4℃冰箱贮存皮肤的方法对皮片活力的影响

http://www.100md.com 《西北国防医学杂志》 1999年第1期

     作者：陈 璧 丘建光

    单位：陈 璧，解放军第四军医大学西京医院烧伤科，西安，710032 丘建光 解放军第四军医大学西京医院实验外科

    关键词：烧伤；皮肤；贮存；皮片活力

    4 分类号：R 644

    文献标识码：A

    文章编号：1007-8622(1999)01-0028-29

    手术剩下的少量皮肤，常用的贮存方法是冰箱贮存，如何提高冰箱贮存皮肤的活力呢?我们对4℃贮存方法进行研究，采用定量测定皮肤内琥珀酸脱氢酶(SDH)活性和动物自体皮回植的方法观察贮存方法对皮片活力的影响及在贮皮液内加入一定量的复方氨基酸溶液，经不同的时间贮存后，观察皮肤活力的改变，与相应组对比。
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    1 材料和方法

    1.1 材料：用白色小猪作实验动物，体重为10～15 kg，处死后剃毛，立即按常规切取0.35～0.4 mm的中厚皮片，将不同部位的皮片，经不同贮皮液处理后，分别放入普通冰箱。

    1.2 冰箱贮存方法：分为生理盐水和生理盐水加氨基酸两组。生理盐水组是将皮片浸泡于生理盐水中15 min，后将皮片对摺，创面相对，平摊在生理盐水纱布上，连同湿盐水纱布平放于无菌铝盒中。放置时采用两种方法：其一是单块对摺的皮片平放于铝盒；其二是四块对摺的皮片连同包裹的纱布重叠平放于铝盒，然后放入0～4℃冰箱内贮存。生理盐水加复方氨基酸组的浸泡和放置法与生理盐水组相同，只是贮皮液由9份生理盐水加一份静注用复方氨基酸溶液(日本Tanabcsciyaku有限股份公司出品)，每200 ml中含赖氨酸3 840 mg，苏氨酸1 400 mg，蛋氨酸1 360 mg，色氨酸600 mg，亮氨酸2 000 mg，异亮氨酸1 320 mg，苯丙氨酸1 920 mg，缬氨酸1 280 mg，精氨酸2 180 mg，组氨酸940 mg，甘氨酸1 200 mg，山梨糖醇10 000 mg)。经贮存3、7、14、21 d后，分别测定各组皮片的SDH活性，与新鲜猪皮的活性对比。
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    1.3 皮肤内琥珀酸脱氢酶活性的定量测定法：本实验参照Hershey氏法(J Histochemistry and Cytochem， 1958,6:191)和解放军304医院(中华整形烧伤外科杂志,1990,6:219)等单位介绍的方法，将皮片样本冲成直径为1.25 cm的圆形皮片，迅速称皮片重，将皮片切成8小块，装入桑氏主管底部，于桑氏管盖的侧弯部内注入0.1%氯化三苯四唑盐(TTC)溶液1 ml，盖在主管上，用吸引器抽吸3 min，负压40 mmHg，充氮气40 s，反复三次(图1)。

    图1 皮肤SDH活性测定抽吸充氮装置示意图

    后将侧弯部的TTC溶液倒入主管内，放入37℃恒温水浴锅中温育1 h，倒去主管内溶液，常温下加乙二醇乙醚2 ml，提取皮片内所形成的单四月 曰无 无(红色)，用分光光度计在波长490下，测定其光密度。每份样品同时做四管，取其平均值，计算方法如下：
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    贮存后皮片的SDH活性(%)＝×100

    1.4 自体皮片回植试验：用小白猪做实验动物，体重10～15 kg，麻醉剃毛，按常规消毒铺巾，于小白猪背部脊柱两旁切除2.5 cm×3 cm的皮肤，深达深筋膜，彻底止血，将冰箱贮存1周的两组分生理盐水和生理盐水加氨基酸组，自体皮片回植于小白猪。每组皮片间距为0.3～0.4 cm，按次序编号标记。植皮后打包包扎外缠绷带及石膏绷带固定。手术后5、10、15 d各换药一次，观察各组皮片存活情况。

    2 结果

    冰箱贮存皮片活力的变化：不同方法处理的冰箱贮存皮片SDH活性的变化。单层平放于铝盒的冰箱内贮存的生理盐水和生理盐水加氨基酸两组，于贮存后3、6、12、18 d，无菌操作下取皮片作SDH活性测定，每次共做2组，8份样本。以新鲜猪皮SDH活性100%，分别计算两组贮存不同时间后的皮肤SDH活性。生理盐水组冰箱3、6、12、18 d后皮肤的SDH活性分别为84%、38%、22%、13%；生理盐水加氨基酸组则为91%、54%、23%、12%。
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    结果表明，生理盐水加氨基酸组皮片的SDH活性比单纯用生理盐水组好。

