PCR检测新生儿尿液人类巨细胞病毒DNA
作者：吴素兰 羊红燕 赵敏 古微莎
单位：西藏自治区人民医院儿科生化室,拉萨850000
关键词：
PCR检测新生儿尿液人类巨细胞病毒DNA 我们对新生儿重度黄疸患儿尿液进行了HCMV DNA检测,结果如下。
1 对象与方法
1.1 标本 12例重度黄疸患儿,日龄3～15天。用婴儿一次性尿袋随机收集尿液5～10 ml待用。
1.2 模板的制备 取被检尿液1 ml 15 000 r/min离心15 min,弃上清用生理盐水混悬后再次离心15 min,弃上清,加裂解液20 μl,石蜡油30 μl,离心片刻后直接在PE 480扩增仪上99℃ 15 min作为HCMV DNA模板。
1.3 试剂 PCR药盒及参考标准由华美公司成都分公司提供。操作及循环参数按说明书执行。扩增产物及阴、阳性对照,参考标准经琼脂糖(内含溴乙锭)同步进行电泳30 min,出现与参考分子量及阳性对照在151 bp处出现肉眼可见条带即判阳性。
2 结果
12例尿液中1例与分子量标准及阳性对照在同一条位置上出现明显的荧光条带,即阳性。
3 讨论
我们首次将该项技术引进高原地区,并通过对实验条件的反复探索,改变模板裂解方式,直接在PE 480进行99℃裂解15 min,并在裂解前向反应管中多加一次石蜡进行覆盖,即起到了减少反应体系在高温作业中的气化现象,也起着保温作用。尿液1例阳性患儿病史长,黄疸消退时间延长,经针对性治疗效果显著,并与临床诊断相符。
(1998-08-05收稿,1998-11-16修回), http://www.100md.com
单位：西藏自治区人民医院儿科生化室,拉萨850000
关键词：
PCR检测新生儿尿液人类巨细胞病毒DNA 我们对新生儿重度黄疸患儿尿液进行了HCMV DNA检测,结果如下。
1 对象与方法
1.1 标本 12例重度黄疸患儿,日龄3～15天。用婴儿一次性尿袋随机收集尿液5～10 ml待用。
1.2 模板的制备 取被检尿液1 ml 15 000 r/min离心15 min,弃上清用生理盐水混悬后再次离心15 min,弃上清,加裂解液20 μl,石蜡油30 μl,离心片刻后直接在PE 480扩增仪上99℃ 15 min作为HCMV DNA模板。
1.3 试剂 PCR药盒及参考标准由华美公司成都分公司提供。操作及循环参数按说明书执行。扩增产物及阴、阳性对照,参考标准经琼脂糖(内含溴乙锭)同步进行电泳30 min,出现与参考分子量及阳性对照在151 bp处出现肉眼可见条带即判阳性。
2 结果
12例尿液中1例与分子量标准及阳性对照在同一条位置上出现明显的荧光条带,即阳性。
3 讨论
我们首次将该项技术引进高原地区,并通过对实验条件的反复探索,改变模板裂解方式,直接在PE 480进行99℃裂解15 min,并在裂解前向反应管中多加一次石蜡进行覆盖,即起到了减少反应体系在高温作业中的气化现象,也起着保温作用。尿液1例阳性患儿病史长,黄疸消退时间延长,经针对性治疗效果显著,并与临床诊断相符。
(1998-08-05收稿,1998-11-16修回), http://www.100md.com