一氧化氮与亚硝基硫醇相互转化机制的研究
作者：田亚平 Betts WH
单位：解放军总医院生化科，北京 100853 田亚平 Rheumatology Unit, The Queen Elizabeth Hospital, South Australia 5011 Betts WH
关键词：硫醇；亚硝基硫醇；一氧化氮气体；毛细管电泳；化学发光；光谱扫描
军医进修学院学报990402 摘要 目的：探讨一氧化氮(.NO)与亚硝基硫醇间的相互转化机制。方法：应用光谱扫描、毛细管电泳和化学发光等分析技术对.NO和亚硝基硫醇(R—SNO)间的相互关系进行系统研究。结果：.NO在含氧实验体系极不稳定，迅速被氧化为亚硝酸盐，并进而在微酸性条件下与还原性巯基结合为R—SNO。R—SNO可自发而缓慢的持续释放.NO，且此释放速率由于自由基的存在而加速。结论：进一步从理化性质上为内皮细胞衍生舒血管因子是亚硝基复合物的学说提供了证据。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R 34
The relationship studies between the nitric oxide and S-nitrosothiols
Tian Yaping, Betts WH
(Department of Clinical biochemistry, General Hospital of PLA, Beijing 100853)
Abstract Objective:to explore the relationship between nitric oxide(.NO) and S-nitrosothiols. Methods:spectrophotometer, capillary electrophoresis and chemiluminescence methods have been used to study the oxidative process of .NO and the stability of S-nitrosothiols. Results:authentic .NO will be quickly oxidized by oxygen and mainly forming nitrite, which is very stable in neutral pH condition. When the system pH decreased, a very fast formation of S-nitrosothiols has been determined. S-nitrosothiols also could be spontaneously releasing .NO, which is stimulated by oxygen free radicals. Conclusion:it is further provide the evidence to support the hypothesis that EDRF is nitroso-complexes.
, 百拇医药
Key words reduced thiols; S-nitrosothiols； authentic nitric oxide; capillary electrophoresis; chemiluminescence; spectrophotometer
自 80 年代末Palmer和Ignarro等报道内皮细胞衍生舒血管因子(endothelium-derived relaxing factor, EDRF)的本质是一氧化氮气体(nitric oxide, .NO)以来〔1，2〕，数以千计的有关这个易扩散自由基气体小分子化合物的研究论文相继发表，发现它具有多种生物调节活性〔3，4〕，同时学者们发现许多亚硝基硫醇类(S-nitrosothiols, R—SNO)复合物也具有介导血管平滑肌舒张等生物活性〔5〕，且不同种类的R—SNO具类似作用〔6〕。因此提出了EDRF是亚硝基复合物的学说。本研究的目的是为了进一步探讨.NO与R—SNO的相互关系及EDRF的本质。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 试剂 L-半胱氨酸和亚硝酸钠购自Sigma公司；还原型谷胱甘肽和HBSS(Hank′s balanced saline solution)购自Boehringer Mannheim GmbH公司；磷酸盐购自AJAX Chemicals公司。纯·NO气体购自Matheson Gas Products-UN 1660公司。
1.2 方法
1.2.1 亚硝酸盐和硝酸盐测定方法 以Boehringer Mannheim公司生产的硝酸盐还原酶试剂盒还原硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐以Griess试剂测定。
1.2.2 毛细管电泳法测定R—SNO 应用Water Millipore Quanta 400 型毛细管电泳系统作为分析仪器，pH 2.5， 10 mmol/L 磷酸盐缓冲液为电泳缓冲液。电泳实验条件：应用 35 cm × 50 μm 内径的硅化毛细管柱， 214 nm 紫外监测，以电迁移法在 14 kV 向毛细管柱上样 10 s，用正性电源，电泳电压为 16 kV，电泳时间为 20 min。
, 百拇医药
1.2.3 化学发光法.NO连续观测系统 按我们以前报道的方法进行测定，在外反应池中加入待测溶液，以氮气为流动气体连续冲气并用发光测定仪(packard picolite)测定流动气中·NO所介导的化学发光信号。
