一种新的建立烫伤模型的简易方法
作者：刘 毅 陈 璧 贾赤宇 于 晟
单位：刘 毅 于 晟 兰州军区兰州总医院烧伤科 陈 璧 贾赤宇 解放军第四军医大学西京医院烧伤科
关键词：烫伤；动物模型；方法
一种新的建立烫伤模型的简易方法分类号：R 644
文献标识码：A
文章编号：1007-8622(1999)01-0030-31
建立标准的烧/烫伤动物模型是现代烧伤外科领域从事科学研究所必需的实验手段，有关烧/烫伤动物模型的文献报道很多，但常存在烧/烫伤面积与深度不易控制，方法复杂而不规范及重复性差等不足。这些问题长期影响着烧/烫伤的研究结果。为了解决上述缺陷，寻求较为理想的建立烫伤模型的方法，本研究采用手提式压力蒸汽消毒器，设计与制做了简易高压蒸汽烫伤装置，并于小鼠背部建立了浅二度、深二度及三度烫伤模型，经组织学检查证实结果稳定，重复性好，介绍如下。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物：昆明种雄性小白鼠(第四军医大学动物中心提供)104只，体重19±2 g，室温下混合饲料单笼饲养1 d后用于实验。
1.1.2 主要物品：YXQ.SG46-280型手提式压力蒸汽消毒器(甘肃医疗器械厂)，自行车内胎，橡皮垫圈，聚乙烯泡沫，玻璃管(长5 cm，内径1.1 cm)，记时器，卵圆钳，手术刀。
1.2 实验方法
1.2.1 烫伤装置：取6 cm×6 cm×8 cm聚乙烯泡沫，按压力蒸汽消毒器排气阀大小于其长轴一侧用手术刀刻制一空腔，将它套在排气阀上，于外侧排气孔相应侧聚乙烯泡沫处刻一直径1.2 cm圆柱形空腔，将玻璃管对准排气孔插入，胶带固定,玻璃管两侧各固定一长出其排气口边缘0.5 cm的致伤距离指示支架。
, 百拇医药
1.2.2 防护装置：取各长12 cm自行车内胎两条，自内缘剖开，将两者用补胎胶水重叠粘接，并在其中线中外三分之一交界处刻一直径1.1 cm圆孔，然后取直径3 cm，厚0.1 cm橡皮垫圈两个，中央刻同样大小圆孔，用补胎脱水粘于前者内外两侧。
1.2.3 模型建立：压力蒸汽消毒器加水至刚浸过十字支架，加盖拧紧，接通220 V电源。
小鼠背部预先1 d用8%硫化钠脱毛，乙醚麻醉后将其置于防护装置中，背部拟烫伤区对准防护装置中央圆孔，前后各用一把卵圆钳固定。
消毒器压力上升至0.13 MPa时，断电。将固定小鼠的防护装置紧贴致伤距离指示支架，致伤距离为0.5 cm，防护装置中央圆孔对准玻璃管排气口，待消毒器压力下降至0.12 MPa时，打开排气阀开关，计时(图1)。致伤时间分别为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18 s。每一致伤时间点烫伤4只。伤后腹腔注射生理盐水，每100 g体重注射4 ml，创面用凡士林油纱加无菌棉球打包包扎，单笼饲养。分别于伤后即时、4、8、12、24、48 h取材，组织标本用10%甲醛固定，做组织学检查。经组织学检查筛选出分别导致浅二度、深二度和三度烫伤的三个时间点：6、10、15 s，按此将其余58只小鼠随机分三组重复前述致伤过程，每组分别为：19只、20只、19只，并持续观察创面愈合情况至伤后28 d。
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图1 高压蒸汽烫伤仪及模型建立示意图
1.2.4 结果判定标准(郭鹞，主编. 人体疾病的动物模型.北京:人民卫生出版社，1990.443～445)
浅二度：表皮全层及真皮浅层受损者；创面于伤后14 d内愈合，有被毛生长。
深二度：真皮深层受损，仅残留深部皮肤附件者；创面于伤后28 d内愈合，有被毛生长。
三度：皮肤全层及皮下组织受损，皮肤附件完全破坏，甚至波及肌肉者。
2 结果
2.1 肉眼观察：创面均匀一致，圆形，直径1.1 cm,创缘环绕一白色边界线，与创面周围正常皮肤形成明显分界。浅二度创面呈白色，深二度呈灰白色，三度呈灰黑色。二度创面轻度肿胀，无水疱形成。
