五种动物传代细胞系对裸鼠的致瘤性
作者：李六金 李秦 施新猷 赵世君 张海 师长宏
单位：李六金(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)；李秦(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)；施新猷(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)；赵世君(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)；张海(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)；师长宏(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)
关键词：传代细胞系；致癌/致瘤性；裸鼠
第四军医大学学报000630 摘要：目的 观察5种动物传代细胞系对裸鼠是否具有致瘤性. 方法 犬肾细胞系(MDCK)、非洲绿猴肾传代细胞系(Vero)、猫肾细胞系(F81)、地鼠肾传代细胞系(BHK21)和恒河猴肾细胞系(MA-104)分别培养后，选择对数生长期的细胞进行消化、离心、计数后，制备细胞悬液，接种裸鼠，定期观察，通过病理组织形态学观察判定结节是否具有肿瘤的特性. 结果 Vero、F81、MA-104接种裸鼠后全部有肿块形成，经病理形态学检查，均为炎性组织，其致瘤率为零. MDCK在30代以内，致瘤率为零，第30～66代致瘤率为10%～40%，BHK21致瘤率为100%. 结论 F81,Vero和MA-104属非致瘤性细胞系，MDCK属低致瘤性细胞系，但经冻融或超声波裂解后对裸鼠无致瘤性，BHK21属致瘤性细胞系，其正常细胞经裂解后仍具有致瘤性，而且具有稳定的重复性.
, 百拇医药
中图号：R363.14 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)06-0738-03
Evaluation of neoplastigenesis of 5 types of passage animal cell lines in nude mice
LI Liu-Jin Li Qin SHI Xin-You ZHAO Shi-Jun ZHANG Hai SHI Chang-Hong
(Laboratory Animal Health Product Research Center, Fourth Military Medical University, Xi'an 710033，China)
Abstract：AIM To identify whether the passage animal cell lines had neoplastigenesis in the nude mice. METHODS MDCK，Vero，F81，BHK21 and MA-104 cell lines were cultured respectively and harvested during logarithm growth, and then were counted and resuspended sterily before they were inoculated against nude mice. After a period of growth in nude mice, these cells were evaluated for neoplastigenesis by pathoanotomy and pathomorphology. RESULTS All of the nude mice had neoplasms after inoculation by the vero,F81, MA-104 passaging cells. The neoplasms were inflammatory tissue by pathological morphology, and their oncogene ratio was zero. While MDCK's oncogene ratio was zero inside the 30 passage, in the 30～60 passage cells, it became 10～40% and BHK's oncogene ratio was 100%. CONCLUSION F81,vero,and MA-104 belong to non-oncogenous cells. MDCK is a type of low oncogenous passage cell, but after being freezed-melted and cleavaged for 3 times or disposed with supersonic wave for 5 min, no oncogenesis can be observed, However,BHK21 can produce malignant tumor in nude mice after inoculation subcutaneously 9～21 days and has a stable repeatability.
, 百拇医药
Keywords:passage cell lines; neoplastigenesis;nude mice
0 引言
裸鼠皮下接种肿瘤细胞，可导致其产生肿瘤或组织癌变，且保持原发瘤的组织学形态、免疫学特点及其特有的染色体组型[1]. 根据裸鼠这一特点，试验观察动物传代细胞系对裸鼠是否具有致瘤(或癌)性. 文献检索表明，F81,MA-104细胞对裸鼠的致瘤性尚无资料可查；对MDCK和BHK21细胞的致瘤性研究尚少[2-4]；对Vero细胞的致瘤性研究较多[5]. 我们通过裸鼠致瘤性实验,从国内外现有的F81,Vero,MDCK,MA-104和BHK21等5种动物传代细胞系中筛选出非致瘤性细胞系，为非致瘤性细胞库的建立提供科学依据.
