血小板衍生生长因子受体在银屑病皮损的表达
作者：黄熙 马圣清 涂平
单位：黄熙(541001 广西桂林医学院附属医院皮肤科)；马圣清 涂平(北京医科大学第一医院皮肤科)
关键词：
中华皮肤科杂志000219
近年研究发现培养的银屑病皮损成纤维细胞对血小板衍生生长因子(plateletderivedgrowthfactor,PDGF)促有丝分裂活性和趋化活性的敏感性增高[1]。我们采用免疫组化研究PDGF受体-α和β在银屑病皮损、非皮损和健康人正常皮肤中的表达。
一、材料和方法
研究对象：静止期寻常型银屑病患者12例，男9例，女3例；年龄25～76岁；病程1.5～20年。患者取材前3个月内未使用皮质类固醇、免疫抑制剂、PUVA和其它治疗银屑病的药物。标本取自皮损和皮损周围正常皮肤。对照组6例，为外科成形手术正常人皮肤。
, 百拇医药
主要试剂：过氧化物酶标记的链霉亲和素免疫组化染色试剂盒(简称SPtm试剂盒，批号SP9001)；兔抗PDGF受体-α、β多克隆抗体，工作效价分别为1∶150、1∶200。以上均为Eymed公司产品。
研究方法：采用HRP标记的链霉亲和素-生物素法：载玻片经APES处理，标本恒冷冰冻切片，厚5μm，丙酮固定；0.6%H2O2和体积分数为10%羊血清室温下孵育30min；Ⅰ抗4℃孵育12h；IgG/Bio(1∶200，用质量浓度为10g/L的BSAPBS稀释)37℃孵育30min；S-P/HRP(1∶200)37℃孵育30min；以上每一步骤前均以0.1mol/LPBS充分浸洗标本，最后DAB显色。用0.1mol/LPBS代替Ⅰ抗作为空白对照。
分析方法：PDGF受体-α和β阳性细胞特征为细胞膜和细胞浆中可见棕黄色颗粒。参照Garcia等[2]的判断标准，确定每例标本中表达PDGF受体-α或β蛋白的成纤维细胞，根据成纤维细胞染色深浅进行分级：浅棕黄色为1分，深棕黄色为2分。根据阳性成纤维细胞数进行分级：每张切片在真皮浅层随机选择10个高倍镜视野(×300)，计数每个高倍视野中阳性成纤维细胞数，取其平均值作为每张切片的阳性成纤维细胞数。平均值:<10为1分，10～20为2分，>20为3分。以上2项记分相加：2～3分为(+)，3～4分为(++)，>4分为(+++)。≥(++)以上为中等程度以上表达。两样本间采用精确检验法检验。
, 百拇医药
二、结果
1.PDGF受体-α和β在所有标本表皮角质形成细胞中均无阳性染色。在12例皮损区成纤维细胞和血管内皮细胞均呈强阳性染色，阳性成纤维细胞数较多，尤以真皮浅层明显。在非皮损区成纤维细胞和血管内皮细胞亦呈阳性染色，但阳性成纤维细胞数较皮损区少，染色强度也较皮损区弱。在6例正常皮肤中仅极少数成纤维细胞呈微弱阳性染色，血管内皮细胞也呈微弱阳性染色。
2.PDGF受体-α在皮损区成纤维细胞中以中等程度以上表达为主，与非皮损区相比差异有显著性(P<0.05)，与正常皮肤成纤维细胞相比差异有非常显著性(P<0.01)；在非皮损区成纤维细胞中表达程度明显降低，且与正常皮肤相比差异无显著性(P>0.05),详见表1。
3.PDGF受体-β在皮损区成纤维细胞中均呈中等程度以上的表达，与非皮损区和正常皮肤成纤维细胞相比差异均有非常显著性(均P<0.01)，而非皮损区成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞相比差异无显著性(P>0.05),见表1。
, 百拇医药
三、讨论
近年的研究表明银屑病皮损中成纤维细胞存在异常，并认为异常的成纤维细胞可能是银屑病发病的重要因素之一。Gu等发现培养的银屑病皮损和非皮损成纤维细胞对PDGF的促有丝分裂活性和趋化活性的敏感性增高，认为PDGF参与了银屑病的发病过程[1]。本文结果显示，银屑病皮损成纤维细胞中PDGF受体α和β的表达增高，提示银屑病皮损成纤维细胞对PDGF生物活性的敏感性增高是和成纤维细胞上的特异性受体数目增加有关。Krane等[3]曾报道银屑病皮损成纤维细胞中PDGF受体-β高表达。本研究发现的α受体高表达，一方面提示PDGF受体-α也可能参与了银屑病的发病过程，另一方面由于角质形成细胞是完整皮肤中PDGF的重要来源，它主要分泌PDGFAA和AB[4]，银屑病过度增殖的表皮有可能为局部提供更多的PDGFA蛋白。基于α亚单位与PDGF三种二聚体结合特性[5]，提示PDGFA/PDGF受体-α系统可能是银屑病表皮—真皮间相互作用中的一个重要因子.
