(附属第二医院皮肤科)
关键词：
中华皮肤科杂志000226
乳房Paget病(MPD)是一种特殊类型的皮肤肿瘤，患者往往合并下方乳腺癌[1]。近年来，乳腺肿瘤组织中癌基因、抑癌基因以及凋亡相关基因研究报道日益增多，揭示乳腺癌的发生发展涉及到上述基因之间的相互作用[2]。我们采用SP免疫组化方法，观察Bcl-2、Bax在MPD及其下方乳腺癌中的表达，并与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达情况进行比较，旨在探讨凋亡相关基因与MPD的发病关系以及MPD与下方乳腺癌之间的关系。
一、材料与方法
, 百拇医药
1.标本：MPD患者26例，均为女性，年龄30～77岁，平均诊断年龄56.5岁。左侧乳头及乳晕病变14例，右侧乳头及乳晕病变12例。正常人对照5例，取自成人躯干部,为外科整形切除多余之皮肤标本。
2.试剂：第一抗体抗Bcl-2(N-19)和抗Bax(N-20)抗体为兔抗人多克隆抗体；第一抗体抗ER和抗PR抗体为鼠抗人单克隆抗体。所有抗体均为美国SantaCruz公司产品，购自北京中山生物技术公司。
3.标本均经3.33mol/L(10%)中性福尔马林固定，石蜡包埋。连续组织切片厚4μm,分别进行HE染色及免疫组化染色。免疫组化步骤：脱蜡至水后加枸橼酸缓冲液10mmol/L(pH6.0)95℃10min，正常羊血清封闭15min，分别加入4种一抗(浓度均为1∶100)，室温孵育4h，加生物素-SP标记二抗，室温孵育30min。DAB显色，苏木素复染封片。上述各步骤间均用PBS洗涤3次，每次5min。用已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
, 百拇医药
4.结果判断标准：根据Paget细胞及乳腺癌细胞着染数目及染色深浅分别记0～3分。着染细胞数目超过肿瘤细胞数>50%3分，25%～50%2分，5%～24%1分，<5%为0分。染色深度以多数细胞的呈色反应为准：深棕色为3分，棕黄色2分，淡棕色1分，不着色0分。上述2项指标积分数分4级：强阳性(+++)5～6分，阳性(++)3～4分，弱阳性(+)2分，阴性(-)0分。5.统计学处理：采用计算机SPSS统计软件包的联列表资料χ2检验法。
二、结果
1.病理形态：所有病例均在表皮见到典型Paget细胞。5例为单纯MPD,21例系MPD合并下方乳腺癌，其中浸润性导管癌10例，单纯癌4例，导管内癌7例。高分化者16例，大多数Paget细胞核淡染居中，核浆比例小，分裂象少见，Paget细胞呈散在或小巢状分布；低分化者10例，多数Paget细胞核深染偏位，细胞呈印戒状，分裂象易见，细胞呈巢或呈腺泡或腺管状结构。
, 百拇医药
2.免疫组化染色结果：Bcl-2和Bax阳性染色以细胞浆为主，呈棕黄色颗粒着色；ER、PR阳性染色为细胞浆及细胞核棕黄色颗粒着色。26例MPD中，Bcl-2蛋白表达阳性16例，阳性率为61.5%；Bax蛋白表达阳性19例，阳性率为73.1%；ER阳性18例，阳性率69.2%；PR阳性17例，阳性率65.4%，详见表1。一些病例Paget细胞同时表达2种或2种以上蛋白，Paget细胞同时表达Bcl-2与Bax或ER或PR蛋白情况详见表2。
21例Paget病合并下方乳腺癌，其乳腺癌细胞Bcl-2、Bax、ER和PR的表达阳性率分别为81.0%、85.7%、71.4%和71.4%。
正常人皮肤基底细胞可见Bcl-2阳性表达，其上方角质形成细胞则呈阴性表达，而Bax阳性表达见于表皮上层邻近角质层及角质层。正常皮肤角质形成细胞及大小汗腺均不表达ER、PR。
表1Bcl-2、Bax、雌激素受体和孕激素受体在乳房Paget病中的表达 组 别
, http://www.100md.com
例数
Bcl-2
Bax
雌激素受
体孕激素受体
-
+
++
+++
-
+
++
+++
, 百拇医药 -
+
++
+++
-
+
++
+++
高分化组
16
3
8
5
0
, 百拇医药
5
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低分化组
10
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7
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合 计
26
10
11
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2
2
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3