, 百拇医药 1 材料和方法
1.1 材料 BALB/c-nu/nu裸鼠，385只，雌雄兼用，2 mo龄，18～22 g，购自北京生物药品检定所实验动物中心和上海BK实验动物有限公司(均获国家SPF质量认证). 饲育条件：空气净化<10 000级的SPF环境,饮水、饲料和垫料经灭菌处理后传递投入，自由摄取，光照和气体交换速率按正常饲养繁育条件. Vero,F81,MDCK,BHK21,MA-104,Hela细胞、 鸡胚成纤维细胞(CEF)均由本中心提供.
1.2 方法
1.2.1 细胞悬液的制备与细胞接种 取对数生长期细胞，用2.5 g.L-1胰酶消化，收集转瓶培养细胞，1000 r.min-1离心8 min,弃上清液，加入不含血清的常规培养液，调节细胞浓度至每0.2 mL含108和107. 接种部位在裸鼠颈后或背部前1/3处皮下，接种量为0.2 mL/只.
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1.2.2 实验分组与观察测量 实验组设高浓度(5×108细胞.mL-1)组和低浓度(5×107细胞.mL-1)组，同时设阴性(CEF)和阳性(Hela)对照，每组5只. 分别从第5代开始接种裸鼠，每间隔5代接种1次，至65代. 定期观察并详细记录裸鼠精神、饮食、排便以及肿瘤生长情况，用游标卡尺测量肿块、结节的长度(a)、宽度(b). 观察期为28～90 d. 观察结束时剖检裸鼠，检查内脏器官(如肝、脾、肺、肾、淋巴结等)有无异常病变.
1.2.3 肿瘤组织切片的病理形态学观察 28 d断颈处死裸鼠，无菌取出裸鼠皮下肿瘤结节，用中性福尔马林作常规固定，制备石蜡包埋切片，HE染色，显微镜下观察.
1.2.4 判定标准 在阴性和阳性对照成立的前提下，待检细胞皮下接种裸鼠后无肿物生长或者虽有隆突状肿物生长但却是非肿瘤的，证明该细胞系无致瘤性，判为阴性(-)；若有隆突状肿物生长，经病理形态学观察、肿瘤鉴定以及其他有关实验(如软琼脂中克隆形成实验等)验证证实确为肿瘤的，则判为阳性(+).
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2 结果
2.1 Vero对裸鼠的致瘤性 Vero细胞组观察13～61 d，其肿块形成率在细胞浓度为5×107细胞.mL-1时为11/50(22%)，在细胞浓度为5×108细胞.mL-1时为16/50(32%)，病理切片检查后其致癌致瘤率均为零. 第65 代肿块组织切片光镜下可见，有两个皮下结节. 一结节退变坏死,坏死组织内可见散在分布的细胞碎片. 未见肿瘤细胞. 在皮下脂肪组织和横纹肌之间可见另一结节，为炎性退变组织. 而阳性对照组接种Hela细胞的5只裸鼠全部有肿块形成，致癌致瘤率为5/5(100%)；5只CEF阴性对照裸鼠无肿块形成，致癌致瘤率为零.
2.2 F81对裸鼠的致瘤性 F81细胞组观察15～41 d，其肿块形成率在细胞浓度为5×107细胞.mL-1和5×108细胞.mL-1时分别为6/45(13%)和8/45(18%)；致癌致瘤率均为零. 第65代肿块组织切片光镜下可见少量横纹肌、少量脂肪组织及一个结节. 结节主要有纤维细胞、纤维母细胞组成，结节内有大量的淋巴细胞、中性粒细胞，其间血管丰富，为炎性肉芽组织. 而阳性对照组接种Hela细胞的5只裸鼠全部有肿块形成，致癌致瘤率为5/5(100%)；5只CEF阴性对照裸鼠无肿块形成，致癌致瘤率为零.