, 百拇医药
表1 血小板衍生生长因子受体α、β在银屑病及正常人皮肤成纤维细胞中的表达 组 别
例数
表达强度
中等程度以上阳性率
PDGFα
-
+
++
+++
皮损区
12
0
, 百拇医药
2
6
4
83.3%
非皮损区
12
0
7
5
0
41.7%
正常皮肤
6
0
, 百拇医药
6
0
0
0
PDGFβ
皮损区
12
0
0
5
7
100%
非皮损区
12
, 百拇医药
0
8
4
0
33.3%
正常皮肤
6
0
6
0
0
0
注：PDGF为血小板衍生生长因子受体
, 百拇医药
中华医学会皮肤科分会基金资助
参 考 文 献
1.Gu XF, Raynaud F, Evain Brion D. Increased chemotactic and mitogenic response of psoriatic fibroblasts to platelet derived growth factor. J Invest Dermatol, 1988,91:599- 602.
2.Garcia RL, Coltrera MD, Gown AM. Analysis of proliferative grade using anti PCNA/cyclin monoclonal antibodies in fixed, embedded tissues:comparison with flow
, http://www.100md.com cytometric analysis. Am J Pathol, 1988,134:733- 739.
3.Krane JF, Murphy DP, Gottieb AB, et al. Increased dermal expression of platelet derived growth factor receptors in growth-activated skin wounds and psoriasis. J Invest Dermatol,1991,96:983- 986.
4.Eming SA, Lee J, Snow RG, et al. Genetically modified human epidermis overexpressing PDGF A directs the development of a cellular and vascular connective tissue stroma when transplanted to athymic mice implications for the use of genetically modified keratinocytes to modulate dermal regeneration.J Invest Dermatol， 1995， 105:756- 763.
5.Ross R. Peptide regulatory factors:platelet-derived growth factor. Lancet, 1989,Ⅰ (8648):1179- 1182.
收稿日期：1999-07-30, 百拇医药
单位：黄熙(541001 广西桂林医学院附属医院皮肤科)；马圣清 涂平(北京医科大学第一医院皮肤科)
关键词：
中华皮肤科杂志000219
近年研究发现培养的银屑病皮损成纤维细胞对血小板衍生生长因子(plateletderivedgrowthfactor,PDGF)促有丝分裂活性和趋化活性的敏感性增高[1]。我们采用免疫组化研究PDGF受体-α和β在银屑病皮损、非皮损和健康人正常皮肤中的表达。
一、材料和方法
研究对象：静止期寻常型银屑病患者12例，男9例，女3例；年龄25～76岁；病程1.5～20年。患者取材前3个月内未使用皮质类固醇、免疫抑制剂、PUVA和其它治疗银屑病的药物。标本取自皮损和皮损周围正常皮肤。对照组6例，为外科成形手术正常人皮肤。
, 百拇医药
主要试剂：过氧化物酶标记的链霉亲和素免疫组化染色试剂盒(简称SPtm试剂盒，批号SP9001)；兔抗PDGF受体-α、β多克隆抗体，工作效价分别为1∶150、1∶200。以上均为Eymed公司产品。
研究方法：采用HRP标记的链霉亲和素-生物素法：载玻片经APES处理，标本恒冷冰冻切片，厚5μm，丙酮固定；0.6%H2O2和体积分数为10%羊血清室温下孵育30min；Ⅰ抗4℃孵育12h；IgG/Bio(1∶200，用质量浓度为10g/L的BSAPBS稀释)37℃孵育30min；S-P/HRP(1∶200)37℃孵育30min；以上每一步骤前均以0.1mol/LPBS充分浸洗标本，最后DAB显色。用0.1mol/LPBS代替Ⅰ抗作为空白对照。
分析方法：PDGF受体-α和β阳性细胞特征为细胞膜和细胞浆中可见棕黄色颗粒。参照Garcia等[2]的判断标准，确定每例标本中表达PDGF受体-α或β蛋白的成纤维细胞，根据成纤维细胞染色深浅进行分级：浅棕黄色为1分，深棕黄色为2分。根据阳性成纤维细胞数进行分级：每张切片在真皮浅层随机选择10个高倍镜视野(×300)，计数每个高倍视野中阳性成纤维细胞数，取其平均值作为每张切片的阳性成纤维细胞数。平均值:<10为1分，10～20为2分，>20为3分。以上2项记分相加：2～3分为(+)，3～4分为(++)，>4分为(+++)。≥(++)以上为中等程度以上表达。两样本间采用精确检验法检验。
, 百拇医药
二、结果
1.PDGF受体-α和β在所有标本表皮角质形成细胞中均无阳性染色。在12例皮损区成纤维细胞和血管内皮细胞均呈强阳性染色，阳性成纤维细胞数较多，尤以真皮浅层明显。在非皮损区成纤维细胞和血管内皮细胞亦呈阳性染色，但阳性成纤维细胞数较皮损区少，染色强度也较皮损区弱。在6例正常皮肤中仅极少数成纤维细胞呈微弱阳性染色，血管内皮细胞也呈微弱阳性染色。
