检测女性尿沉渣中沙眼衣原体
作者：程文海 谢礼豪 黄澍杰 吴志周 周康涛 卢和琨 戴丽华 祝新
单位：529000广东省江门市皮肤病性病防治研究所
关键词：
中华皮肤科杂志000322
女性泌尿生殖道沙眼衣原体(Ct)感染的好发部位是女性宫颈或(和)尿道，临床上Ct感染实验室诊断一般采取宫颈拭子作标本。近年来，由于PCR方法的建立和发展，国外学者用女性首段尿沉渣作标本取得了较好效果[1,2]。我们用衣原体快速免疫测定法[简称立明法(Clearview)]和PCR法检测尿沉渣中Ct，并与宫颈拭子McCoy细胞培养法、立明法和PCR检测Ct进行比较，现将结果报道如下。
一、资料和方法
(一)病例：236例到我所性病门诊就诊、有阴道分泌物异常的患者，均符合下列条件，即①有非婚性接触史或性伴有性病史；②就诊前2周内未用抗生素；③非妊娠期妇女。
, http://www.100md.com
(二)取材方法：取宫颈拭子3支，分别插入宫颈1.0cm、1.5cm、2.0cm深处，停留1min，轻轻旋转后取出。取晨尿或至少间隔2h以上未排尿的首段尿20mL。
(三)尿标本处理：将尿液摇匀后平均分装于2支离心管，以3000r/min离心20min，弃上清液，将尿沉渣于4℃冰箱保存(24h至7d)。实验时2支离心管各加入pH值7.4的磷酸缓冲液或由试剂盒厂提供的缓冲液摇匀使之形成悬浮液，用立明法和PCR法检测CT。
(四)Ct的McCoy细胞培养：参照叶顺章等[3]方法进行。McCoy细胞由广州中山医科大学微生物教研室提供。
(五)立明法检测Ct抗原：采用英国UnipathLimited生产的试剂盒，操作按试剂盒说明进行。
(六)PCR检测CtDNA：采用中国军事医学科学院生产的检测Ct试剂盒。引物为：CT-A：5′GGACAAATCGTATCTCGG3′，CT-B：5′GAAACCAACTCTACGCTG3′，操作按试剂盒说明书进行。
, 百拇医药
二、结果
(一)236例女性患者不同标本和方法检测Ct的结果详见表1。
表1 不同方法检测236例女性患者宫颈 拭子和尿沉渣沙眼衣原体结果
细胞培养 立明法 PCR 合计例数 宫颈拭子 宫颈拭子 尿沉渣 宫颈拭子 尿沉渣 + + + + + 4 + + + + - 1 + + + - + 1 + + - + + 26 + + - + - 2 + - + + + 1 - + + + + 2 - + - + + 1 + - - + - 1 + - - + + 5 - - + - + 4 - - - + + 2 - - - + - 2 - - - - + 3 - - - - - 181 表2 不同方法检测宫颈拭子和尿沉渣中沙眼衣原体的敏感性和特异性
方 法 标 本 敏感性(%) 特异性(%) McCoy细胞培养 宫颈拭子 82 100 立明法 宫颈拭子 74 100 立明法 尿沉渣 26 100 PCR法 宫颈拭子 90 98.92 PCR法 尿沉渣 92 98.34
, http://www.100md.com
注：以5种检测方法中至少2种检测结果同时阳性为金标准
(二)立明法检测宫颈拭子和尿沉渣中Ct结果比较：用立明法检测宫颈拭子/尿沉渣中Ct抗原，两种标本检测结果均阳性8例，均阴性194例。宫颈拭子阳性、尿沉渣阴性29例。宫颈拭子阴性，尿沉渣阳性5例。经配对计数资料χ2检验，χ2=15.6,P<0.01差异有显著性.