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2.3 MDCK对裸鼠的致瘤性 MDCK细胞组观察15～39 d，结果表明，不论是5×107细胞.mL-1组还是5×108细胞.mL-1组，该细胞30代以内不具有致瘤性，其肿块形成率分别为16/50(32%)和21/50(42%)，致癌致瘤率均为零. 接种55代细胞后所致肿瘤组织切片可见皮下一椭圆形肿物，肿物组织一部分坏死，坏死组织大部分已被机化，并伴有炎性细胞浸润. 为坏死组织. 其余部分为皮肤组织和纤维化的肉芽组织. 另一结节大部分为梭形的纤维性肿瘤细胞. 瘤细胞异型性明显，可见核分裂相. 在梭形肿瘤细胞间可见肿瘤性的腺样结构. 梭形瘤细胞向横纹肌内呈浸润性生长，为纤维性肉瘤.
MDCK细胞经连续3次快速冻融或用超声波处理5 min后，接种裸鼠皮下，经31～168 d观察，未见有肿块形成，故MDCK细胞裂解物不具有致瘤性. 而阳性对照组接种Hela细胞的5只裸鼠全部有肿块形成，致癌致瘤率为5/5(100%)；5只CEF阴性对照裸鼠无肿块形成，致癌致瘤率为零.
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2.4 BHK21对裸鼠的致瘤性 BHK21不论是低代次还是高代次均可在皮下形成肿瘤结节，其肿块形成率和致瘤率均为45/45 (100%)，各代次之间差异不显著(P>0.01). 第40代肿瘤组织切片镜检显示，结节大部分区域为退变坏死的肿瘤组织. 肿瘤细胞呈弥漫散在分布，似横纹肌母细胞. 可见病理性核分裂相，为横纹肌样瘤样肿瘤.
而阳性对照组接种Hela细胞的5只裸鼠全部有肿块形成，致癌致瘤率为5/5(100%)；5只CEF阴性对照裸鼠无肿块形成，致癌致瘤率为零.
2.5 MA-104对裸鼠的致瘤性 MA-104细胞组分别以5×107.mL-1和5×108.mL-1浓度接种裸鼠，观察15～20 d后，其肿块形成率分别为3/35(9%)和11/35(31%)，第65代裸鼠瘤病理切片镜检表明，结节中央为退变坏死组织，周边为纤维组织增生，有炎性细胞浸润，血管增生并扩张充血，为坏死. 说明MA-104细胞不能使裸鼠致瘤致癌，即属非致瘤性细胞系.
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而阳性对照组接种Hela细胞的5只裸鼠全部有肿块形成，致癌致瘤率为5/5(100%)；5只CEF阴性对照裸鼠无肿块形成，致癌致瘤率为零.
3 讨论
自1969年Rygarrd和Povlsen首次将人结肠癌移植于裸鼠并获得成功以来，裸鼠在肿瘤学、免疫学、药品及生物制品的安全性评价领域占据愈来愈重要的地位. 鉴于裸鼠先天性胸腺缺失，胸腺依赖性免疫功能缺乏，或T、B淋巴细胞功能完全缺乏，故异种移植时不产生排斥反应. 国内外许多学者多选用裸鼠作为异种动物组织、细胞的移植和人类肿瘤异种动物组织、细胞的移植和人类肿瘤异种移植的首选对象，其结果真实可靠，重复性强已定为监察、检测各生物质量标准中的规程方法之一. 实验证明，裸鼠皮下接种已知可致瘤(或癌)性细胞系的细胞悬液，在特定环境、特定时间可生长成实体瘤，且保持原发瘤的组织学形态、免疫学特点及其特有的染色体组型. 实验研究者多以国际公认的Hela株(人类子宫颈癌细胞系)作为阳性对照；以鸡胚成纤维(CEF)细胞和幼地鼠原代肾细胞作为阴性对照；待检细胞为完整活细胞，或者为完整活细胞经过快速冻融(或超声波)裂解的细胞残骸. 将各传代细胞系(株)按代次(一般每隔5代或10代)分别对裸鼠作皮下接种. 检查各传代细胞接种裸鼠后有无肿块或结节形成，在阳性和阴性对照成立的前提下，若待检细胞接种裸鼠后有无肿块或结节生长，则无致瘤性，判为阴性(-)，即该传代细胞系(株)为非致瘤(或癌)性细胞系(株). 若待检细胞接种裸鼠皮下有肿物或结节生长，并经病理组织解剖及病理切片检查、肿瘤鉴定和裸鼠瘤体外再培养数代后作裸鼠移植瘤实验及其他实验(软琼脂中克隆形成实验等)证明为恶性肿瘤，则判为阳性(+)，即该细胞系(株)为致瘤(或癌)性细胞系(株). 本实验对F81,Vero,MDCK,MA-104,BHK21等不同传代代次细胞进行了裸鼠致瘤(或癌)性试验观察. 结果表明 F81,Vero,MA-104系非致瘤(或癌)性细胞系(株)；MDCK系低致瘤(或癌)性细胞系，而且经3次快速冻融裂解或用超声波裂解的细胞，对裸鼠作皮下接种，证明无致瘤(或癌)性，可初步考虑用于制造动物疫苗；BHK21系致瘤(或癌)性细胞系，其完整活细胞具有较高的致瘤(或癌)性，同时具有较高的重复性，这与软琼脂穿透抛锚实验和染色体组型分析的结果相一致.
