银屑病患者血小板CD41及CD61的表达
作者：刘洪普 刘华昌 李冠勇
单位：刘洪普 刘华昌 李冠勇(250031 济南市，济南军区总医院)
关键词：
中华皮肤科杂志000218
越来越多的资料显示，血小板活化对银屑病具有重要的病理生理意义[1]。我们采用流式细胞仪和特异的抗体，对银屑病患者血小板CD41及CD61的表达进行了研究，旨在进一步探讨血小板活化与银屑病的关系。
一、材料和方法
(一)观察对象：46例寻常型银屑病患者，均为我院门诊及住院患者，男26例，女20例；年龄16～60岁，平均37岁；病程3周至35年；其中进行期28例，静止期18例。另选健康对照者40例，其中男24例，女16例；年龄17～59岁，平均38岁。两组均排除心血管疾患及糖尿病、高血压病史，两组在2个月内均无应用对血小板有影响的药物史。
, 百拇医药
(二)实验方法：
1.特殊试剂：异硫氰酸荧光素(FITC)标记的单克隆抗体CD41、CD61；阴性对照为FITC标记的IgG1(羊抗鼠)。由法国国际免疫公司生产(批号950608)。
2.流式细胞仪：FACScan型，美国BectonDickinson公司生产。
3.血液样品的处理：取静脉血2mL，用质量浓度为20g/L的EDTA抗凝(抗凝剂∶血=1∶9)，静置或600～800r/min离心5min，分离富含血小板的血浆层，加固定剂多聚甲醛(终浓度为1%)，室温放置20min，离心(1500r/min)5min，弃上清液，再加PBS5mL洗2遍(1500r/min,5min)，调整血小板浓度为：300×109/L，4℃保存备用。
4.免疫反应：各取100μL血小板悬液加入4支试管内，分别加入CD41-FITC、IgG1FITC、CD61-FITC及IgG1FITC20μL，室温避光反应30min后，离心(2000r/min)5min，弃上清液，PBS漂洗2遍，上机检测。
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5.流式细胞仪检测：上机前先以标准荧光微球调整仪器，使变异系数稳定在2%左右，上机后收集20000个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在Macintosh650计算机上用CellQutstPlot软件(美国Becton-Dickinson公司产)分析数据，由HP1200c/ps打印结果。
(三)统计学处理：结果中所列数据以
±s表示，采用t′检验及直线相关分析。
二、结果
银屑病患者CD41及CD61表达水平显著高于对照组(P均<0.01)，且进行期患者显著高于静止期(P均<0.01)，详见表1。经有效治疗(紫外线照射充氧自体血回输，UVN光疗及地塞米松等)，有15例患者皮疹消退，血小板CD41及CD61表达量接近正常人水平(P均>0.05)。
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表1 银屑病患者血小板CD41及CD61的表达水平(±s,%) 分 组
例数
CD41
CD61
银屑病组
46
3.36±0.98*
7.94±1.96*
进行期
28
, http://www.100md.com
3.91±0.85**
8.35±1.12**
静止期
18
2.81±0.79
6.31±1.07
皮疹消退组
15
1.53±0.46△
5.43±1.45△
健康对照组
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40
1.38±0.33
5.02±1.54
注：*银屑病组与健康对照组比较P<0.01;**进行期与静止期比较P<0.01;△皮疹消退组与健康对照组比较P>0.05
三、讨论
现已证实，整合素在胚胎发生、炎症、免疫反应、肿瘤转移及细胞聚集等方面起重要作用。血小板糖蛋白(GPⅡb-Ⅲa)为整合素家族成员之一，为粘附分子的主要受体，可介导血小板粘附，是血小板聚集的重要因素[2]。GPⅡb-Ⅲa可与4种粘附因子(纤维蛋白原、VWF因子、纤维结合素，玻璃体结合蛋白)结合，并引发一系列反应[3]。CD41抗原为该整合素的αⅡb链，CD61抗原为其β2链，两者形成GPⅡb-Ⅲa整合素。CD41及CD61在静止期血小板不表达，当血小板活化时，CD41及CD61表达增强，进一步提示血小板活化及其产物在银屑病发生和发展中可能起作用。
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银屑病患者微循环异常，易合并闭塞性微血管疾患[4]，血小板活化增强及GPⅡb-Ⅲa复合物的过量形成可能在该方面发挥作用。研究结果显示：CD41及CD61在银屑病组大于健康组，进行期大于静止期；提示血小板活化与银屑病患者微循环异常，易导致闭塞性微血管疾患等有关，由此可以设想，应用减少GPⅡb-Ⅲa形成的治疗对策，可能有助于提高治疗该病的疗效。
参考文献
1.李冠勇，刘华昌，尹格平，等.银屑病患者活化血小板的流式细胞分析.中华皮肤科杂志，1997，30：91-92.
2.Mondoru TH, Wall CD, White MM, et al. Selective induction of a glycoprotein Ⅲ a ligand- induced binding site by fibrinogen and von willebrand factor. Blood, 1996,88:3824- 3830.
3.Vinciguerra C, Khelif A, Alemany M, et al. A nonsense mutation in the GPⅡ b heavy chain(ser870- stop) impairs platelet GPⅡ b- Ⅲ a expression. Br J Haematology, 1996,95:399- 407.
4.李冠勇，刘华昌.银屑病中医分型与血小板指数及微循环的关系.新中医，1997，29：38-40.