1.2.4 紫外可见分光光谱扫描 应用BECKMAN DU-600 紫外可见分光光计度，扫描范围 200～600 nm，扫描速度 240 nm/min，光径 1.0 cm。
2 结 果
2.1 .NO在含氧溶液中被氧化为亚硝酸盐 用pH 7.4 的HBSS缓冲液配制 20 mmol/L 的L-半胱氨酸，先以氮气通入此溶液脱氧 10 min，然后通入.NO气体 5 min。以Griess试剂准确测定此溶液的亚硝酸盐浓度为 3.2 mmol/L，同时用硝酸盐还原酶法测定该溶液中硝酸盐浓度，未见可测量硝酸盐产生。
, http://www.100md.com
2.2 pH依赖性生成R—SNO 以光谱扫描方法测定前述溶液，未见R—SNO的特异吸收峰 (335 nm)，当用 0.1 mol/L HCl 将此溶液酸化为 pH 6.0， 4.5 和 3.5 后，在 335 nm 有一个迅速产生的吸收峰 (1 min 之内)，且此峰随着溶液 pH 的降低而增加(图 1)。这表明R—SNO的产生是pH依赖性的，在中性条件不能产生R—SNO。
图1 NO在R—SH溶液中仅生成NO2-，降低pH迅速生成R—SNO
2.3 还原性巯基与R—SNO间迅速转亚硝基 混合等量体积的 1 mmol/L (终浓度)L-半胱氨酸和亚硝酸盐于 pH 2.5 的电泳缓冲液中，置室温 30 min 后将此溶液用毛细管电泳法进行分析，结果显示，几乎所有的L-半胱氨酸被亚硝基化为S-亚硝基-L-半胱氨酸(CysNO)，在此溶液中加入还原性谷胱甘肽(GSH，终浓度为 1 mmol/L)后，立即电泳分析即发现有约 50% 的S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)生成，并同时伴随CysNO浓度的降低。
, 百拇医药
2.4 R—SNO可缓慢、自发的释放·NO 将 1.0 mmol/L GSH 和 0.5 mmol/L 亚硝酸钠(均为终浓度)混溶于 pH 2.5， 10 mmol/L NaH2PO4缓冲液中并放置室温 30 min 以制备GSNO溶液，取此溶液 2 ml 加入一 5 ml 注射器中，由下端通入氮气，气体流速为 10 ml/min，连续冲气，并分别于 0 h、 3 和 7 h 分别取样 50 μl 毛细管电泳检测溶液中各成分的变化。图 2 显示当GSH和亚硝酸钠混合后，约 50% 的GSH被亚硝基化为GSNO，当上述溶液通气氮气不同时间后，发现GSNO的浓度于 3 和 7 h 分别降低 1/5 和 1/3。同时伴随不断生成的GSSG。此结果表明R—SNO自发释放·NO的速度是比较缓慢和持久的，其反应过程如下：
2R—SNO R—SS—R+2·NO
, 百拇医药
图2 GSNO在氮气连续冲气条件下稳定性
2.5 自由基可促进R—SNO释放.NO 用前述制备的GSNO溶液 0.5 ml 加入化学发光法.NO检测系统的外反应池中连续记录所释放.NO介导的化学发光的变化，结果表明此溶液可持续释放.NO达数十分钟，当在此溶液中加入次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶氧自由基产生体系，可使发光强度明显增加，表明自由基可促进·NO的释放。
3 讨 论
目前一般认为在生物体内.NO直接与鸟苷酸环化酶上的卟啉铁结合使该酶激活催化产生大量cGMP从而介导血管舒张〔7〕。同时亦有报道指出·NO激活GC酶的过程依赖于R—SH的存在〔8〕，而R—SNO对GC酶的激活却不依赖于.NO的释放〔9〕。这在一定程度上表明R—SH在.NO所致GC酶激活过程中是必需的。由于·NO是一易扩散的自由基气体分子，在有氧环境中极易被氧化生成二氧化氮(.NO2)〔10〕。在生物体系中分布着丰富的氧气或活性氧，如果有自由.NO分子生成就会很快被氧化成.NO2。由于此.NO2亦是自由基，它易于同另一.NO结合成三氧化二氮(N2O3)并进而水解产生两分子亚硝酸(HNO2)。在生物体的中性环境中，缓冲体系将使HNO2以亚硝酸盐(NO-2)形式稳定存在于血液和体液中。实验表明NO-2可数日稳定存在于 pH 7.4 的血浆中，亦有报道指出人类血浆中可测到微摩尔水平的NO-〔11〕2。由此推论有关报道指出的将.NO气体通入还原性巯基溶液即可制备R—SNO的方法是由于.NO氧化产生的HNO2与还原性巯基结合为R—SNO，而不是.NO对R—SH的直接亚硝基化。
, 百拇医药
纯R—SNO是化学性质较稳定的一类化合物，在生物体系中，众多的蛋白质、酶类、小分子多肽和巯基类化合物等均含有多量还原性巯基，这些R2—SH都可与R1—SNO发生—H基团和—NO基团的交换从而生成一新的R2—SNO和另一新的R1—SH，其反应过程如下反应方程式所示：
此转亚硝基过程非常迅速，当在CysNO溶液中加入还原性谷胱甘肽(GSH)后，溶液中将很快生成部分L-半胱氨酸和GSNO，此时反应体系中同时存在两种硫醇化合物和两种R—SNO。这种亚硝基基团在不同巯基分子上的快速移动保证了产生的亚硝基基团被快速而稳定的由生成部位转运至所需部位。因此，机体内R—SH的亚硝基化水平可能是控制GC酶活性的重要因素。
Geng等〔12〕的实验结果也指出：用细胞因子刺激平滑肌细胞后，顺磁共振波谱仪测定结果显示细胞内大量的产生了亚硝基化铁卟啉复合物，并且随着反应时间的延长和细胞因子剂量的增加，这些产生的硝基化复合物逐渐转化为非卟啉铁R—SNO复合物。因此即使在生物体系内合成的亦并非自由.NO分子气体，而可能是结合状态的亚硝基基团，它很易通过转亚硝基作用被传送到所需的酶活性中心部位。综上所述，.NO和R—SNO可在溶液中相互转化，但由于.NO在含有氧气的溶液中极不稳定，所以，亚硝酸盐和R—SNO可能是生物体内·NO的稳定存在形式。
