胆固醇结石中厌氧菌的检测分析
作者：卢云 石景森 卓健生 韩文胜 刘刚 韩玥 杨毅军
单位：西安医科大学第一临床医学院肝胆外科研究室，西安710061
关键词：胆固醇结石；厌氧菌
胆固醇结石中厌氧菌的检测分析 我们通过微生物鉴定仪，利用细菌生长曲线的对数生长期进行转种培养，在一定程度上提高了胆固醇结石中厌氧菌检测的阳性率。
1 材料及方法
1.1 标本采集 无菌采取胆固醇结石核心样品，研磨后制成5～10 ml悬浊液，注入Back/Aler T厌氧增菌瓶。
1.2 增菌 将厌氧增菌瓶放入Back/Aler T恒温振荡培养箱中自动培养1～6天，底部感应器显示为阳性者根据其微生物生长曲线，于对数生长期取出转种，培养6天仍为阴性者，视为厌氧菌阴性。
, 百拇医药
1.3 培养及鉴定 快速接种到厌氧琼脂平板后，置厌氧罐48小时后取出，制备108/ml标准厌氧菌菌悬液，取10 μl放入10 ml增菌管内，转种到Sceptor的厌氧平板，厌氧培养48小时后，直接在Sceptor中确定厌氧菌种。
1.4 厌氧菌培养同时行需氧菌培养。
2 结果 见表1。
表1 42例胆囊结石胆固醇核心厌氧培养细菌鉴定结果
编 号
厌氧菌
需氧菌
1
产气荚膜梭菌
, 百拇医药
大肠埃希菌
2
产气荚膜梭菌
粪链球菌
3
产气荚膜梭菌
大肠埃希菌
4
痤疮丙酸杆菌
大肠埃希菌
5
厌氧性链球菌
肠链球菌
, http://www.100md.com
6
产气荚膜梭菌
——
7
痤疮丙酸杆菌
——
3 讨论
80年代我们曾采用传统方法行胆石核心细菌培养[1]，结果44例胆囊结石中仅2例阳性。本实验中我们采用Bact/Aler T 120 system，选择恰当时间转种培养。在微生物生长曲线的四个时期中，迟缓期为细菌生长初期，阳性率较低；进入对数生长期后，细菌大量繁殖，在生长曲线中细菌数量以对数方式急剧上升，此时细菌培养阳性率最高。我们观察厌氧菌在此期可维持6～24小时，需氧菌仅为5～12小时，然后进入细菌生长、死亡相对平衡的稳定期，此期行转种培养仍可维持一定的阳性率，但较前期已有一定程度降低，而一旦进入衰退期，多数细菌已死亡，可出现假阴性结果。本组所选用的Bact/Aler T细菌增菌瓶中所含胰消化酪蛋白酶等化学成份，根据NCCLS标准配制而成[2]，对各种需氧、厌氧菌所提供的增菌环境远优于各种肉汤培养液[3]。我们曾对10例厌氧菌阳性胆汁采用肉汤培养液增菌，仅6例培养阳性。在细菌菌种鉴定中使用了Sceptor system，避免了使用各种10A、20A生化鉴定条所导致的系统误差。
, 百拇医药
本实验培养出4株产气荚膜梭菌，产气荚膜梭菌并非严重厌氧，生长繁殖的的温度范围较广(20～50℃)，37℃时分裂繁殖周期仅为8分钟，因此常超过其它混合感染的细菌而占主导地位，更为重要的是产气荚膜梭菌可产生10余种外毒素，最重要的α毒素是卵磷脂酶，具有活性的卵磷脂酶消耗底物卵磷脂，使其减少。这也许是产气荚膜梭菌成为胆固醇结石核心的关键。目前我们正在对此进行更深入的研究。
参考文献
[1]刘绍诰，石景森，吴谨光，等.胆结石成因及防治系列研究总结报告.西安医科大学学报，1989，10(2)：252
[2]National Committee for Clinical Laboratory Standards:Quality assurance for commercially prepared microbiological culture media,approved standard,Villanova,PA,NCCLS，1987；M22
[3]Thorpe TC,Wilson ML.Turner JE.et al.Back/Aler T:an automated colerimetric microbial detection system.J Clin Micro 1990；28(7)：1608
(1998-07-09收稿，1998-11-25修回), 百拇医药
单位：西安医科大学第一临床医学院肝胆外科研究室，西安710061
关键词：胆固醇结石；厌氧菌