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2.2 光镜观察：烫伤即时，6～9 s者为浅二度;10～14 s者为深二度；15～18 s者为三度。随病程进展，至伤后24 h，8～9 s者演变为深二度；13 s和14 s者演变为三度；6 s和7 s者仍为浅二度；10 s、11 s和12 s者仍为深二度。伤后48 h组织学变化与24 h者基本相同。
2.3 创面愈合时间及愈合后被毛生长情况观察：6 s组(浅二度)创面于伤后10～12 d愈合，有被毛生长，较均匀。10 s组(深二度)创面于21～23 d愈合，有被毛生长，但稀疏，不均匀。15 s组(三度)创面于伤后28 d缩小，坏死干痂未脱。
3 讨论
实验性烧伤或烫伤的损害程度取决于致伤温度的高低、致伤时间的长短、烧伤或烫伤组织的伤前情况以及实验动物的机体反应性。为保持致伤条件恒定一致，复制出损害程度一致的模型，以便于进行重复和对比，应针对致伤时间、致伤温度和致伤后各种可能的影响因素，采取相应的措施，最大限度地减少各种因素的影响。脱毛时应尽可能剪短被毛，脱毛剂(8%硫化钠)最好于用前用温水临时配制，使用时用棉球蘸脱毛剂浸湿脱毛区，勿用力摩擦，然后用温水清洗。经组织学检查证实，按上述方法脱毛对脱毛区皮肤损伤最轻，且损伤多于24 h后恢复。我们所用小鼠均于脱毛后置室温下单笼饲养1 d后用于实验，这样也有助于小鼠在致伤前适应新的生活环境。致伤前均采用乙醚吸入麻醉。致伤时以0.12 MPa作为统一的致伤压力起点，此时致伤蒸汽温度为122.8℃。用防护装置严格控制烫伤面积和烫伤部位，致伤面积均为1.1 cm×1.1 cm，创面位于背部中央，创缘清楚，与创周正常皮肤分界明显。致伤距离由玻璃排气管两侧指示支架统一确定为0.5 cm。致伤后按每100 g体重4 ml腹腔注射生理盐水抗休克，创面用凡士林油纱加无菌棉球打包包扎，故有效地控制了除时间以外的各种影响因素。使用者可根据研究所需，以致伤时间为变量，借助于致伤时间来建立不同深度的烫伤模型。
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烧伤或烫伤深度判定标准要明确一致。一般常以病理检查的组织学改变作为划分标准。其深度划分与临床上“三度四分法”基本一致，但关键问题是，深度是以伤后即时深度为准，还是以伤后热力作用消失、创面不再加深、致伤深度稳定后的深度为准?根据本研究结果，烫伤6～9 s者其即时创面为浅二度，10 ～14 s者为深二度，但至伤后24 h时，8 s和9 s的创面演变为深二度，13 s和14 s的创面演变为三度，48 h时的组织学改变与24 h者基本相同。所以以伤后即时的烫伤深度为准显然不妥，而应以伤后24 h烫伤深度稳定时的深度为标准，才能保证烫伤深度的一致性。致伤6～7 s、10～12 s以及15～18 s者，尽管也存在创面加深现象，但至伤后24 h和48 h其深度变化仍分别符合浅二度、深二度及三度的组织学改变，故我们选有各种烫伤深度致伤时间区间的下限：6 s、10 s、15 s作为建立浅二度、深二度和三度烫伤模型的致伤时间，获得了稳定的烫伤模型。另外，我们追踪观察了不同深度创面愈合时间及愈合后被毛生长情况，结果显示：6 s组(浅二度)创面于伤后10～12 d愈合，且有较均匀的被毛生长；10 s组(深二度)创面于伤后21～23 d愈合，虽有毛发生长，但稀疏，不均匀，从而更进一步证实了其可靠性。
采用本装置复制烫伤模型具有方法简单、使用方便、模型稳定、重复性好等优点，为建立小鼠不同深度烫伤模型提供了一个较为满意的方法。但使用时需要麻醉动物且仅适用于小动物为其不足。
作者简介：刘 毅，男，35岁，博士，主治医师，兰州军区兰州总医院
烧伤科，兰州，730050
收稿日期：1998-10-28, 百拇医药