, http://www.100md.com
国家自然科学基金资助项目，批准号 39880005
参考文献
1 Palmer RM, Ferrige AG, Moncada S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor. Nature, 1987,327(6122):524
2 Ignarro LJ, Buga GM, Wood KS et al. Endothelium-derived relaxing factor produced and released from artery and vein is nitric oxide. Proc Natl Acad Sci USA, 1987,84(24):9265
, http://www.100md.com
3 Chabaud F, Danna M. and Beny JL. A vascular smooth muscles nitric oxide relaxation by a mechanism distinct of calcium changes. Life Sci, 1994,54(19):1449
4 Kaufmann MA, Castelli I, Pargger H et al. Nitric oxide dose-response study in the isolated perfused rat kidney after inhibition of endothelium derived relaxing factor synthesis: the role of serum albumin. J Pharmacol Exp Ther, 1995, 273(2):855
5 Myers PR, Minor RL, Guerra R et al. Vasorelaxant properties of the endothelium-derived relaxing factor more closely resemble S-nitrosocysteine than nitric oxide. Nature, 1990,345(6271):161
, 百拇医药
6 Kowaluk EA, Fung HL. Spontaneous liberation of nitric oxide cannot account for in vitro vascular relaxation by S-nitrosothiols. J Pharmacol Exp Ther, 1990,255(3):1256
7 Garbers DL. The guanylyl cyclase receptor family. New Biol, 1990,2(6):499
8 Braughler JM. Soluble guanylate cyclase activation by nitric oxide and its reversal. Involvement of sulfhydryl group oxidation and reduction. Biochem Pharmacol, 1983,32(5):811
, 百拇医药
9 Smith MP, Humphrey SJ, Kerr SW et al. In vitro vasorelaxant and in vivo cardiovascular effects of S-nitrosothiols: comparison to and cross tolerance with standard nitrovasodilators. Methods Find Exp Clin Pharmacol, 1994,16(5):323
10 Carmichael AJ, Steel Goodwin L, Gray B et al. Reactions of active oxygen and nitrogen species studied by EPR and spin trapping. Free Radic Res Commol/Lun, 1993, 19(Suppl 1):S1
11 Tsikas D, Boger RH, Bode Boger SM et al. Quantification of nitrite and nitrate in human urine and plasma as pentafluorobenzyl derivatives by gas chromatography-mass spectrometry using their 15N-labelled analogs. J Chromatogr B Biomed, Appl, 1994,661(2):185
12 Geng YJ, Petersson AS, Wennmalm A et al. Cytokine-induced expression of nitric oxide synthase results in nitrosylation of heme and nonheme iron proteins in vascular smooth muscule cells. Experimental Cell Research, 1994,214(1):418
