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编号:10276644
鼠脾虚证与胃窦及十二指肠组织5-HT及其受体的关系
http://www.100md.com 《第四军医大学学报》 2000年第5期
     作者:赵燕玲 夏天

    单位:赵燕玲(第四军医大学西京医院中医科,陕西 西安 710033);夏天(第四军医大学西京医院中医科,陕西 西安 710033)

    关键词:脾虚证;5-羟色胺;5-羟色胺受体;幽门窦;十二指肠

    第四军医大学学报000546 摘 要: 目的 探讨脾虚证与胃窦及十二指肠组织的5-HT及其受体的关系. 方法 成年SD大鼠30只随机分为3组. A组:脾虚组(n=10);B组:对照组(n=10);C组:四君子汤治疗组(n=10). 采用免疫组化和医学图像分析系统相结合的方法,测定各组大鼠胃窦及十二指肠5-HT细胞的数目、面积、平均灰度、细胞内5-HT含量及5-HT受体阳性细胞内5-HT受体的含量. 结果 ①A组大鼠胃窦5-HT细胞的数目(106±8).HP-1,面积(35.1±4.0) μm2,5-HT含量(0.337±0.050) AU,5-HT受体含量(0.345±0.075) AU均高于B组(P<0.05或P<0.01),平均灰度(120±8)较B组降低(P<0.05或P<0.01);A组大鼠十二指肠5-HT细胞的数目(109±5).HP-1,面积(30.2±2.2) μm2,5-HT含量(0.341±0.031) AU,5-HT受体含量(0.319±0.031) AU均高于B组(P<0.01),平均灰度(123±4)较B组降低(P<0.01). ②C组的上述指标测定结果与B组无显著差异. 结论 胃窦及十二指肠组织5-HT及其受体含量的增高可导致消化系统功能紊乱,有可能是脾虚证的一种重要病因或病机.
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    中图号:R256.3 文献标识码:A

    文章编号:1000-2790(2000)05-S0087-03

    Relationship of spleen-asthenia syndrome with 5-HT and 5- HT receptor in gastric antral and duodenal tissues

    ZHAO Yan-Ling, XIA Tian

    (Department of Traditional Chinese Medicine, Xijing Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710033, China)

    Abstract: AIM To study the relationship of spleen-asthenia syndrome with 5-hydroxytryptamine (5-HT) and 5-HT re-ceptor in gastric antral and duodenal tissues. METHODS Thirty SD adult rats were divided into three groups at random. Group A: spleen-asthenia group (n=10); group B: control group (n=10); group C: treated by sijunzi decoction group (n=10). The immunohistochemistry and MIPS were used to measure 5-HT cell number, square, mean grey level and the contents of 5-HT and 5-HT receptor in their positive cells in every rat's gastric antrum and duodenum. RESULTS ①In group A, rat gastric antrum 5-HT cell number (106±8).HP-1, square (35.1±4.0) μm2, the contents of 5-HT (0.337±0.050) AU, the contents of 5-HT receptor (0.345±0.075) AU were all higher than those in group B (P<0.05 or P<0.01), mean grey level (120±8) was lower than that in group B (P<0.05 or P<0.01); In group A, rat duodenum 5-HT cell number (109±5).HP-1, square (30.2±2.2) μm2, the contents of 5-HT (0.341±0.031) AU, the contents of 5-HT receptor (0.319±0.031) AU were all higher than those in group B (P<0.01), mean grey level (123±4) was lower than that in group B (P<0.01).②The measured parameters as above in group C didn't change significantly compared with those in group B (P>0.05). CONCLUSION The increase of 5-HT and 5-HT receptor's contents in gastric antrum and duodenum would lead to disturbance of the function of digestive system, it may be a kind of important pathogenesis or pathology of spleen-asthenia syndrome.
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    Keywords: spleen-asthenia syndrome; 5-hydroxytryptamine; 5-hydroxytryptamine receptor; pyloric antrum; duodenum

