无精子精斑的DNA检验1例
作者：李万水 陈 松
单位：公安部物证鉴定中心，北京 100038
关键词：
法律与医学杂志990217 1998年10月16日，河北省×市发生一起强奸杀人案，现场提取避孕套1只。经当地公安机关检验，避孕套内检出精斑，血型为B型，与嫌疑人王×血型相同，送来要求进行DNA检验。
材料与方法
1.送检材料 现场提取避孕套1只，内有可疑液体，当地公安机关将其转移至干净纱布上。将此检材编为1号；嫌疑人王×血斑1份，编为2号。
2.精斑检验 取1号检材少许，浸泡、离心，取上清液经抗人精抗体环状沉淀试验和PSA胶体金标试纸检验，结果均为阳性；取沉渣经伊红美蓝染色、镜检，未检见精子，只检见上皮细胞。
3.DNA的提取 剪取1号检材约4cm2放入1.5mlEppendorf管中，加TNE溶液500μl,10%SDS溶液50μl,2mg/ml蛋白酶K溶液25μl，置37℃水浴4h后，用酚-氯仿抽提，乙醇沉淀，干燥，溶于20μlTE溶液置4℃备用；2号检材用Chelex快速提取法处理。
4.CTT复合扩增及检测 用25μl反应体系进行CSF1PO-TPOX-TH01(CTT)复合扩增(Promega公司生产的试剂盒)。用4%变性聚丙烯酰胺凝胶(含7M尿素)电泳结合银染法检测扩增产物；用Promega公司生产的CTT系统等位基因混合物作标准对所测的样品进行分型。
结果与讨论
用CTT复合扩增的方法对所送检材进行分析，1和2号检材在CSF1PO、TPOX和TH01三个位点的基因型相同，均为(10，10)、(11，9)、(9，8)(见图1)。根据频率计算，1号为2号所留的偶合概率为2.8×10-4。经破案证实检验结果正确，该案嫌疑人王×做过输精管结扎手术。
图1 CTT复合扩增检验结果
L.等位基因混合物 1.精斑 2.嫌疑人王×
在强奸和其他性犯罪案件DNA检验中，通常用二步消化法(差异裂解法)对混合斑中精子DNA进行分型，这在许多案件的侦破中发挥了重要作用。在实际办案中，也会遇到不受女性细胞污染的纯精斑，如避孕套内的精液，这种情况下，可直接提取精子DNA。但象本文报道的无精子精斑的DNA检验较为罕见。正常精液中的细胞除有精子外，还会有睾丸细胞、少量白细胞、脱落的柱状上皮细胞等，对于未检见精子而且血清学方法可确证为人精斑的检材，可直接提取其中的上皮细胞DNA进行检验。本案例由于所检验精液存在于避孕套内，DNA检验不受女性分泌物的影响，如仍采用二步消化法，则无法提取到男性DNA，这在办案中应引起注意。
(收稿：1999-01-10), http://www.100md.com
单位：公安部物证鉴定中心，北京 100038
关键词：
法律与医学杂志990217 1998年10月16日，河北省×市发生一起强奸杀人案，现场提取避孕套1只。经当地公安机关检验，避孕套内检出精斑，血型为B型，与嫌疑人王×血型相同，送来要求进行DNA检验。
材料与方法
1.送检材料 现场提取避孕套1只，内有可疑液体，当地公安机关将其转移至干净纱布上。将此检材编为1号；嫌疑人王×血斑1份，编为2号。
2.精斑检验 取1号检材少许，浸泡、离心，取上清液经抗人精抗体环状沉淀试验和PSA胶体金标试纸检验，结果均为阳性；取沉渣经伊红美蓝染色、镜检，未检见精子，只检见上皮细胞。
3.DNA的提取 剪取1号检材约4cm2放入1.5mlEppendorf管中，加TNE溶液500μl,10%SDS溶液50μl,2mg/ml蛋白酶K溶液25μl，置37℃水浴4h后，用酚-氯仿抽提，乙醇沉淀，干燥，溶于20μlTE溶液置4℃备用；2号检材用Chelex快速提取法处理。
4.CTT复合扩增及检测 用25μl反应体系进行CSF1PO-TPOX-TH01(CTT)复合扩增(Promega公司生产的试剂盒)。用4%变性聚丙烯酰胺凝胶(含7M尿素)电泳结合银染法检测扩增产物；用Promega公司生产的CTT系统等位基因混合物作标准对所测的样品进行分型。
结果与讨论
用CTT复合扩增的方法对所送检材进行分析，1和2号检材在CSF1PO、TPOX和TH01三个位点的基因型相同，均为(10，10)、(11，9)、(9，8)(见图1)。根据频率计算，1号为2号所留的偶合概率为2.8×10-4。经破案证实检验结果正确，该案嫌疑人王×做过输精管结扎手术。
图1 CTT复合扩增检验结果
L.等位基因混合物 1.精斑 2.嫌疑人王×
在强奸和其他性犯罪案件DNA检验中，通常用二步消化法(差异裂解法)对混合斑中精子DNA进行分型，这在许多案件的侦破中发挥了重要作用。在实际办案中，也会遇到不受女性细胞污染的纯精斑，如避孕套内的精液，这种情况下，可直接提取精子DNA。但象本文报道的无精子精斑的DNA检验较为罕见。正常精液中的细胞除有精子外，还会有睾丸细胞、少量白细胞、脱落的柱状上皮细胞等，对于未检见精子而且血清学方法可确证为人精斑的检材，可直接提取其中的上皮细胞DNA进行检验。本案例由于所检验精液存在于避孕套内，DNA检验不受女性分泌物的影响，如仍采用二步消化法，则无法提取到男性DNA，这在办案中应引起注意。
(收稿：1999-01-10), http://www.100md.com