单位：刘 毅 于 晟 兰州军区兰州总医院烧伤科 陈 璧 贾赤宇 解放军第四军医大学西京医院烧伤科
关键词：烫伤；动物模型；方法
一种新的建立烫伤模型的简易方法分类号：R 644
文献标识码：A
文章编号：1007-8622(1999)01-0030-31
建立标准的烧/烫伤动物模型是现代烧伤外科领域从事科学研究所必需的实验手段，有关烧/烫伤动物模型的文献报道很多，但常存在烧/烫伤面积与深度不易控制，方法复杂而不规范及重复性差等不足。这些问题长期影响着烧/烫伤的研究结果。为了解决上述缺陷，寻求较为理想的建立烫伤模型的方法，本研究采用手提式压力蒸汽消毒器，设计与制做了简易高压蒸汽烫伤装置，并于小鼠背部建立了浅二度、深二度及三度烫伤模型，经组织学检查证实结果稳定，重复性好，介绍如下。
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1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物：昆明种雄性小白鼠(第四军医大学动物中心提供)104只，体重19±2 g，室温下混合饲料单笼饲养1 d后用于实验。
1.1.2 主要物品：YXQ.SG46-280型手提式压力蒸汽消毒器(甘肃医疗器械厂)，自行车内胎，橡皮垫圈，聚乙烯泡沫，玻璃管(长5 cm，内径1.1 cm)，记时器，卵圆钳，手术刀。
1.2 实验方法
1.2.1 烫伤装置：取6 cm×6 cm×8 cm聚乙烯泡沫，按压力蒸汽消毒器排气阀大小于其长轴一侧用手术刀刻制一空腔，将它套在排气阀上，于外侧排气孔相应侧聚乙烯泡沫处刻一直径1.2 cm圆柱形空腔，将玻璃管对准排气孔插入，胶带固定,玻璃管两侧各固定一长出其排气口边缘0.5 cm的致伤距离指示支架。
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1.2.2 防护装置：取各长12 cm自行车内胎两条，自内缘剖开，将两者用补胎胶水重叠粘接，并在其中线中外三分之一交界处刻一直径1.1 cm圆孔，然后取直径3 cm，厚0.1 cm橡皮垫圈两个，中央刻同样大小圆孔，用补胎脱水粘于前者内外两侧。
1.2.3 模型建立：压力蒸汽消毒器加水至刚浸过十字支架，加盖拧紧，接通220 V电源。
小鼠背部预先1 d用8%硫化钠脱毛，乙醚麻醉后将其置于防护装置中，背部拟烫伤区对准防护装置中央圆孔，前后各用一把卵圆钳固定。
消毒器压力上升至0.13 MPa时，断电。将固定小鼠的防护装置紧贴致伤距离指示支架，致伤距离为0.5 cm，防护装置中央圆孔对准玻璃管排气口，待消毒器压力下降至0.12 MPa时，打开排气阀开关，计时(图1)。致伤时间分别为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18 s。每一致伤时间点烫伤4只。伤后腹腔注射生理盐水，每100 g体重注射4 ml，创面用凡士林油纱加无菌棉球打包包扎，单笼饲养。分别于伤后即时、4、8、12、24、48 h取材，组织标本用10%甲醛固定，做组织学检查。经组织学检查筛选出分别导致浅二度、深二度和三度烫伤的三个时间点：6、10、15 s，按此将其余58只小鼠随机分三组重复前述致伤过程，每组分别为：19只、20只、19只，并持续观察创面愈合情况至伤后28 d。
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图1 高压蒸汽烫伤仪及模型建立示意图
1.2.4 结果判定标准(郭鹞，主编. 人体疾病的动物模型.北京:人民卫生出版社，1990.443～445)
浅二度：表皮全层及真皮浅层受损者；创面于伤后14 d内愈合，有被毛生长。
深二度：真皮深层受损，仅残留深部皮肤附件者；创面于伤后28 d内愈合，有被毛生长。
三度：皮肤全层及皮下组织受损，皮肤附件完全破坏，甚至波及肌肉者。
2 结果