(三)PCR法检测宫颈拭子/尿沉渣中Ct结果比较：用PCR法检测宫颈拭子/尿沉渣中CtDNA，两种标本检测结果均阳性41例，均阴性181例。宫颈拭子阳性、尿沉渣阴性6例。宫颈拭子阴性、尿沉渣阳性8例。经配对计数资料χ2检验，χ2=0.07,P>0.05，差异无显著性。
(四)以5种检测方法中至少2种检测Ct试验结果同时阳性为金标准，用宫颈拭子McCoy细胞培养，立明法检测宫颈拭子，立明法检测尿沉渣、PCR法检测宫颈拭子，PCR法检测尿沉渣中Ct敏感性和特异性见表2。
, 百拇医药
三、讨论
本组236例女性患者中，以至少2种检测Ct实验结果同时阳性为金标准，宫颈拭子McCoy细胞培养的敏感性为82%，特异性为100%；用立明法检测宫颈拭子和尿沉渣，敏感性分别为74%和26%，特异性分别为100%和100%；用PCR法检测宫颈拭子和尿沉渣，敏感性分别为90%和92%，特异性分别为98.92%和98.34%。出现这种现象原因可能是由于宫颈拭子并不总是含有感染尿道的微生物，而女性尿液可能由于宫颈-阴道分泌物污染的缘故，可同时含有尿道和宫颈中的病原体。由于PCR高度敏感，即使很少量从宫颈脱落下来的病原体也可以被检测到。
本次研究结果表明，用立明法检测女性Ct感染不能用尿液作标本；而用PCR法检测女性Ct感染时，如果有质量控制，那么尿液是一种取材简单、方便、敏感、非侵入性标本，可以代替宫颈拭子，这对大规模人群中Ct感染筛查试验具有非常重要意义。但在临床诊断方面能否用尿液作标本进行Ct检测，需进一步研究。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
1，Crothfelt KA, Welsh LE, DeBonville D, et al. Detection of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis in genitourinary specimens from men and women by a coamplification PCR assay. J Clin Microbiol, 1997,35:1536- 1540.
2，Pasternack R, Vuorinen P, Pitkajarvi T, et al. Comparision of manual Amplicor PCR, Cobas Amplicor PCR, and LCx assays for detection of Chlamydia trachomatis infection in women by using urine specimens. J Clin Microbiol, 1997,35:402- 405.
3，叶顺章，张木友主编.性传播疾病实验室诊断手册.广州：广东科技出版社，1991.46-47.
(收 稿 日 期 ： 1999- 05- 11), http://www.100md.com
单位：529000广东省江门市皮肤病性病防治研究所
关键词：
中华皮肤科杂志000322
女性泌尿生殖道沙眼衣原体(Ct)感染的好发部位是女性宫颈或(和)尿道，临床上Ct感染实验室诊断一般采取宫颈拭子作标本。近年来，由于PCR方法的建立和发展，国外学者用女性首段尿沉渣作标本取得了较好效果[1,2]。我们用衣原体快速免疫测定法[简称立明法(Clearview)]和PCR法检测尿沉渣中Ct，并与宫颈拭子McCoy细胞培养法、立明法和PCR检测Ct进行比较，现将结果报道如下。
一、资料和方法
(一)病例：236例到我所性病门诊就诊、有阴道分泌物异常的患者，均符合下列条件，即①有非婚性接触史或性伴有性病史；②就诊前2周内未用抗生素；③非妊娠期妇女。
, http://www.100md.com
(二)取材方法：取宫颈拭子3支，分别插入宫颈1.0cm、1.5cm、2.0cm深处，停留1min，轻轻旋转后取出。取晨尿或至少间隔2h以上未排尿的首段尿20mL。
(三)尿标本处理：将尿液摇匀后平均分装于2支离心管，以3000r/min离心20min，弃上清液，将尿沉渣于4℃冰箱保存(24h至7d)。实验时2支离心管各加入pH值7.4的磷酸缓冲液或由试剂盒厂提供的缓冲液摇匀使之形成悬浮液，用立明法和PCR法检测CT。
(四)Ct的McCoy细胞培养：参照叶顺章等[3]方法进行。McCoy细胞由广州中山医科大学微生物教研室提供。
(五)立明法检测Ct抗原：采用英国UnipathLimited生产的试剂盒，操作按试剂盒说明进行。