    皮片重叠存放于冰箱内两组皮片SDH活力变化见表1。

    表1 冰箱贮存重叠存放法对皮肤活力的影响

    存放的

    层次

    贮存

    天数

    生理盐水

    生理盐水加氨基酸

    光密度平均值

    皮片SDH活性(%)
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    光密度平均值

    皮片SDH活性(%)

    第一层

    3

    0.1538

    83

    0.168

    91

    第二层

    5

    0.0295

    15

    0.037
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    19

    第三层

    9

    0.0193

    11

    0.0265

    15

    第四层

    13

    0.0432

    18

    0.067

    25
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    表1说明两组的第一层皮片SDH活力最强，第二层、三层即中间两层的活力皆陡然下降，第四层虽然贮存时间最长，但其活性却高于贮存时间较短的中间两层皮片。即中间两组皮片不仅比单层贮存法相应时间的皮片SDH活性低得多，而且比底层的皮片也低。

    不同方法处理的冰箱贮存自体皮片回植后的存活情况:冰箱贮存1周后的两组皮片回植到同一小白猪背部脊柱两旁，每组四块皮片每片为3 cm×2.5 cm，生理盐水组有两块大部分存活,两块完全坏死脱落；生理盐水加氨基酸组有两块全部存活，一块部分存活。一块坏死脱落，见表2。 表2 冰箱贮存1周的皮片回植后的存活情况

    动物编号

    生理盐水组

    生理盐水加氨基酸组

    植皮数(块)
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    存活数(块)

    植皮数(块)

    存活数(块)

    1号猪

    2

    3/4

    2

    1

    2号猪

    2
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    2/3

    2

    1

    合计

    4

    1

    4

    2
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    3 讨论

    皮肤贮存方法的研究国内外已有不少报道。我们对常用4℃冰箱贮存方法和皮肤保存液中加入少量氨基酸的作用进行了初步的实验观察。

    冰箱贮存皮片是目前常用的方法。刃厚皮片通常用湿盐水纱布包裹，0～4℃冰箱内保存。有报道此法能维持活力长达3～4周，也有人认为冰箱贮存14 d以后很少有临床价值。Lawrence氏的实验表明冰箱贮存14 d后皮肤呼吸活力及Na³²₂ SO₄的渗入均减少一半，四唑氮盐还原酶(绝大部分为琥珀酸脱氢酶)的活性于贮存7 d后降至25%。我们的实验观察，皮片的SDH活性与Lawrence的结果相似(略高)，冰箱贮存6 d后为38%、12 d后22%，而动物自体皮冰箱贮存1周后仅有部分存活。当然影响皮片存活的因素很多，但冰箱贮存较长时间后对皮片活力的影响也是重要因素之一。从临床应用情况看，冰箱贮存2周以上的皮片移植后存活的不多。因而冰箱贮存皮片尽量以不超过2周为宜。实验过程中我们还感到病房用的冰箱所贮存的皮片SDH活性比实验室冰箱保存的皮片活性要低。分析其原因，可能与病房的冰箱开关频繁、温度波动大有关。Lawrence氏用温度监视仪证明，打开冰箱门时，其温度即可上升3℃。因此，作为保存皮肤的冰箱应尽量少开关，或另加一些装置以克服冰箱开关时温度的波动。
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    关于皮片存放方法问题。本实验单块皮片对摺平放和多块对摺重叠平放的对比，多块重叠平放的效果差些，尤其是中间两层皮片的活性明显低于单层平放，同时也较其上层和底层的皮片活力差。说明多块皮片重叠平放时中层皮片的SDH活性低的原因主要是组织重叠过厚时，其中间部分不能迅速有效地降温。Lawrence氏将豚鼠尸体放入4℃冰箱内监测豚鼠耳朵温度降低的速率。薄薄的豚鼠耳朵竟需5～6 h才能降至冰箱所标定的温度。由此可见，重叠存放的皮片或用盐水纱布将皮片包卷多层的存放方法对保护皮肤活力是极不利的。

    皮肤保存液内添加氨基酸对深低温贮存皮肤可减轻不可逆性代谢损害，减少细胞内氨基酸的消耗。本实验在生理盐水中添加适量的复方氨基酸用于冰箱贮存，表明皮肤保存液内添加适量的氨基酸时，皮肤SDH活性均比相应组高，自身皮片回植实验的皮片存活率较相应组高或相同。我们发现一般冰箱贮存时添加少量复方氨基酸也可能提高贮存皮片的活力。静脉注射用复方氨基酸来源易，用量不多，费用不贵，且含有全部必需氨基酸，故在保存液中加入适量复方氨基酸很有益处。 作者简介：陈 璧，女，64岁,教授，解放军第四军医大学西京医院烧伤科，西安，710032

    收稿日期：1998-05-16 修回：1998-08-28, http://www.100md.com

    百拇医药网 http://www.100md.com/html/analecta/2003/08/31/76/276.htm