干扰素α－2b对尖锐湿疣患者皮损表皮细胞凋亡和增殖的影响
作者：张谊之 张敏 徐利 李利 王琳 李俸媛
单位：610041成都，华西医科大学附属第一医院皮肤性病科
关键词：
中华皮肤科杂志000315
为了探讨干扰素(INF)对尖锐湿疣患者皮损细胞凋亡与增殖的影响，我们采用原位特异性DNA片段标记法(TUNEL)观察了细胞凋亡，并用免疫组化法检测了与增殖有关的Ki-67基因产物的表达。
一、材料和方法
1.研究对象及治疗方法：尖锐湿疣患者18例，男5例，女13例；年龄21～60岁；病程15～90d。治疗前取疣体活检。于疣体下局部注射INFα-2b300万U，日1次，共10次。治疗结束后，立即取注射部位的疣体为疗后对照标本。对照标本5份，为外科手术去除的生殖器部位正常皮肤。
, 百拇医药
2.实验方法：TUNEL原位末端标记试剂盒(InSituCellDeathDetectionKit,APCat.No.1684809)为BoehringerMannheim公司产品。染色主要步骤按TUNEL原位末端标记试剂盒说明进行。Ki-67单克隆抗体为Zymed公司产品。采用SP法染色。
二、结果
1.凋亡细胞及Ki-67阳性细胞的表达：疗前凋亡细胞数较少；Ki-67阳性细胞数较多，定位于核，呈棕黄色分布于基底层和棘细胞层。疗后可见凋亡细胞数增加，群聚或散在分布；Ki-67阳性细胞数明显减少。治疗前后的凋亡细胞及Ki-67阳性细胞的均数比较差异均阳性细胞。2.相关性分析：治疗前凋亡细胞数与Ki-67阳性细胞数无相关性(r=-0.06,t=0.23,P>0.05)，治疗后两者呈显著负相关(r=-0.50,t=2.31,P<0.05)
表1 干扰素-α 2b治疗尖锐湿疣前后 皮损凋亡细胞及Ki-67阳性细胞 的表达[范围(
±s)]
, 百拇医药
凋亡细胞(个/100) Ki-67阳性细胞(个/100) 治疗前 0～5(1.8±1.4) 26～80(48.8±17.8) 治疗后 3～8(3.8±2.0) 15～38(22.1±11.6) t值 3.49 5.33 P值 <0.01 <0.01
3.疗效与细胞凋亡和增殖的关系：15例患者经治疗后，疣体部分消退或缩小，其治疗前后的细胞凋亡及Ki-67阳性细胞数变化明显，尤以后者为著，3个月后随访无复发。另3例治疗前后疣体变化不明显者，3个月后复发(在原皮损周围出现新的疣体)，其治疗前后的细胞凋亡和Ki-67阳性细胞数变化则不明显。
三、讨论
人乳头瘤病毒感染中，细胞出现过度的增殖，当其细胞不能识别或不能对生存信号因子产生反应时，便通过细胞凋亡将不再需要的或变异的细胞清除。本文所见凋亡细胞特征为核固缩深染，呈圆形或椭圆形。提示凋亡在排除过度增殖的细胞中，可能起到平衡体内增生和调节分化的重要作用[1]。Ki-67是Gerdes等[2]1983年报告的一种单克隆抗体，其抗原是一种与细胞增殖相关的核蛋白。在细胞周期中，除G0及G1早期外，Ki-67均有表达，尤以M期最高。在我们的观察中，可见Ki-67除基底层有表达外，在那些没有分化能力的上层棘细胞，亦有表达，与文献报道相似[3,4]。
, http://www.100md.com
文献报道INF的抗增殖作用可能是诱导了某些细胞增殖调控相关基因和表面抗原的表达，从而改变了角质形成细胞的细胞周期，使G0-G1期延长，S期和G2-M期缩短[4]。我们的研究表明，经INF-α2b治疗后，Ki-67阳性细胞的表达明显减少，充分表现了INF的这种抗增殖作用。我们在治疗中发现，15例疗效较好者，其治疗前后凋亡细胞增加和增殖减少均十分明显；而3例复发者的凋亡细胞和增殖细胞变化则不明显。临床和免疫病理似有相关性，但由于研究的病例较少，尚不能说明其中的关系。
参 考 文 献
1，Isacson C, Kessis TD, Hedrick L, et al. Both cell proliferation and apoptosis increases with lesion grade in cervical neoplasia but not correlate with human papillomavirus type. Cancer Res, 1996,56:669- 674.
, 百拇医药
2，Gerdes J, Schwab U, Lemke H, et al. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with human nuclear antigen associated with cell proliferation. Int J Cancer, 1983,31:13- 20.
3，Mate JL, Ariza A, Roca X, et al. Expression patterns of cyclins D1 and E in condyloma acuminatum in comparison with psoriatic proliferative lesions. J Pathol, 1998,184:83- 88.
4，Cardamakis E, Kotoulas LG, Metalinos K, et al. Treatment of urethral condylomata acuminata or flat condylomata with interferon- alpha 2a. J Urol, 1994,152:2011- 2013.
