银屑病患者抗角蛋白自身抗体的初步研究
作者：陆毅 冯信忠
单位：陆毅 冯信忠(200025 上海第二医科大学附属瑞金医院皮肤科)
关键词：
中华皮肤科杂志000220
银屑病患者表皮中角蛋白有异常表达，特别是角蛋白K16,它常在银屑病活动的早期即在皮损边缘处的基底层上表达[1，2]。为了研究银屑病患者血清中是否存在针对角蛋白K16的自身抗体，以及该抗体与银屑病病情变化的确切关系，我们用间接酶联免疫测定法(ELISA)和免疫印迹法(IBT)分别检测银屑病患者血清中的抗角蛋白自身抗体(AKautoAB)和抗角蛋白K16自身抗体(AK16autoAB)的滴度。
一、病例与方法
(一)临床病例：寻常型银屑病患者53例，其中进行期30例，静止期23例；女19例，男34例；年龄20～72岁(43.2±14.1岁)，病期2周至31年。正常人对照组为健康体检者20例，其中男12例，女8例，年龄35～52岁(42.9±5.5岁)。银屑病患者的皮损面积和严重程度按PASI评分为4.8～34.8分(13.75±7.18)。
, http://www.100md.com
(二)血清标本：对照组和患者组每例采血3mL，待凝固离心后取血清分装，置-20℃保存备用。
(三)主要试剂：辣根过氧化酶标记兔抗人IgG购自Dako公司，辣根过氧化酶标记羊抗鼠IgG和抗角蛋白单抗Ks8.12均购自Sigma公司。
(四)实验方法：收集正常人的足部胼胝来提取其中的角蛋白[3]。抽提得到的角蛋白液(抗原液)经SDS-PAGE电泳观察角蛋白抽提的结果,将SDS-PAGE凝胶上的角蛋白抗原组分通过电泳转移至硝酸纤维薄膜上。先加血清标本，再加兔抗人IgG抗体(以单抗Ks8.12与K16结合的条带作阳性对照),进行固相酶联免疫检测。显色后的抗体含量经VIDAS图象分析仪进行灰度读数，用密度积分值来分别比较AKautoAB和AK16autoAB的含量。另外，再分别用ELISA法测定AKautoAB和双抗夹心ELISA法测定AK16autoAB。
二、结果
, 百拇医药
(一)AKautoAb的检测结果：正常人与银屑病患者血清中均存在AKautoAB。2种方法(IBT和ELISA)检测结果显示：正常人血清中的AKautoAB水平明显高于银屑病患者组(P值均<0.01)；静止期患者AKautoAb抗体水平高于进行期患者(仅ELISA结果有统计学意义)(见表1)。
表1 抗角蛋白自身抗体及抗角蛋白K16自身抗体检测结果 组别
IBT
ELESA
例数
密度积分值(
±s)
t值
P值
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例数
密度积分值(±s)
t值
P值
抗角蛋白自身抗体
正常人对照组
9
2.662±278.21
20
0.37±0.10
4.45
, 百拇医药 <0.01
银屑病患者组
22
2319.75±290.24
3.02
<0.01
53
0.23±0.13
进行期
13
2284.91±324.89
30
0.19±0.12
, http://www.100md.com
2.47
<0.05
静止期
9
2370.07±240.77
0.67
>0.05
23
0.28±0.14
抗角蛋白K16自身抗体
正常人对照组
9
206.24±55.69
, http://www.100md.com
2.91
2.37
<0.01
<0.05
20
0.59±0.10
2.94
3.11
<0.01
<0.01
银屑病进行期
13
303.48±88.33
, http://www.100md.com
30
0.67±0.12
银屑病静止期
9
228.16±41.93
23
0.57±0.10
(二)AK16autoAB的检测结果:IBT与ELISA2种方法均显示银屑病进行期患者组AK16autoAB水平不仅明显高于静止期患者,而且也高于正常人对照组，并均具有统计学差异(见表1)。
(三)银屑病患者AKautoAB水平(ELISA检测结果)与PASI评分之间无显著性相关性，rs=-0.14，P>0.05。AK16autoAB水平与PASI评分之间呈显著正相关，rs=0.61，P<0.05。
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三、讨论
几乎所有正常人的血清中都含有AKautoAB，其中尤以IgG型为多[4]。AKautoAB能与不同的角蛋白抗原反应，特别是破坏、凋亡的角质形成细胞释放的角蛋白中间丝。AKautoAB能促进单核细胞、多核白细胞对角蛋白中间丝集聚物的吞噬，还能包绕结合于组织中的角蛋白小体(KB)表面而有利于KB的清除，防止免疫系统对自身角蛋白发生进一步的炎症反应[5]。
我们用ELISA方法来检测正常人、银屑病患者血清中IgG型AKautoAB的水平，结果发现：银屑病患者进行期和静止期血清中的AKautoAB较正常人有明显降低，银屑病患者AKautoAB水平的下降可能与银屑病患者表皮的病理变化有关。