1
表2 乳房Paget病中Bcl-2分别与Bax、雌激素受体、孕激素受体同时表达(%) 组 别
例数
Bax
雌激素受体
孕激素受体
高分化组
, http://www.100md.com 16
10(62.5)
11(68.8)
10(62.5)
低分化组
10
2(20.0)
2(20.0)
2(20.0)
合 计
26
12(46.2)
13(50.0)
, 百拇医药
12(46.2)
三、讨论
本文结果与文献报道乳腺癌的表达结果相类似。乳腺癌细胞Bcl-2表达与预后好的临床及组织学指标呈正相关。而Bax的表达则与肿瘤组织学分型、分级、ER、PR等无关[3，4]。研究显示，乳腺癌细胞同时表达Bcl-2与Bax和细胞的分化程度呈正相关[4]。二者同时表达阳性提示乳腺癌细胞凋亡调控机制障碍轻，增殖力和侵袭力弱，细胞分化好，因而患者预后好。
合并乳腺癌的21例MPD中，其下方乳腺癌细胞的Bcl-2表达大多与表皮Paget细胞的表达相对应，12例Paget细胞与乳腺癌细胞均为阳性表达，3例均呈阴性表达，符合率达71.4%。乳腺癌细胞的ER、PR表达则与Paget细胞的表达呈高度一致。二者均表达ER、PR的有14例，均不表达的有6例，符合率达95.2%，仅1例Paget细胞的ER、PR表达阴性，而乳腺癌细胞ER表达阳性，PR表达弱阳性。正常皮肤组织中，不论角质形成细胞及大小汗腺均无ER、PR表达。上述结果强烈提示Paget细胞与乳腺癌细胞具有共同的生物学特性。另外，我们在一些组织切片中也发现，乳腺癌细胞与表皮Paget细胞呈连续移行状态。因此，我们认为，大部分MPD表皮Paget细胞源自于乳腺癌细胞，小部分不合并乳腺癌的MPD或Paget细胞与乳腺癌细胞凋亡相关基因表达不一致的MPD,其Paget细胞可能来源于表皮原始干细胞，有待进一步研究。
, http://www.100md.com
文献报道[5，6]，乳腺癌中Bcl-2表达与ER、PR表达呈正相关，提示乳腺癌中Bcl-2受雌激素调节。本文的结果表明Paget细胞的Bcl-2表达与ER或PR表达亦呈一定的相关性，高分化组同时表达阳性率高于低分化组，我们认为MPD可能亦属于激素依赖性肿瘤，对于ER或PR表达阳性的患者，如同乳腺癌患者一样，使用抗雌激素辅助治疗或内分泌治疗是否会有良好的前景，值得进一步探讨。
参 考 文 献
1.Vielh P,Validire P,Kheirallah S. Paget′ disease of the nipple without clinically and radiologically detectable breast tumor. Pathol Res Pract, 1993,189:150- 155.
2.Gee JMW, Robertson JFR, Ellis IO， et al. Immunocytochemical localization of Bcl- 2 protein in human breast cancers and its relationship to a series of prognostic markers and response to endocarine therapy. Int J Cancer,1994,59:619- 628.
, 百拇医药
3.Berardo MD, Elledge RM, Moor CD,et al. bcl- 2 and apoptosis in lymph node positive breast carcinoma. Cancer, 1998,82:1296- 1302.
4.陈丽荣，张苏展，王海军，等.凋亡相关基因在乳腺癌的表达及其预后的关系.中国癌症杂志，1998， 8:160- 162.
5.Bhargava V, Kell DL, van de Rijn M， et al. Bcl- 2 immunoreactivity in breast carcinoma correlates with hormone receptor positivity. Am J Pathol, 1994,145:535- 540.
6.Gasparini G, Barbareschi M, Doglioni C, et al. Expression of bcl- 2 protein predicts efficacy of adjuvant treatments in operable node positive breast cancer. Clin Cancer Res,1995, 1:189- 198.
收稿日期：1999-05-17, 百拇医药