    0 引言

    中医“脾”与消化系统关系密切,脾虚时消化系统的功能处于紊乱状态[1]. 5-羟色胺(5-hydroxytrypatamine, 5-HT)作为体内一种重要的神经递质和调节物,在胃肠系统分布最多(多分布于胃窦及十二指肠),约占体内总量的90%,5-HT与其特异性受体(5-HT receptor, 5-HTR)相结合,对消化系统功能起着重要的调节作用,如胃肠运动、胃酸和粘液的分泌、局部粘膜血流量等[2]. 脾虚时血液及脑组织内5-HT含量增高[3,4],全胃粘膜5-HT细胞数目增多[5],但有关脾虚证与胃窦及十二指肠组织的5-HT及5-HT受体的相关性研究,尚未见报道. 我们拟通过观察脾虚大鼠胃窦及十二指肠的5-HT细胞、5-HT含量、5-HTR含量的变化,探讨脾虚证与胃窦及十二指肠组织5-HT及5-HT受体的相互关系.
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    1 材料和方法

    1.1 材料 大黄水煎剂,单味生大黄组成,浓缩煎至质量浓度为1 kg.L-1,本院中药房煎制;四君子汤煎剂,由党参、白术、茯苓、炙甘草4味中药按2∶2∶2∶1的质量比例组成,浓缩煎至质量浓度为4 kg.L-1,本院中药房煎制;兔抗鼠5-HT抗体及抗5-HT受体抗体,购于本校组织胚胎学教研室,使用效价为1∶1000和1∶200;兔ABC试剂盒,购于武汉博士德公司;医学图像分析系统,本校秦都口腔医学院病理科提供,型号HPIAS 1000,同济医科大学千屏影像工程公司生产; 正常成年SD大鼠30只,购自本校实验动物中心,雌雄各半,体质量(200±5) g,随机分为3组,每组10只.

    1.2 方法 造模方法参照王秀琴的方法[6]. 脾虚组(A):灌服大黄水煎剂,3 mL,2次.d-1 (10:00, 16:00),连续9 d. 正常对照组(B):灌服蒸馏水3 mL,2次.d-1(10:00, 16:00),连续9 d;四君子汤治疗组(C):前9 d造脾虚模型,方法同A组,然后灌服四君子汤煎剂,3 mL,2次.d-1 (10:00,16:00),连续9 d. 各组动物饲养环境相同,饮食不限,造模结束后禁食16 h,脊椎脱臼法处死,取胃窦组织、 胃与十二指肠交界下1 cm处1 cm长的十二指肠组织各1块,生理盐水洗净胃内容物. 所有标本经100 mL.L-1中性福尔马林液固定,脱水,石蜡包埋,制备成4 μm厚的连续切片. 采用ABC法进行免疫组化染色,染色步骤参照免疫组化ABC 试剂盒说明书. 阴性对照用PBS代替一抗. 取免疫组化标记的含有5-HT及5-HTR免疫反应阳性细胞的每张切片在高倍镜(10×40)下,随机将5个视野的图像由电视摄像系统输入图像分析系统(MIPS) 的主计算机,由主计算机系统进行图像处理,检测5-HT细胞的数目、面积及胞体平均灰度值,其中平均灰度无特定的计量单位. 同时使用图像分析仪中的光密度计测量5-HT及5-HTR 免疫反应阳性细胞内5-HT及5-HTR的含量,用任意单位(arbitrary unit, AU)表示.
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    统计学分析: 所有数据均以平均数±标准差(±s)表示,以组间t检验进行统计学处理.

    2 结果

    2.1 5-HT细胞的变化 A组胃窦及十二指肠组织5-HT细胞数目、面积的数值明显高于B组(P<0.05或P<0.01),平均灰度值低于B组(P<0.05或P<0.01). 平均灰度在图像分析中用来表示图像的透光率,分为256级, 最黑为0级,最亮为256级. 5-HT细胞的平均灰度值越小,说明其免疫组化染色越深,即细胞内5-HT含量越高(Tab 1).

    表1 胃窦及十二指肠组织5-HT细胞的变化

    Tab 1 Changes of 5-HT cells in gastric antral and duodenal tissues (n=10, ±s) Group
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    Gastric antrum

    Duodenum

    Number

    Square/μm2

    Grey level

    Number

    Square/μm2

    Grey level

    A: Spleen-asthenia

    106±8

    35.1±4.0
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    120±8

    109±5

    30.2±2.2

    123±4

    B: Control

    80±7b

    30.3±2.1b

    131±7b

    96±5b

    26.9±2.3b

    134±6b
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    C: Sijunzi decoction

