反相HPLC法测定生物介质中的泼尼松龙
作者：周瑾 梅其柄 周四元 李平 赵德化
单位：周瑾 梅其柄 周四元 赵德化(第四军医大学药理学教研室，陕西 西安 710033)；李平(第四军医大学唐都医院药剂科)
关键词：色谱法；高效液相；泼尼松龙；生物介质
第四军医大学学报001045 中图号：R972.4 文献标识码：B
文章编号：1000-2790(2000)10-1218-01
1 材料和方法
1.1 材料 SD大鼠，雌雄兼用，体质量250 g左右，由本校实验动物研究中心提供的二级动物(陕医动字第08-014号). 泼尼松龙(PL)(批号98-8-1)和供作内标的地塞米松(DX)(批号98-8-2)均由天津药业公司生产. 乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯. 器材用高效液相色谱仪(美国Beckman公司生产，包括125型泵，168型紫外检测器)及黄金系统软件.
, 百拇医药
1.2 方法 色谱采用C18反相柱(250 mm×4.6 mm). 以乙腈-柠檬酸三钠缓冲液(33∶67)为流动相. 流速为1.0 mL*min-1. 检测波长为254 nm. 取内容物稀释液(或血浆)分置于6只试管中，加入不同浓度的PL，再加入内标稀释液DX，饱和NaCl液及60 mL*L-1 H3PO4，用有机溶剂正戊烷-甲基叔丁醚(2∶3)提取，挥干，残留物溶于甲醇,进样，记录峰面积，由PL与内标的峰面积比对PL浓度分别作出工作曲线. 最后进行提取回收率，方法回收率及精密度测量.
2 结果 在选定的最佳条件下测定内容物中PL及血浆中PL的工作曲线回归方程分别为：内容物PL：Y=0.001317X+0.06268, r=0.9999, 线形范围0.15～6.35 μmol*L-1;血浆PL:Y=0.001042X-0.08804, r=0.9995 线形范围0.32
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～6.35 μmol*L-1. PL及内标DX的保留时间分别为6.98和2.76 min. PL的最低检出浓度为0.03714 μmol*L-1(按信噪比=3计).
PL的浓度分别为0.159，0.794，6.350 μmol*L-1时测定3次的平均回收率(%)分别为85.3±1.4，84.8±0.9，83.7±0.4(n=5). PL的浓度为1.587，3.175，6.350 μmol*L-1时测定 3次的平均方法回收率(%)分别为103.4±1.6，102.2±1.2，100.5±1.7(n=5)；日内精密度分别为1.5%，1.2%，1.7%(n=5)；日间精密度分别为1.8%，1.0%，2.1%(n=5).
3 讨论 由于内容物中杂质峰较多，与药物峰不易分离，国内所报道的测定泼尼松龙的方法[1]在测定内容物时分离效果不佳. 我们通过多次摸索，参照国外文献[2,3]，最后采用了C18 反相柱，用乙腈-柠檬酸三钠缓冲液(33∶67)作流动相，使药物峰与内容物及血浆的杂质峰能够完全分离. 我们根据文献报道，对比了用乙酸乙酯提取以及用正戊烷和甲基叔丁醚(2∶3)进行提取[3]，发现后者提取率高,挥发速度快；并且通过实验发现，内容物中加入磷酸后提取率有所提高，它不仅能终止酯解反应，而且有除蛋白的作用，因此我们建立了以上提取方法.
, 百拇医药
通常情况下，药物存在于大量生物介质中，样品内不仅药物浓度低，而且存在着众多干扰杂质，本方法就是针对这些特点建立的，结果表明其具有快速，灵敏，高效的优点，为泼尼松龙新剂型的体内药代研究建立了良好的分析方法，本方法也可推广用于其他类似药物.
作者简介：周瑾(1973-)，女(汉族)，陕西省西安市人. 硕士生(导师梅其炳). Tel.(029)3374556
参考文献：
[1] 秦永平，余 勤，罗志刚. 高效液相色谱法同时测定血清中氢化泼尼松和氢化可的松. 药物分析杂志，1995;15(4)：9-12.
[2] Hartley R, BrocklebankJT. Determination of prednisolone in plasma by high-performance liquid chromatography[J]. J Chromatogr,1982;232(1):406-412.
[3] Andrew D. Mcleod,David R. Friend,Thomas N.T. Glucocoticoid-dextran conjugates as potential prodrugs for colon-specific delivery:Hydrolysis in rat gastrointestinal tract contents. journal of pharmaceutical[J]. Sciences,1994,83(9):1284-1288.