(1999—05—05收稿，1999—06—23修回), 百拇医药
单位：解放军总医院生化科，北京 100853 田亚平 Rheumatology Unit, The Queen Elizabeth Hospital, South Australia 5011 Betts WH
关键词：硫醇；亚硝基硫醇；一氧化氮气体；毛细管电泳；化学发光；光谱扫描
军医进修学院学报990402 摘要 目的：探讨一氧化氮(.NO)与亚硝基硫醇间的相互转化机制。方法：应用光谱扫描、毛细管电泳和化学发光等分析技术对.NO和亚硝基硫醇(R—SNO)间的相互关系进行系统研究。结果：.NO在含氧实验体系极不稳定，迅速被氧化为亚硝酸盐，并进而在微酸性条件下与还原性巯基结合为R—SNO。R—SNO可自发而缓慢的持续释放.NO，且此释放速率由于自由基的存在而加速。结论：进一步从理化性质上为内皮细胞衍生舒血管因子是亚硝基复合物的学说提供了证据。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R 34
The relationship studies between the nitric oxide and S-nitrosothiols
Tian Yaping, Betts WH
(Department of Clinical biochemistry, General Hospital of PLA, Beijing 100853)
Abstract Objective:to explore the relationship between nitric oxide(.NO) and S-nitrosothiols. Methods:spectrophotometer, capillary electrophoresis and chemiluminescence methods have been used to study the oxidative process of .NO and the stability of S-nitrosothiols. Results:authentic .NO will be quickly oxidized by oxygen and mainly forming nitrite, which is very stable in neutral pH condition. When the system pH decreased, a very fast formation of S-nitrosothiols has been determined. S-nitrosothiols also could be spontaneously releasing .NO, which is stimulated by oxygen free radicals. Conclusion:it is further provide the evidence to support the hypothesis that EDRF is nitroso-complexes.
, 百拇医药
Key words reduced thiols; S-nitrosothiols； authentic nitric oxide; capillary electrophoresis; chemiluminescence; spectrophotometer
自 80 年代末Palmer和Ignarro等报道内皮细胞衍生舒血管因子(endothelium-derived relaxing factor, EDRF)的本质是一氧化氮气体(nitric oxide, .NO)以来〔1，2〕，数以千计的有关这个易扩散自由基气体小分子化合物的研究论文相继发表，发现它具有多种生物调节活性〔3，4〕，同时学者们发现许多亚硝基硫醇类(S-nitrosothiols, R—SNO)复合物也具有介导血管平滑肌舒张等生物活性〔5〕，且不同种类的R—SNO具类似作用〔6〕。因此提出了EDRF是亚硝基复合物的学说。本研究的目的是为了进一步探讨.NO与R—SNO的相互关系及EDRF的本质。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 试剂 L-半胱氨酸和亚硝酸钠购自Sigma公司；还原型谷胱甘肽和HBSS(Hank′s balanced saline solution)购自Boehringer Mannheim GmbH公司；磷酸盐购自AJAX Chemicals公司。纯·NO气体购自Matheson Gas Products-UN 1660公司。
1.2 方法
1.2.1 亚硝酸盐和硝酸盐测定方法 以Boehringer Mannheim公司生产的硝酸盐还原酶试剂盒还原硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐以Griess试剂测定。
1.2.2 毛细管电泳法测定R—SNO 应用Water Millipore Quanta 400 型毛细管电泳系统作为分析仪器，pH 2.5， 10 mmol/L 磷酸盐缓冲液为电泳缓冲液。电泳实验条件：应用 35 cm × 50 μm 内径的硅化毛细管柱， 214 nm 紫外监测，以电迁移法在 14 kV 向毛细管柱上样 10 s，用正性电源，电泳电压为 16 kV，电泳时间为 20 min。
, 百拇医药
1.2.3 化学发光法.NO连续观测系统 按我们以前报道的方法进行测定，在外反应池中加入待测溶液，以氮气为流动气体连续冲气并用发光测定仪(packard picolite)测定流动气中·NO所介导的化学发光信号。