, 百拇医药
基金项目：国家火炬计划[火炬发(1997)109号]
作者简介：李六金(1951-)，男(汉族)，陕西省合阳县人.硕士，副教授. Tel.(029)2513031 Email.liujin@fmmu.edu.cn
参考文献:
[1] 施新猷.医用实验动物学[M].西安：陕西科学技术出版社，1989：298-304.
[2] 殷 震,刘景华. 动物病毒学[M]. 北京：科学出版社,1997：11.
[3] Ridley AJ， Comoglin RM， Hall A et al. Regulation of scatter factor/hepatocyte growth factor responses by Ras, Rac, and Rho in MDCK cells[J]. Mol Cell Biol,1995;15(2):1110-1122.
, http://www.100md.com
[4] Lnoue Y,Lopez LB,Kawamoto S et al. Production of recombinant human monoclonal antibody using ras-amplified BHK-21 cells in a protein-free medium[J]. Biosci Biotechnol Biochem,1996; 60(5):811-817.
[5] Lanzrein M,Falnes PO,Sand Oet al. Structure function relationship of the ion channel formed by diphtheria toxin in Vero cell membranes[J]. J Membr Biol,1997;156(2):141-148.
收稿日期：2000-01-01
修回日期：2000-02-28, http://www.100md.com
单位：李六金(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)；李秦(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)；施新猷(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)；赵世君(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)；张海(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)；师长宏(第四军医大学实验动物研究中心，陕西 西安 710033)
关键词：传代细胞系；致癌/致瘤性；裸鼠
第四军医大学学报000630 摘要：目的 观察5种动物传代细胞系对裸鼠是否具有致瘤性. 方法 犬肾细胞系(MDCK)、非洲绿猴肾传代细胞系(Vero)、猫肾细胞系(F81)、地鼠肾传代细胞系(BHK21)和恒河猴肾细胞系(MA-104)分别培养后，选择对数生长期的细胞进行消化、离心、计数后，制备细胞悬液，接种裸鼠，定期观察，通过病理组织形态学观察判定结节是否具有肿瘤的特性. 结果 Vero、F81、MA-104接种裸鼠后全部有肿块形成，经病理形态学检查，均为炎性组织，其致瘤率为零. MDCK在30代以内，致瘤率为零，第30～66代致瘤率为10%～40%，BHK21致瘤率为100%. 结论 F81,Vero和MA-104属非致瘤性细胞系，MDCK属低致瘤性细胞系，但经冻融或超声波裂解后对裸鼠无致瘤性，BHK21属致瘤性细胞系，其正常细胞经裂解后仍具有致瘤性，而且具有稳定的重复性.