(收 稿 日 期 ： 1999- 07- 05), 百拇医药
单位：610041成都，华西医科大学附属第一医院皮肤性病科
关键词：
中华皮肤科杂志000315
为了探讨干扰素(INF)对尖锐湿疣患者皮损细胞凋亡与增殖的影响，我们采用原位特异性DNA片段标记法(TUNEL)观察了细胞凋亡，并用免疫组化法检测了与增殖有关的Ki-67基因产物的表达。
一、材料和方法
1.研究对象及治疗方法：尖锐湿疣患者18例，男5例，女13例；年龄21～60岁；病程15～90d。治疗前取疣体活检。于疣体下局部注射INFα-2b300万U，日1次，共10次。治疗结束后，立即取注射部位的疣体为疗后对照标本。对照标本5份，为外科手术去除的生殖器部位正常皮肤。
, 百拇医药
2.实验方法：TUNEL原位末端标记试剂盒(InSituCellDeathDetectionKit,APCat.No.1684809)为BoehringerMannheim公司产品。染色主要步骤按TUNEL原位末端标记试剂盒说明进行。Ki-67单克隆抗体为Zymed公司产品。采用SP法染色。
二、结果
1.凋亡细胞及Ki-67阳性细胞的表达：疗前凋亡细胞数较少；Ki-67阳性细胞数较多，定位于核，呈棕黄色分布于基底层和棘细胞层。疗后可见凋亡细胞数增加，群聚或散在分布；Ki-67阳性细胞数明显减少。治疗前后的凋亡细胞及Ki-67阳性细胞的均数比较差异均阳性细胞。2.相关性分析：治疗前凋亡细胞数与Ki-67阳性细胞数无相关性(r=-0.06,t=0.23,P>0.05)，治疗后两者呈显著负相关(r=-0.50,t=2.31,P<0.05)
表1 干扰素-α 2b治疗尖锐湿疣前后 皮损凋亡细胞及Ki-67阳性细胞 的表达[范围(
±s)], 百拇医药
凋亡细胞(个/100) Ki-67阳性细胞(个/100) 治疗前 0～5(1.8±1.4) 26～80(48.8±17.8) 治疗后 3～8(3.8±2.0) 15～38(22.1±11.6) t值 3.49 5.33 P值 <0.01 <0.01
3.疗效与细胞凋亡和增殖的关系：15例患者经治疗后，疣体部分消退或缩小，其治疗前后的细胞凋亡及Ki-67阳性细胞数变化明显，尤以后者为著，3个月后随访无复发。另3例治疗前后疣体变化不明显者，3个月后复发(在原皮损周围出现新的疣体)，其治疗前后的细胞凋亡和Ki-67阳性细胞数变化则不明显。
三、讨论
人乳头瘤病毒感染中，细胞出现过度的增殖，当其细胞不能识别或不能对生存信号因子产生反应时，便通过细胞凋亡将不再需要的或变异的细胞清除。本文所见凋亡细胞特征为核固缩深染，呈圆形或椭圆形。提示凋亡在排除过度增殖的细胞中，可能起到平衡体内增生和调节分化的重要作用[1]。Ki-67是Gerdes等[2]1983年报告的一种单克隆抗体，其抗原是一种与细胞增殖相关的核蛋白。在细胞周期中，除G0及G1早期外，Ki-67均有表达，尤以M期最高。在我们的观察中，可见Ki-67除基底层有表达外，在那些没有分化能力的上层棘细胞，亦有表达，与文献报道相似[3,4]。
, http://www.100md.com
文献报道INF的抗增殖作用可能是诱导了某些细胞增殖调控相关基因和表面抗原的表达，从而改变了角质形成细胞的细胞周期，使G0-G1期延长，S期和G2-M期缩短[4]。我们的研究表明，经INF-α2b治疗后，Ki-67阳性细胞的表达明显减少，充分表现了INF的这种抗增殖作用。我们在治疗中发现，15例疗效较好者，其治疗前后凋亡细胞增加和增殖减少均十分明显；而3例复发者的凋亡细胞和增殖细胞变化则不明显。临床和免疫病理似有相关性，但由于研究的病例较少，尚不能说明其中的关系。
参 考 文 献
1，Isacson C, Kessis TD, Hedrick L, et al. Both cell proliferation and apoptosis increases with lesion grade in cervical neoplasia but not correlate with human papillomavirus type. Cancer Res, 1996,56:669- 674.
, 百拇医药
2，Gerdes J, Schwab U, Lemke H, et al. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with human nuclear antigen associated with cell proliferation. Int J Cancer, 1983,31:13- 20.
3，Mate JL, Ariza A, Roca X, et al. Expression patterns of cyclins D1 and E in condyloma acuminatum in comparison with psoriatic proliferative lesions. J Pathol, 1998,184:83- 88.
4，Cardamakis E, Kotoulas LG, Metalinos K, et al. Treatment of urethral condylomata acuminata or flat condylomata with interferon- alpha 2a. J Urol, 1994,152:2011- 2013.
(收 稿 日 期 ： 1999- 07- 05), 百拇医药