(六)PCR检测CtDNA：采用中国军事医学科学院生产的检测Ct试剂盒。引物为：CT-A：5′GGACAAATCGTATCTCGG3′，CT-B：5′GAAACCAACTCTACGCTG3′，操作按试剂盒说明书进行。
, 百拇医药
二、结果
(一)236例女性患者不同标本和方法检测Ct的结果详见表1。
表1 不同方法检测236例女性患者宫颈 拭子和尿沉渣沙眼衣原体结果
细胞培养 立明法 PCR 合计例数 宫颈拭子 宫颈拭子 尿沉渣 宫颈拭子 尿沉渣 + + + + + 4 + + + + - 1 + + + - + 1 + + - + + 26 + + - + - 2 + - + + + 1 - + + + + 2 - + - + + 1 + - - + - 1 + - - + + 5 - - + - + 4 - - - + + 2 - - - + - 2 - - - - + 3 - - - - - 181 表2 不同方法检测宫颈拭子和尿沉渣中沙眼衣原体的敏感性和特异性
方 法 标 本 敏感性(%) 特异性(%) McCoy细胞培养 宫颈拭子 82 100 立明法 宫颈拭子 74 100 立明法 尿沉渣 26 100 PCR法 宫颈拭子 90 98.92 PCR法 尿沉渣 92 98.34
, http://www.100md.com
注：以5种检测方法中至少2种检测结果同时阳性为金标准
(二)立明法检测宫颈拭子和尿沉渣中Ct结果比较：用立明法检测宫颈拭子/尿沉渣中Ct抗原，两种标本检测结果均阳性8例，均阴性194例。宫颈拭子阳性、尿沉渣阴性29例。宫颈拭子阴性，尿沉渣阳性5例。经配对计数资料χ2检验，χ2=15.6,P<0.01差异有显著性.
(三)PCR法检测宫颈拭子/尿沉渣中Ct结果比较：用PCR法检测宫颈拭子/尿沉渣中CtDNA，两种标本检测结果均阳性41例，均阴性181例。宫颈拭子阳性、尿沉渣阴性6例。宫颈拭子阴性、尿沉渣阳性8例。经配对计数资料χ2检验，χ2=0.07,P>0.05，差异无显著性。
(四)以5种检测方法中至少2种检测Ct试验结果同时阳性为金标准，用宫颈拭子McCoy细胞培养，立明法检测宫颈拭子，立明法检测尿沉渣、PCR法检测宫颈拭子，PCR法检测尿沉渣中Ct敏感性和特异性见表2。
, 百拇医药
三、讨论
本组236例女性患者中，以至少2种检测Ct实验结果同时阳性为金标准，宫颈拭子McCoy细胞培养的敏感性为82%，特异性为100%；用立明法检测宫颈拭子和尿沉渣，敏感性分别为74%和26%，特异性分别为100%和100%；用PCR法检测宫颈拭子和尿沉渣，敏感性分别为90%和92%，特异性分别为98.92%和98.34%。出现这种现象原因可能是由于宫颈拭子并不总是含有感染尿道的微生物，而女性尿液可能由于宫颈-阴道分泌物污染的缘故，可同时含有尿道和宫颈中的病原体。由于PCR高度敏感，即使很少量从宫颈脱落下来的病原体也可以被检测到。
本次研究结果表明，用立明法检测女性Ct感染不能用尿液作标本；而用PCR法检测女性Ct感染时，如果有质量控制，那么尿液是一种取材简单、方便、敏感、非侵入性标本，可以代替宫颈拭子，这对大规模人群中Ct感染筛查试验具有非常重要意义。但在临床诊断方面能否用尿液作标本进行Ct检测，需进一步研究。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
1，Crothfelt KA, Welsh LE, DeBonville D, et al. Detection of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis in genitourinary specimens from men and women by a coamplification PCR assay. J Clin Microbiol, 1997,35:1536- 1540.
2，Pasternack R, Vuorinen P, Pitkajarvi T, et al. Comparision of manual Amplicor PCR, Cobas Amplicor PCR, and LCx assays for detection of Chlamydia trachomatis infection in women by using urine specimens. J Clin Microbiol, 1997,35:402- 405.
3，叶顺章，张木友主编.性传播疾病实验室诊断手册.广州：广东科技出版社，1991.46-47.
(收 稿 日 期 ： 1999- 05- 11), http://www.100md.com