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中图号：R363.14 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)06-0738-03
Evaluation of neoplastigenesis of 5 types of passage animal cell lines in nude mice
LI Liu-Jin Li Qin SHI Xin-You ZHAO Shi-Jun ZHANG Hai SHI Chang-Hong
(Laboratory Animal Health Product Research Center, Fourth Military Medical University, Xi'an 710033，China)
Abstract：AIM To identify whether the passage animal cell lines had neoplastigenesis in the nude mice. METHODS MDCK，Vero，F81，BHK21 and MA-104 cell lines were cultured respectively and harvested during logarithm growth, and then were counted and resuspended sterily before they were inoculated against nude mice. After a period of growth in nude mice, these cells were evaluated for neoplastigenesis by pathoanotomy and pathomorphology. RESULTS All of the nude mice had neoplasms after inoculation by the vero,F81, MA-104 passaging cells. The neoplasms were inflammatory tissue by pathological morphology, and their oncogene ratio was zero. While MDCK's oncogene ratio was zero inside the 30 passage, in the 30～60 passage cells, it became 10～40% and BHK's oncogene ratio was 100%. CONCLUSION F81,vero,and MA-104 belong to non-oncogenous cells. MDCK is a type of low oncogenous passage cell, but after being freezed-melted and cleavaged for 3 times or disposed with supersonic wave for 5 min, no oncogenesis can be observed, However,BHK21 can produce malignant tumor in nude mice after inoculation subcutaneously 9～21 days and has a stable repeatability.
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Keywords:passage cell lines; neoplastigenesis;nude mice
0 引言
裸鼠皮下接种肿瘤细胞，可导致其产生肿瘤或组织癌变，且保持原发瘤的组织学形态、免疫学特点及其特有的染色体组型[1]. 根据裸鼠这一特点，试验观察动物传代细胞系对裸鼠是否具有致瘤(或癌)性. 文献检索表明，F81,MA-104细胞对裸鼠的致瘤性尚无资料可查；对MDCK和BHK21细胞的致瘤性研究尚少[2-4]；对Vero细胞的致瘤性研究较多[5]. 我们通过裸鼠致瘤性实验,从国内外现有的F81,Vero,MDCK,MA-104和BHK21等5种动物传代细胞系中筛选出非致瘤性细胞系，为非致瘤性细胞库的建立提供科学依据.
, 百拇医药 1 材料和方法
1.1 材料 BALB/c-nu/nu裸鼠，385只，雌雄兼用，2 mo龄，18～22 g，购自北京生物药品检定所实验动物中心和上海BK实验动物有限公司(均获国家SPF质量认证). 饲育条件：空气净化<10 000级的SPF环境,饮水、饲料和垫料经灭菌处理后传递投入，自由摄取，光照和气体交换速率按正常饲养繁育条件. Vero,F81,MDCK,BHK21,MA-104,Hela细胞、 鸡胚成纤维细胞(CEF)均由本中心提供.
1.2 方法
1.2.1 细胞悬液的制备与细胞接种 取对数生长期细胞，用2.5 g.L-1胰酶消化，收集转瓶培养细胞，1000 r.min-1离心8 min,弃上清液，加入不含血清的常规培养液，调节细胞浓度至每0.2 mL含108和107. 接种部位在裸鼠颈后或背部前1/3处皮下，接种量为0.2 mL/只.
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1.2.2 实验分组与观察测量 实验组设高浓度(5×108细胞.mL-1)组和低浓度(5×107细胞.mL-1)组，同时设阴性(CEF)和阳性(Hela)对照，每组5只. 分别从第5代开始接种裸鼠，每间隔5代接种1次，至65代. 定期观察并详细记录裸鼠精神、饮食、排便以及肿瘤生长情况，用游标卡尺测量肿块、结节的长度(a)、宽度(b). 观察期为28～90 d. 观察结束时剖检裸鼠，检查内脏器官(如肝、脾、肺、肾、淋巴结等)有无异常病变.