我们通过ELISA的双抗夹心法来检测正常人和银屑病患者血清中的AK16autoAB的水平，发现银屑病进行期患者AK16autoAB的水平明显高于静止期及正常对照组。这可能与银屑病患者表皮中角蛋白K16的异常增高和K16本身具有抗原性有关。我们将银屑病患者PASI的评分分别与AKautoAB水平和AK16autoAB水平作相关性分析的结果表明，PASI评分与AKautoAB水平无相关关系，而PASI评分与AK16autoAB水平呈正相关，即AK16autoAB与银屑病患者皮损的面积和严重程度成正比，故我们认为AK16autoAB可以用来作为评估银屑病病情的血清学指标之一。
, 百拇医药
参 考 文 献
1.Thewes M， Stadler R， Korge B， et al. Normal psoriatic epidermis expression of hyper proliferation associated keratins. Arch Dermatol Res, 1991, 283: 465- 471.
2.Castelijns FA, Gerritsen MJ, van Vlijmen Willems IM, et al. The epidermal phenotype during initiation of the psoriatic lesion in the symptomless margin of relapsing psoriasis. J Am Acad Dermatol, 1999,40: 901- 909.
3.Aoki S， Yaoita H， Kitajima Y. An elevated level of autoantibodies against 48 to 50 kD keratins in the serum of patients with psoriasis. J Invest Dermatol, 1989,92:179- 183.
4.刘玉峰，车乃增，刘彦仿,等.人血清抗角蛋白自身抗体的免疫组化研究.第四军医大学学报，1989,9:311-313.
5.Hintner H， Romani N， Stanzl U, et al. Phagocytosis of keratin filament aggregates following opsonization with IgG Anti keratin filament autoantibodies. J Invest Dermatol, 1987,88:176- 182.
收稿日期：1999-07-26, http://www.100md.com
单位：陆毅 冯信忠(200025 上海第二医科大学附属瑞金医院皮肤科)
关键词：
中华皮肤科杂志000220
银屑病患者表皮中角蛋白有异常表达，特别是角蛋白K16,它常在银屑病活动的早期即在皮损边缘处的基底层上表达[1，2]。为了研究银屑病患者血清中是否存在针对角蛋白K16的自身抗体，以及该抗体与银屑病病情变化的确切关系，我们用间接酶联免疫测定法(ELISA)和免疫印迹法(IBT)分别检测银屑病患者血清中的抗角蛋白自身抗体(AKautoAB)和抗角蛋白K16自身抗体(AK16autoAB)的滴度。
一、病例与方法
(一)临床病例：寻常型银屑病患者53例，其中进行期30例，静止期23例；女19例，男34例；年龄20～72岁(43.2±14.1岁)，病期2周至31年。正常人对照组为健康体检者20例，其中男12例，女8例，年龄35～52岁(42.9±5.5岁)。银屑病患者的皮损面积和严重程度按PASI评分为4.8～34.8分(13.75±7.18)。
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(二)血清标本：对照组和患者组每例采血3mL，待凝固离心后取血清分装，置-20℃保存备用。
(三)主要试剂：辣根过氧化酶标记兔抗人IgG购自Dako公司，辣根过氧化酶标记羊抗鼠IgG和抗角蛋白单抗Ks8.12均购自Sigma公司。
(四)实验方法：收集正常人的足部胼胝来提取其中的角蛋白[3]。抽提得到的角蛋白液(抗原液)经SDS-PAGE电泳观察角蛋白抽提的结果,将SDS-PAGE凝胶上的角蛋白抗原组分通过电泳转移至硝酸纤维薄膜上。先加血清标本，再加兔抗人IgG抗体(以单抗Ks8.12与K16结合的条带作阳性对照),进行固相酶联免疫检测。显色后的抗体含量经VIDAS图象分析仪进行灰度读数，用密度积分值来分别比较AKautoAB和AK16autoAB的含量。另外，再分别用ELISA法测定AKautoAB和双抗夹心ELISA法测定AK16autoAB。
二、结果
, 百拇医药
(一)AKautoAb的检测结果：正常人与银屑病患者血清中均存在AKautoAB。2种方法(IBT和ELISA)检测结果显示：正常人血清中的AKautoAB水平明显高于银屑病患者组(P值均<0.01)；静止期患者AKautoAb抗体水平高于进行期患者(仅ELISA结果有统计学意义)(见表1)。
表1 抗角蛋白自身抗体及抗角蛋白K16自身抗体检测结果 组别
IBT
ELESA
例数
密度积分值(
±s)t值
P值
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例数