2.PDGF受体-α在皮损区成纤维细胞中以中等程度以上表达为主，与非皮损区相比差异有显著性(P<0.05)，与正常皮肤成纤维细胞相比差异有非常显著性(P<0.01)；在非皮损区成纤维细胞中表达程度明显降低，且与正常皮肤相比差异无显著性(P>0.05),详见表1。
3.PDGF受体-β在皮损区成纤维细胞中均呈中等程度以上的表达，与非皮损区和正常皮肤成纤维细胞相比差异均有非常显著性(均P<0.01)，而非皮损区成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞相比差异无显著性(P>0.05),见表1。
, 百拇医药
三、讨论
近年的研究表明银屑病皮损中成纤维细胞存在异常，并认为异常的成纤维细胞可能是银屑病发病的重要因素之一。Gu等发现培养的银屑病皮损和非皮损成纤维细胞对PDGF的促有丝分裂活性和趋化活性的敏感性增高，认为PDGF参与了银屑病的发病过程[1]。本文结果显示，银屑病皮损成纤维细胞中PDGF受体α和β的表达增高，提示银屑病皮损成纤维细胞对PDGF生物活性的敏感性增高是和成纤维细胞上的特异性受体数目增加有关。Krane等[3]曾报道银屑病皮损成纤维细胞中PDGF受体-β高表达。本研究发现的α受体高表达，一方面提示PDGF受体-α也可能参与了银屑病的发病过程，另一方面由于角质形成细胞是完整皮肤中PDGF的重要来源，它主要分泌PDGFAA和AB[4]，银屑病过度增殖的表皮有可能为局部提供更多的PDGFA蛋白。基于α亚单位与PDGF三种二聚体结合特性[5]，提示PDGFA/PDGF受体-α系统可能是银屑病表皮—真皮间相互作用中的一个重要因子.
, 百拇医药
表1 血小板衍生生长因子受体α、β在银屑病及正常人皮肤成纤维细胞中的表达 组 别
例数
表达强度
中等程度以上阳性率
PDGFα
-
+
++
+++
皮损区
12
0
, 百拇医药
2
6
4
83.3%
非皮损区
12
0
7
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0
41.7%
正常皮肤
6
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, 百拇医药
6
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PDGFβ
皮损区
12
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非皮损区
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, 百拇医药
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33.3%
正常皮肤
6
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注：PDGF为血小板衍生生长因子受体
, 百拇医药
中华医学会皮肤科分会基金资助
参 考 文 献
1.Gu XF, Raynaud F, Evain Brion D. Increased chemotactic and mitogenic response of psoriatic fibroblasts to platelet derived growth factor. J Invest Dermatol, 1988,91:599- 602.
2.Garcia RL, Coltrera MD, Gown AM. Analysis of proliferative grade using anti PCNA/cyclin monoclonal antibodies in fixed, embedded tissues:comparison with flow
, http://www.100md.com cytometric analysis. Am J Pathol, 1988,134:733- 739.
3.Krane JF, Murphy DP, Gottieb AB, et al. Increased dermal expression of platelet derived growth factor receptors in growth-activated skin wounds and psoriasis. J Invest Dermatol,1991,96:983- 986.
4.Eming SA, Lee J, Snow RG, et al. Genetically modified human epidermis overexpressing PDGF A directs the development of a cellular and vascular connective tissue stroma when transplanted to athymic mice implications for the use of genetically modified keratinocytes to modulate dermal regeneration.J Invest Dermatol， 1995， 105:756- 763.
5.Ross R. Peptide regulatory factors:platelet-derived growth factor. Lancet, 1989,Ⅰ (8648):1179- 1182.
收稿日期：1999-07-30, 百拇医药