1.2.3 肿瘤组织切片的病理形态学观察 28 d断颈处死裸鼠，无菌取出裸鼠皮下肿瘤结节，用中性福尔马林作常规固定，制备石蜡包埋切片，HE染色，显微镜下观察.
1.2.4 判定标准 在阴性和阳性对照成立的前提下，待检细胞皮下接种裸鼠后无肿物生长或者虽有隆突状肿物生长但却是非肿瘤的，证明该细胞系无致瘤性，判为阴性(-)；若有隆突状肿物生长，经病理形态学观察、肿瘤鉴定以及其他有关实验(如软琼脂中克隆形成实验等)验证证实确为肿瘤的，则判为阳性(+).
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2 结果
2.1 Vero对裸鼠的致瘤性 Vero细胞组观察13～61 d，其肿块形成率在细胞浓度为5×107细胞.mL-1时为11/50(22%)，在细胞浓度为5×108细胞.mL-1时为16/50(32%)，病理切片检查后其致癌致瘤率均为零. 第65 代肿块组织切片光镜下可见，有两个皮下结节. 一结节退变坏死,坏死组织内可见散在分布的细胞碎片. 未见肿瘤细胞. 在皮下脂肪组织和横纹肌之间可见另一结节，为炎性退变组织. 而阳性对照组接种Hela细胞的5只裸鼠全部有肿块形成，致癌致瘤率为5/5(100%)；5只CEF阴性对照裸鼠无肿块形成，致癌致瘤率为零.
2.2 F81对裸鼠的致瘤性 F81细胞组观察15～41 d，其肿块形成率在细胞浓度为5×107细胞.mL-1和5×108细胞.mL-1时分别为6/45(13%)和8/45(18%)；致癌致瘤率均为零. 第65代肿块组织切片光镜下可见少量横纹肌、少量脂肪组织及一个结节. 结节主要有纤维细胞、纤维母细胞组成，结节内有大量的淋巴细胞、中性粒细胞，其间血管丰富，为炎性肉芽组织. 而阳性对照组接种Hela细胞的5只裸鼠全部有肿块形成，致癌致瘤率为5/5(100%)；5只CEF阴性对照裸鼠无肿块形成，致癌致瘤率为零.
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2.3 MDCK对裸鼠的致瘤性 MDCK细胞组观察15～39 d，结果表明，不论是5×107细胞.mL-1组还是5×108细胞.mL-1组，该细胞30代以内不具有致瘤性，其肿块形成率分别为16/50(32%)和21/50(42%)，致癌致瘤率均为零. 接种55代细胞后所致肿瘤组织切片可见皮下一椭圆形肿物，肿物组织一部分坏死，坏死组织大部分已被机化，并伴有炎性细胞浸润. 为坏死组织. 其余部分为皮肤组织和纤维化的肉芽组织. 另一结节大部分为梭形的纤维性肿瘤细胞. 瘤细胞异型性明显，可见核分裂相. 在梭形肿瘤细胞间可见肿瘤性的腺样结构. 梭形瘤细胞向横纹肌内呈浸润性生长，为纤维性肉瘤.
MDCK细胞经连续3次快速冻融或用超声波处理5 min后，接种裸鼠皮下，经31～168 d观察，未见有肿块形成，故MDCK细胞裂解物不具有致瘤性. 而阳性对照组接种Hela细胞的5只裸鼠全部有肿块形成，致癌致瘤率为5/5(100%)；5只CEF阴性对照裸鼠无肿块形成，致癌致瘤率为零.
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2.4 BHK21对裸鼠的致瘤性 BHK21不论是低代次还是高代次均可在皮下形成肿瘤结节，其肿块形成率和致瘤率均为45/45 (100%)，各代次之间差异不显著(P>0.01). 第40代肿瘤组织切片镜检显示，结节大部分区域为退变坏死的肿瘤组织. 肿瘤细胞呈弥漫散在分布，似横纹肌母细胞. 可见病理性核分裂相，为横纹肌样瘤样肿瘤.