胆固醇结石中厌氧菌的检测分析 我们通过微生物鉴定仪，利用细菌生长曲线的对数生长期进行转种培养，在一定程度上提高了胆固醇结石中厌氧菌检测的阳性率。
1 材料及方法
1.1 标本采集 无菌采取胆固醇结石核心样品，研磨后制成5～10 ml悬浊液，注入Back/Aler T厌氧增菌瓶。
1.2 增菌 将厌氧增菌瓶放入Back/Aler T恒温振荡培养箱中自动培养1～6天，底部感应器显示为阳性者根据其微生物生长曲线，于对数生长期取出转种，培养6天仍为阴性者，视为厌氧菌阴性。
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1.3 培养及鉴定 快速接种到厌氧琼脂平板后，置厌氧罐48小时后取出，制备108/ml标准厌氧菌菌悬液，取10 μl放入10 ml增菌管内，转种到Sceptor的厌氧平板，厌氧培养48小时后，直接在Sceptor中确定厌氧菌种。
1.4 厌氧菌培养同时行需氧菌培养。
2 结果 见表1。
表1 42例胆囊结石胆固醇核心厌氧培养细菌鉴定结果
编 号
厌氧菌
需氧菌
1
产气荚膜梭菌
, 百拇医药
大肠埃希菌
2
产气荚膜梭菌
粪链球菌
3
产气荚膜梭菌
大肠埃希菌
4
痤疮丙酸杆菌
大肠埃希菌
5
厌氧性链球菌
肠链球菌
, http://www.100md.com
6
产气荚膜梭菌
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7
痤疮丙酸杆菌
——
3 讨论
80年代我们曾采用传统方法行胆石核心细菌培养[1]，结果44例胆囊结石中仅2例阳性。本实验中我们采用Bact/Aler T 120 system，选择恰当时间转种培养。在微生物生长曲线的四个时期中，迟缓期为细菌生长初期，阳性率较低；进入对数生长期后，细菌大量繁殖，在生长曲线中细菌数量以对数方式急剧上升，此时细菌培养阳性率最高。我们观察厌氧菌在此期可维持6～24小时，需氧菌仅为5～12小时，然后进入细菌生长、死亡相对平衡的稳定期，此期行转种培养仍可维持一定的阳性率，但较前期已有一定程度降低，而一旦进入衰退期，多数细菌已死亡，可出现假阴性结果。本组所选用的Bact/Aler T细菌增菌瓶中所含胰消化酪蛋白酶等化学成份，根据NCCLS标准配制而成[2]，对各种需氧、厌氧菌所提供的增菌环境远优于各种肉汤培养液[3]。我们曾对10例厌氧菌阳性胆汁采用肉汤培养液增菌，仅6例培养阳性。在细菌菌种鉴定中使用了Sceptor system，避免了使用各种10A、20A生化鉴定条所导致的系统误差。
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本实验培养出4株产气荚膜梭菌，产气荚膜梭菌并非严重厌氧，生长繁殖的的温度范围较广(20～50℃)，37℃时分裂繁殖周期仅为8分钟，因此常超过其它混合感染的细菌而占主导地位，更为重要的是产气荚膜梭菌可产生10余种外毒素，最重要的α毒素是卵磷脂酶，具有活性的卵磷脂酶消耗底物卵磷脂，使其减少。这也许是产气荚膜梭菌成为胆固醇结石核心的关键。目前我们正在对此进行更深入的研究。
参考文献
[1]刘绍诰，石景森，吴谨光，等.胆结石成因及防治系列研究总结报告.西安医科大学学报，1989，10(2)：252
[2]National Committee for Clinical Laboratory Standards:Quality assurance for commercially prepared microbiological culture media,approved standard,Villanova,PA,NCCLS，1987；M22
[3]Thorpe TC,Wilson ML.Turner JE.et al.Back/Aler T:an automated colerimetric microbial detection system.J Clin Micro 1990；28(7)：1608
(1998-07-09收稿，1998-11-25修回), 百拇医药