2.1 肉眼观察：创面均匀一致，圆形，直径1.1 cm,创缘环绕一白色边界线，与创面周围正常皮肤形成明显分界。浅二度创面呈白色，深二度呈灰白色，三度呈灰黑色。二度创面轻度肿胀，无水疱形成。
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2.2 光镜观察：烫伤即时，6～9 s者为浅二度;10～14 s者为深二度；15～18 s者为三度。随病程进展，至伤后24 h，8～9 s者演变为深二度；13 s和14 s者演变为三度；6 s和7 s者仍为浅二度；10 s、11 s和12 s者仍为深二度。伤后48 h组织学变化与24 h者基本相同。
2.3 创面愈合时间及愈合后被毛生长情况观察：6 s组(浅二度)创面于伤后10～12 d愈合，有被毛生长，较均匀。10 s组(深二度)创面于21～23 d愈合，有被毛生长，但稀疏，不均匀。15 s组(三度)创面于伤后28 d缩小，坏死干痂未脱。
3 讨论
实验性烧伤或烫伤的损害程度取决于致伤温度的高低、致伤时间的长短、烧伤或烫伤组织的伤前情况以及实验动物的机体反应性。为保持致伤条件恒定一致，复制出损害程度一致的模型，以便于进行重复和对比，应针对致伤时间、致伤温度和致伤后各种可能的影响因素，采取相应的措施，最大限度地减少各种因素的影响。脱毛时应尽可能剪短被毛，脱毛剂(8%硫化钠)最好于用前用温水临时配制，使用时用棉球蘸脱毛剂浸湿脱毛区，勿用力摩擦，然后用温水清洗。经组织学检查证实，按上述方法脱毛对脱毛区皮肤损伤最轻，且损伤多于24 h后恢复。我们所用小鼠均于脱毛后置室温下单笼饲养1 d后用于实验，这样也有助于小鼠在致伤前适应新的生活环境。致伤前均采用乙醚吸入麻醉。致伤时以0.12 MPa作为统一的致伤压力起点，此时致伤蒸汽温度为122.8℃。用防护装置严格控制烫伤面积和烫伤部位，致伤面积均为1.1 cm×1.1 cm，创面位于背部中央，创缘清楚，与创周正常皮肤分界明显。致伤距离由玻璃排气管两侧指示支架统一确定为0.5 cm。致伤后按每100 g体重4 ml腹腔注射生理盐水抗休克，创面用凡士林油纱加无菌棉球打包包扎，故有效地控制了除时间以外的各种影响因素。使用者可根据研究所需，以致伤时间为变量，借助于致伤时间来建立不同深度的烫伤模型。
, http://www.100md.com
烧伤或烫伤深度判定标准要明确一致。一般常以病理检查的组织学改变作为划分标准。其深度划分与临床上“三度四分法”基本一致，但关键问题是，深度是以伤后即时深度为准，还是以伤后热力作用消失、创面不再加深、致伤深度稳定后的深度为准?根据本研究结果，烫伤6～9 s者其即时创面为浅二度，10 ～14 s者为深二度，但至伤后24 h时，8 s和9 s的创面演变为深二度，13 s和14 s的创面演变为三度，48 h时的组织学改变与24 h者基本相同。所以以伤后即时的烫伤深度为准显然不妥，而应以伤后24 h烫伤深度稳定时的深度为标准，才能保证烫伤深度的一致性。致伤6～7 s、10～12 s以及15～18 s者，尽管也存在创面加深现象，但至伤后24 h和48 h其深度变化仍分别符合浅二度、深二度及三度的组织学改变，故我们选有各种烫伤深度致伤时间区间的下限：6 s、10 s、15 s作为建立浅二度、深二度和三度烫伤模型的致伤时间，获得了稳定的烫伤模型。另外，我们追踪观察了不同深度创面愈合时间及愈合后被毛生长情况，结果显示：6 s组(浅二度)创面于伤后10～12 d愈合，且有较均匀的被毛生长；10 s组(深二度)创面于伤后21～23 d愈合，虽有毛发生长，但稀疏，不均匀，从而更进一步证实了其可靠性。
采用本装置复制烫伤模型具有方法简单、使用方便、模型稳定、重复性好等优点，为建立小鼠不同深度烫伤模型提供了一个较为满意的方法。但使用时需要麻醉动物且仅适用于小动物为其不足。
作者简介：刘 毅，男，35岁，博士，主治医师，兰州军区兰州总医院
烧伤科，兰州，730050
收稿日期：1998-10-28, 百拇医药