而阳性对照组接种Hela细胞的5只裸鼠全部有肿块形成，致癌致瘤率为5/5(100%)；5只CEF阴性对照裸鼠无肿块形成，致癌致瘤率为零.
2.5 MA-104对裸鼠的致瘤性 MA-104细胞组分别以5×107.mL-1和5×108.mL-1浓度接种裸鼠，观察15～20 d后，其肿块形成率分别为3/35(9%)和11/35(31%)，第65代裸鼠瘤病理切片镜检表明，结节中央为退变坏死组织，周边为纤维组织增生，有炎性细胞浸润，血管增生并扩张充血，为坏死. 说明MA-104细胞不能使裸鼠致瘤致癌，即属非致瘤性细胞系.
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而阳性对照组接种Hela细胞的5只裸鼠全部有肿块形成，致癌致瘤率为5/5(100%)；5只CEF阴性对照裸鼠无肿块形成，致癌致瘤率为零.
3 讨论
自1969年Rygarrd和Povlsen首次将人结肠癌移植于裸鼠并获得成功以来，裸鼠在肿瘤学、免疫学、药品及生物制品的安全性评价领域占据愈来愈重要的地位. 鉴于裸鼠先天性胸腺缺失，胸腺依赖性免疫功能缺乏，或T、B淋巴细胞功能完全缺乏，故异种移植时不产生排斥反应. 国内外许多学者多选用裸鼠作为异种动物组织、细胞的移植和人类肿瘤异种动物组织、细胞的移植和人类肿瘤异种移植的首选对象，其结果真实可靠，重复性强已定为监察、检测各生物质量标准中的规程方法之一. 实验证明，裸鼠皮下接种已知可致瘤(或癌)性细胞系的细胞悬液，在特定环境、特定时间可生长成实体瘤，且保持原发瘤的组织学形态、免疫学特点及其特有的染色体组型. 实验研究者多以国际公认的Hela株(人类子宫颈癌细胞系)作为阳性对照；以鸡胚成纤维(CEF)细胞和幼地鼠原代肾细胞作为阴性对照；待检细胞为完整活细胞，或者为完整活细胞经过快速冻融(或超声波)裂解的细胞残骸. 将各传代细胞系(株)按代次(一般每隔5代或10代)分别对裸鼠作皮下接种. 检查各传代细胞接种裸鼠后有无肿块或结节形成，在阳性和阴性对照成立的前提下，若待检细胞接种裸鼠后有无肿块或结节生长，则无致瘤性，判为阴性(-)，即该传代细胞系(株)为非致瘤(或癌)性细胞系(株). 若待检细胞接种裸鼠皮下有肿物或结节生长，并经病理组织解剖及病理切片检查、肿瘤鉴定和裸鼠瘤体外再培养数代后作裸鼠移植瘤实验及其他实验(软琼脂中克隆形成实验等)证明为恶性肿瘤，则判为阳性(+)，即该细胞系(株)为致瘤(或癌)性细胞系(株). 本实验对F81,Vero,MDCK,MA-104,BHK21等不同传代代次细胞进行了裸鼠致瘤(或癌)性试验观察. 结果表明 F81,Vero,MA-104系非致瘤(或癌)性细胞系(株)；MDCK系低致瘤(或癌)性细胞系，而且经3次快速冻融裂解或用超声波裂解的细胞，对裸鼠作皮下接种，证明无致瘤(或癌)性，可初步考虑用于制造动物疫苗；BHK21系致瘤(或癌)性细胞系，其完整活细胞具有较高的致瘤(或癌)性，同时具有较高的重复性，这与软琼脂穿透抛锚实验和染色体组型分析的结果相一致.
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基金项目：国家火炬计划[火炬发(1997)109号]
作者简介：李六金(1951-)，男(汉族)，陕西省合阳县人.硕士，副教授. Tel.(029)2513031 Email.liujin@fmmu.edu.cn
参考文献:
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收稿日期：2000-01-01
修回日期：2000-02-28, http://www.100md.com