1.2.4 紫外可见分光光谱扫描 应用BECKMAN DU-600 紫外可见分光光计度，扫描范围 200～600 nm，扫描速度 240 nm/min，光径 1.0 cm。
2 结 果
2.1 .NO在含氧溶液中被氧化为亚硝酸盐 用pH 7.4 的HBSS缓冲液配制 20 mmol/L 的L-半胱氨酸，先以氮气通入此溶液脱氧 10 min，然后通入.NO气体 5 min。以Griess试剂准确测定此溶液的亚硝酸盐浓度为 3.2 mmol/L，同时用硝酸盐还原酶法测定该溶液中硝酸盐浓度，未见可测量硝酸盐产生。
, http://www.100md.com
2.2 pH依赖性生成R—SNO 以光谱扫描方法测定前述溶液，未见R—SNO的特异吸收峰 (335 nm)，当用 0.1 mol/L HCl 将此溶液酸化为 pH 6.0， 4.5 和 3.5 后，在 335 nm 有一个迅速产生的吸收峰 (1 min 之内)，且此峰随着溶液 pH 的降低而增加(图 1)。这表明R—SNO的产生是pH依赖性的，在中性条件不能产生R—SNO。
图1 NO在R—SH溶液中仅生成NO2-，降低pH迅速生成R—SNO
2.3 还原性巯基与R—SNO间迅速转亚硝基 混合等量体积的 1 mmol/L (终浓度)L-半胱氨酸和亚硝酸盐于 pH 2.5 的电泳缓冲液中，置室温 30 min 后将此溶液用毛细管电泳法进行分析，结果显示，几乎所有的L-半胱氨酸被亚硝基化为S-亚硝基-L-半胱氨酸(CysNO)，在此溶液中加入还原性谷胱甘肽(GSH，终浓度为 1 mmol/L)后，立即电泳分析即发现有约 50% 的S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)生成，并同时伴随CysNO浓度的降低。
, 百拇医药
2.4 R—SNO可缓慢、自发的释放·NO 将 1.0 mmol/L GSH 和 0.5 mmol/L 亚硝酸钠(均为终浓度)混溶于 pH 2.5， 10 mmol/L NaH2PO4缓冲液中并放置室温 30 min 以制备GSNO溶液，取此溶液 2 ml 加入一 5 ml 注射器中，由下端通入氮气，气体流速为 10 ml/min，连续冲气，并分别于 0 h、 3 和 7 h 分别取样 50 μl 毛细管电泳检测溶液中各成分的变化。图 2 显示当GSH和亚硝酸钠混合后，约 50% 的GSH被亚硝基化为GSNO，当上述溶液通气氮气不同时间后，发现GSNO的浓度于 3 和 7 h 分别降低 1/5 和 1/3。同时伴随不断生成的GSSG。此结果表明R—SNO自发释放·NO的速度是比较缓慢和持久的，其反应过程如下：
2R—SNO R—SS—R+2·NO
, 百拇医药
图2 GSNO在氮气连续冲气条件下稳定性
2.5 自由基可促进R—SNO释放.NO 用前述制备的GSNO溶液 0.5 ml 加入化学发光法.NO检测系统的外反应池中连续记录所释放.NO介导的化学发光的变化，结果表明此溶液可持续释放.NO达数十分钟，当在此溶液中加入次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶氧自由基产生体系，可使发光强度明显增加，表明自由基可促进·NO的释放。
3 讨 论
目前一般认为在生物体内.NO直接与鸟苷酸环化酶上的卟啉铁结合使该酶激活催化产生大量cGMP从而介导血管舒张〔7〕。同时亦有报道指出·NO激活GC酶的过程依赖于R—SH的存在〔8〕，而R—SNO对GC酶的激活却不依赖于.NO的释放〔9〕。这在一定程度上表明R—SH在.NO所致GC酶激活过程中是必需的。由于·NO是一易扩散的自由基气体分子，在有氧环境中极易被氧化生成二氧化氮(.NO2)〔10〕。在生物体系中分布着丰富的氧气或活性氧，如果有自由.NO分子生成就会很快被氧化成.NO2。由于此.NO2亦是自由基，它易于同另一.NO结合成三氧化二氮(N2O3)并进而水解产生两分子亚硝酸(HNO2)。在生物体的中性环境中，缓冲体系将使HNO2以亚硝酸盐(NO-2)形式稳定存在于血液和体液中。实验表明NO-2可数日稳定存在于 pH 7.4 的血浆中，亦有报道指出人类血浆中可测到微摩尔水平的NO-〔11〕2。由此推论有关报道指出的将.NO气体通入还原性巯基溶液即可制备R—SNO的方法是由于.NO氧化产生的HNO2与还原性巯基结合为R—SNO，而不是.NO对R—SH的直接亚硝基化。
, 百拇医药
纯R—SNO是化学性质较稳定的一类化合物，在生物体系中，众多的蛋白质、酶类、小分子多肽和巯基类化合物等均含有多量还原性巯基，这些R2—SH都可与R1—SNO发生—H基团和—NO基团的交换从而生成一新的R2—SNO和另一新的R1—SH，其反应过程如下反应方程式所示：
此转亚硝基过程非常迅速，当在CysNO溶液中加入还原性谷胱甘肽(GSH)后，溶液中将很快生成部分L-半胱氨酸和GSNO，此时反应体系中同时存在两种硫醇化合物和两种R—SNO。这种亚硝基基团在不同巯基分子上的快速移动保证了产生的亚硝基基团被快速而稳定的由生成部位转运至所需部位。因此，机体内R—SH的亚硝基化水平可能是控制GC酶活性的重要因素。
Geng等〔12〕的实验结果也指出：用细胞因子刺激平滑肌细胞后，顺磁共振波谱仪测定结果显示细胞内大量的产生了亚硝基化铁卟啉复合物，并且随着反应时间的延长和细胞因子剂量的增加，这些产生的硝基化复合物逐渐转化为非卟啉铁R—SNO复合物。因此即使在生物体系内合成的亦并非自由.NO分子气体，而可能是结合状态的亚硝基基团，它很易通过转亚硝基作用被传送到所需的酶活性中心部位。综上所述，.NO和R—SNO可在溶液中相互转化，但由于.NO在含有氧气的溶液中极不稳定，所以，亚硝酸盐和R—SNO可能是生物体内·NO的稳定存在形式。