密度积分值(
±s)t值
P值
抗角蛋白自身抗体
正常人对照组
9
2.662±278.21
20
0.37±0.10
4.45
, 百拇医药 <0.01
银屑病患者组
22
2319.75±290.24
3.02
<0.01
53
0.23±0.13
进行期
13
2284.91±324.89
30
0.19±0.12
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2.47
<0.05
静止期
9
2370.07±240.77
0.67
>0.05
23
0.28±0.14
抗角蛋白K16自身抗体
正常人对照组
9
206.24±55.69
, http://www.100md.com
2.91
2.37
<0.01
<0.05
20
0.59±0.10
2.94
3.11
<0.01
<0.01
银屑病进行期
13
303.48±88.33
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30
0.67±0.12
银屑病静止期
9
228.16±41.93
23
0.57±0.10
(二)AK16autoAB的检测结果:IBT与ELISA2种方法均显示银屑病进行期患者组AK16autoAB水平不仅明显高于静止期患者,而且也高于正常人对照组，并均具有统计学差异(见表1)。
(三)银屑病患者AKautoAB水平(ELISA检测结果)与PASI评分之间无显著性相关性，rs=-0.14，P>0.05。AK16autoAB水平与PASI评分之间呈显著正相关，rs=0.61，P<0.05。
, http://www.100md.com
三、讨论
几乎所有正常人的血清中都含有AKautoAB，其中尤以IgG型为多[4]。AKautoAB能与不同的角蛋白抗原反应，特别是破坏、凋亡的角质形成细胞释放的角蛋白中间丝。AKautoAB能促进单核细胞、多核白细胞对角蛋白中间丝集聚物的吞噬，还能包绕结合于组织中的角蛋白小体(KB)表面而有利于KB的清除，防止免疫系统对自身角蛋白发生进一步的炎症反应[5]。
我们用ELISA方法来检测正常人、银屑病患者血清中IgG型AKautoAB的水平，结果发现：银屑病患者进行期和静止期血清中的AKautoAB较正常人有明显降低，银屑病患者AKautoAB水平的下降可能与银屑病患者表皮的病理变化有关。
我们通过ELISA的双抗夹心法来检测正常人和银屑病患者血清中的AK16autoAB的水平，发现银屑病进行期患者AK16autoAB的水平明显高于静止期及正常对照组。这可能与银屑病患者表皮中角蛋白K16的异常增高和K16本身具有抗原性有关。我们将银屑病患者PASI的评分分别与AKautoAB水平和AK16autoAB水平作相关性分析的结果表明，PASI评分与AKautoAB水平无相关关系，而PASI评分与AK16autoAB水平呈正相关，即AK16autoAB与银屑病患者皮损的面积和严重程度成正比，故我们认为AK16autoAB可以用来作为评估银屑病病情的血清学指标之一。
, 百拇医药
参 考 文 献
1.Thewes M， Stadler R， Korge B， et al. Normal psoriatic epidermis expression of hyper proliferation associated keratins. Arch Dermatol Res, 1991, 283: 465- 471.
2.Castelijns FA, Gerritsen MJ, van Vlijmen Willems IM, et al. The epidermal phenotype during initiation of the psoriatic lesion in the symptomless margin of relapsing psoriasis. J Am Acad Dermatol, 1999,40: 901- 909.
3.Aoki S， Yaoita H， Kitajima Y. An elevated level of autoantibodies against 48 to 50 kD keratins in the serum of patients with psoriasis. J Invest Dermatol, 1989,92:179- 183.
4.刘玉峰，车乃增，刘彦仿,等.人血清抗角蛋白自身抗体的免疫组化研究.第四军医大学学报，1989,9:311-313.
5.Hintner H， Romani N， Stanzl U, et al. Phagocytosis of keratin filament aggregates following opsonization with IgG Anti keratin filament autoantibodies. J Invest Dermatol, 1987,88:176- 182.
收稿日期：1999-07-26, http://www.100md.com