收稿日期：2000-04-25； 修回日期：2000-06-26, 百拇医药
单位：周瑾 梅其柄 周四元 赵德化(第四军医大学药理学教研室，陕西 西安 710033)；李平(第四军医大学唐都医院药剂科)
关键词：色谱法；高效液相；泼尼松龙；生物介质
第四军医大学学报001045 中图号：R972.4 文献标识码：B
文章编号：1000-2790(2000)10-1218-01
1 材料和方法
1.1 材料 SD大鼠，雌雄兼用，体质量250 g左右，由本校实验动物研究中心提供的二级动物(陕医动字第08-014号). 泼尼松龙(PL)(批号98-8-1)和供作内标的地塞米松(DX)(批号98-8-2)均由天津药业公司生产. 乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯. 器材用高效液相色谱仪(美国Beckman公司生产，包括125型泵，168型紫外检测器)及黄金系统软件.
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1.2 方法 色谱采用C18反相柱(250 mm×4.6 mm). 以乙腈-柠檬酸三钠缓冲液(33∶67)为流动相. 流速为1.0 mL*min-1. 检测波长为254 nm. 取内容物稀释液(或血浆)分置于6只试管中，加入不同浓度的PL，再加入内标稀释液DX，饱和NaCl液及60 mL*L-1 H3PO4，用有机溶剂正戊烷-甲基叔丁醚(2∶3)提取，挥干，残留物溶于甲醇,进样，记录峰面积，由PL与内标的峰面积比对PL浓度分别作出工作曲线. 最后进行提取回收率，方法回收率及精密度测量.
2 结果 在选定的最佳条件下测定内容物中PL及血浆中PL的工作曲线回归方程分别为：内容物PL：Y=0.001317X+0.06268, r=0.9999, 线形范围0.15～6.35 μmol*L-1;血浆PL:Y=0.001042X-0.08804, r=0.9995 线形范围0.32
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～6.35 μmol*L-1. PL及内标DX的保留时间分别为6.98和2.76 min. PL的最低检出浓度为0.03714 μmol*L-1(按信噪比=3计).
PL的浓度分别为0.159，0.794，6.350 μmol*L-1时测定3次的平均回收率(%)分别为85.3±1.4，84.8±0.9，83.7±0.4(n=5). PL的浓度为1.587，3.175，6.350 μmol*L-1时测定 3次的平均方法回收率(%)分别为103.4±1.6，102.2±1.2，100.5±1.7(n=5)；日内精密度分别为1.5%，1.2%，1.7%(n=5)；日间精密度分别为1.8%，1.0%，2.1%(n=5).
3 讨论 由于内容物中杂质峰较多，与药物峰不易分离，国内所报道的测定泼尼松龙的方法[1]在测定内容物时分离效果不佳. 我们通过多次摸索，参照国外文献[2,3]，最后采用了C18 反相柱，用乙腈-柠檬酸三钠缓冲液(33∶67)作流动相，使药物峰与内容物及血浆的杂质峰能够完全分离. 我们根据文献报道，对比了用乙酸乙酯提取以及用正戊烷和甲基叔丁醚(2∶3)进行提取[3]，发现后者提取率高,挥发速度快；并且通过实验发现，内容物中加入磷酸后提取率有所提高，它不仅能终止酯解反应，而且有除蛋白的作用，因此我们建立了以上提取方法.
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通常情况下，药物存在于大量生物介质中，样品内不仅药物浓度低，而且存在着众多干扰杂质，本方法就是针对这些特点建立的，结果表明其具有快速，灵敏，高效的优点，为泼尼松龙新剂型的体内药代研究建立了良好的分析方法，本方法也可推广用于其他类似药物.
作者简介：周瑾(1973-)，女(汉族)，陕西省西安市人. 硕士生(导师梅其炳). Tel.(029)3374556
参考文献：
[1] 秦永平，余 勤，罗志刚. 高效液相色谱法同时测定血清中氢化泼尼松和氢化可的松. 药物分析杂志，1995;15(4)：9-12.
[2] Hartley R, BrocklebankJT. Determination of prednisolone in plasma by high-performance liquid chromatography[J]. J Chromatogr,1982;232(1):406-412.
[3] Andrew D. Mcleod,David R. Friend,Thomas N.T. Glucocoticoid-dextran conjugates as potential prodrugs for colon-specific delivery:Hydrolysis in rat gastrointestinal tract contents. journal of pharmaceutical[J]. Sciences,1994,83(9):1284-1288.
收稿日期：2000-04-25； 修回日期：2000-06-26, 百拇医药