, http://www.100md.com
国家自然科学基金资助项目，批准号 39880005
参考文献
1 Palmer RM, Ferrige AG, Moncada S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor. Nature, 1987,327(6122):524
2 Ignarro LJ, Buga GM, Wood KS et al. Endothelium-derived relaxing factor produced and released from artery and vein is nitric oxide. Proc Natl Acad Sci USA, 1987,84(24):9265
, http://www.100md.com
3 Chabaud F, Danna M. and Beny JL. A vascular smooth muscles nitric oxide relaxation by a mechanism distinct of calcium changes. Life Sci, 1994,54(19):1449
4 Kaufmann MA, Castelli I, Pargger H et al. Nitric oxide dose-response study in the isolated perfused rat kidney after inhibition of endothelium derived relaxing factor synthesis: the role of serum albumin. J Pharmacol Exp Ther, 1995, 273(2):855
5 Myers PR, Minor RL, Guerra R et al. Vasorelaxant properties of the endothelium-derived relaxing factor more closely resemble S-nitrosocysteine than nitric oxide. Nature, 1990,345(6271):161
, 百拇医药
6 Kowaluk EA, Fung HL. Spontaneous liberation of nitric oxide cannot account for in vitro vascular relaxation by S-nitrosothiols. J Pharmacol Exp Ther, 1990,255(3):1256
7 Garbers DL. The guanylyl cyclase receptor family. New Biol, 1990,2(6):499
8 Braughler JM. Soluble guanylate cyclase activation by nitric oxide and its reversal. Involvement of sulfhydryl group oxidation and reduction. Biochem Pharmacol, 1983,32(5):811
, 百拇医药
9 Smith MP, Humphrey SJ, Kerr SW et al. In vitro vasorelaxant and in vivo cardiovascular effects of S-nitrosothiols: comparison to and cross tolerance with standard nitrovasodilators. Methods Find Exp Clin Pharmacol, 1994,16(5):323
10 Carmichael AJ, Steel Goodwin L, Gray B et al. Reactions of active oxygen and nitrogen species studied by EPR and spin trapping. Free Radic Res Commol/Lun, 1993, 19(Suppl 1):S1
11 Tsikas D, Boger RH, Bode Boger SM et al. Quantification of nitrite and nitrate in human urine and plasma as pentafluorobenzyl derivatives by gas chromatography-mass spectrometry using their 15N-labelled analogs. J Chromatogr B Biomed, Appl, 1994,661(2):185
12 Geng YJ, Petersson AS, Wennmalm A et al. Cytokine-induced expression of nitric oxide synthase results in nitrosylation of heme and nonheme iron proteins in vascular smooth muscule cells. Experimental Cell Research, 1994,214(1):418
(1999—05—05收稿，1999—06—23修回), 百拇医药