    84±5b

    31.4±2.2a

    128±8a

    97±3b

    27.3±2.5a

    130±2b

    aP<0.05, bP<0.01 vs A.2.2 5-HT, 5-HTR含量的变化 A组胃窦及十二指肠组织5-HT,5-HTR含量均明显高于B组(P<0.05或P<0.01);C组胃窦及十二指肠组织5- HT,5-HTR含量明显低于A组(P<0.05或P<0.01),但与B组相比无显著性差异(Tab 2).
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    3 讨论

    5-HT是体内重要的神经递质和调节物,在胃肠系统含量最多,约占体内总量的90%,其受体主要分布于胃肠的粘膜上皮、腺上皮、粘膜下神经组织、 肌间神经组织及平滑肌等处[7,8]. 5-HT与其受体相互作用, 对消化系统功能起着重要的调节作用,给动物注射5-HT,发现外源性的5-HT可加快肠道蠕动, 使大鼠便量增多,小鼠腹泻,以上作用可被5-HTR拮抗剂抑制[9]. 此外,外源性的5-HT还具有抑制胃酸及胃蛋白酶的分泌,促进胃内容物的运输,参与肠液电解质的转运作用[2,10]. 而中医学“脾”的主要生理功能及病理表现与现代医学消化系统的关系密切,中医学认为“脾主运化”,即指脾对饮食物具有消化和吸收的功能. 脾虚时脾失健运,则机体的消化、吸收、运输等功能减退,据此我们推测脾虚证与胃肠道5-HT及其受体的含量变化可能有密切联系.

    表2 胃窦及十二指肠组织5-HT,5-HTR含量的变化
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    Tab 2 Changes of the contents of 5-HT,5-HTR in gastric antral and duodenal tissues (n=10, ±s, AU) Group

    Gastric antrum

    Duodenum

    5-HT

    5-HTR

    5-HT

    5-HTR

    A: Spleen-asthenia

    0.337±0.050
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    0.345±0.075

    0.341±0.031

    0.319±0.031

    B: Control

    0.268±0.058a

    0.271±0.011b

    0.306±0.015b

    0.287±0.010b

    C: Sijunzi decoction

    0.292±0.019a
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    0.290±0.027a

    0.310±0.033a

    0.291±0.026a

    aP<0.05, bP<0.01 vs A. 本实验结果表明,脾虚时胃窦及十二指肠组织的5-HT细胞数目增多,面积增大,平均灰度值降低,5-HT及5-HTR含量增加. 由于胃肠道5-HT具有抑制胃酸和胃蛋白酶的分泌,加快胃肠道收缩和蠕动等作用,此结果提示脾虚时出现的纳差,腹泻等典型的消化功能紊乱的症状与胃肠道内源性5-HT及其受体含量的增高有关. 对脾虚时胃肠道5-HT细胞-胃肠道内源性5-HT-5-HTR这一链条各个环节进行的客观、定量的分析,证实脾虚证与胃肠道内源性5-HT及其受体确有密切联系.

    四君子汤是健脾益气的经典代表方. 经四君子汤治疗后,大鼠的脾虚症状有较大改善,其胃肠道内源性5-HT及5-HTR的含量较脾虚时明显降低, 与正常组相比无显著性差异. 一方面通过四君子汤的治疗,反证了脾虚模型制造成功,另一方面从胃肠道5-HT及其受体与脾虚证的关系这一角度验证了四君子汤的健脾益气,改善消化系统功能的作用.
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    本研究结果表明,胃窦及十二指肠组织5-HT和5-HT受体含量的增高可能是脾虚证的重要病机.

    基金项目:国家自然科学基金资助项目(39270864)

    作者简介:赵燕玲(1975-), 女(汉族), 河南省浚县人. 硕士生(导师夏 天). Tel.(029)3375351 Email. tcmwsh@fmmu.edu.cn;

    参考文献:

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    [4] 周奇志, 宋开源, 赵纪岚et al. 实验性“脾虚证”大鼠脑内单胺递质的变化及其择时治疗效应[J]. 成都中医药大学学报,1998;21(3):36-38.

    [5] 王秀琴, 杨 进, 刘绍杰et al. 大鼠实验性脾虚证胃粘膜内分泌细胞变化的免疫组织化学研究[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志,1992;1(1):49-54.

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    收稿日期:1999-10-10; 修回日期:1999-11-13, 百拇医药