收稿日期：1999-09-27, http://www.100md.com
单位：刘洪普 刘华昌 李冠勇(250031 济南市，济南军区总医院)
关键词：
中华皮肤科杂志000218
越来越多的资料显示，血小板活化对银屑病具有重要的病理生理意义[1]。我们采用流式细胞仪和特异的抗体，对银屑病患者血小板CD41及CD61的表达进行了研究，旨在进一步探讨血小板活化与银屑病的关系。
一、材料和方法
(一)观察对象：46例寻常型银屑病患者，均为我院门诊及住院患者，男26例，女20例；年龄16～60岁，平均37岁；病程3周至35年；其中进行期28例，静止期18例。另选健康对照者40例，其中男24例，女16例；年龄17～59岁，平均38岁。两组均排除心血管疾患及糖尿病、高血压病史，两组在2个月内均无应用对血小板有影响的药物史。
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(二)实验方法：
1.特殊试剂：异硫氰酸荧光素(FITC)标记的单克隆抗体CD41、CD61；阴性对照为FITC标记的IgG1(羊抗鼠)。由法国国际免疫公司生产(批号950608)。
2.流式细胞仪：FACScan型，美国BectonDickinson公司生产。
3.血液样品的处理：取静脉血2mL，用质量浓度为20g/L的EDTA抗凝(抗凝剂∶血=1∶9)，静置或600～800r/min离心5min，分离富含血小板的血浆层，加固定剂多聚甲醛(终浓度为1%)，室温放置20min，离心(1500r/min)5min，弃上清液，再加PBS5mL洗2遍(1500r/min,5min)，调整血小板浓度为：300×109/L，4℃保存备用。
4.免疫反应：各取100μL血小板悬液加入4支试管内，分别加入CD41-FITC、IgG1FITC、CD61-FITC及IgG1FITC20μL，室温避光反应30min后，离心(2000r/min)5min，弃上清液，PBS漂洗2遍，上机检测。
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5.流式细胞仪检测：上机前先以标准荧光微球调整仪器，使变异系数稳定在2%左右，上机后收集20000个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在Macintosh650计算机上用CellQutstPlot软件(美国Becton-Dickinson公司产)分析数据，由HP1200c/ps打印结果。
(三)统计学处理：结果中所列数据以
±s表示，采用t′检验及直线相关分析。二、结果
银屑病患者CD41及CD61表达水平显著高于对照组(P均<0.01)，且进行期患者显著高于静止期(P均<0.01)，详见表1。经有效治疗(紫外线照射充氧自体血回输，UVN光疗及地塞米松等)，有15例患者皮疹消退，血小板CD41及CD61表达量接近正常人水平(P均>0.05)。
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表1 银屑病患者血小板CD41及CD61的表达水平(
±s,%) 分 组例数
CD41
CD61
银屑病组
46
3.36±0.98*
7.94±1.96*
进行期
28
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3.91±0.85**
8.35±1.12**
静止期
18
2.81±0.79
6.31±1.07
皮疹消退组
15
1.53±0.46△
5.43±1.45△
健康对照组
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40
1.38±0.33
5.02±1.54
注：*银屑病组与健康对照组比较P<0.01;**进行期与静止期比较P<0.01;△皮疹消退组与健康对照组比较P>0.05
三、讨论
现已证实，整合素在胚胎发生、炎症、免疫反应、肿瘤转移及细胞聚集等方面起重要作用。血小板糖蛋白(GPⅡb-Ⅲa)为整合素家族成员之一，为粘附分子的主要受体，可介导血小板粘附，是血小板聚集的重要因素[2]。GPⅡb-Ⅲa可与4种粘附因子(纤维蛋白原、VWF因子、纤维结合素，玻璃体结合蛋白)结合，并引发一系列反应[3]。CD41抗原为该整合素的αⅡb链，CD61抗原为其β2链，两者形成GPⅡb-Ⅲa整合素。CD41及CD61在静止期血小板不表达，当血小板活化时，CD41及CD61表达增强，进一步提示血小板活化及其产物在银屑病发生和发展中可能起作用。
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银屑病患者微循环异常，易合并闭塞性微血管疾患[4]，血小板活化增强及GPⅡb-Ⅲa复合物的过量形成可能在该方面发挥作用。研究结果显示：CD41及CD61在银屑病组大于健康组，进行期大于静止期；提示血小板活化与银屑病患者微循环异常，易导致闭塞性微血管疾患等有关，由此可以设想，应用减少GPⅡb-Ⅲa形成的治疗对策，可能有助于提高治疗该病的疗效。
参考文献
1.李冠勇，刘华昌，尹格平，等.银屑病患者活化血小板的流式细胞分析.中华皮肤科杂志，1997，30：91-92.
2.Mondoru TH, Wall CD, White MM, et al. Selective induction of a glycoprotein Ⅲ a ligand- induced binding site by fibrinogen and von willebrand factor. Blood, 1996,88:3824- 3830.
3.Vinciguerra C, Khelif A, Alemany M, et al. A nonsense mutation in the GPⅡ b heavy chain(ser870- stop) impairs platelet GPⅡ b- Ⅲ a expression. Br J Haematology, 1996,95:399- 407.
4.李冠勇，刘华昌.银屑病中医分型与血小板指数及微循环的关系.新中医，1997，29：38-40.
收稿日期：1999-09-27, http://www.100md.com