107例肿瘤组织多药耐药基因的检测
作者：王丰 孙春雷 赵建伟
单位：无锡市第四人民医院，江苏无锡214062
关键词：多药耐药基因；肿瘤组织
107例肿瘤组织多药耐药基因的检测 药物耐药是肿瘤化疗成功的最大障碍。研究表明，肿瘤细胞耐受药物的生物学基础是细胞内mdr-1基因的过度表达。本文报告我院检测107例肿瘤组织mdr-1的结果。
1 材料和方法
1.1 临床资料 107例肿瘤组织皆为手术切取的新鲜标本。其中，胃癌26例，大肠癌26例，乳腺癌55例。各取癌组织20 g(清洗血迹，不需固定)放液氮或-80℃～-30℃冰箱保存待测。
1.2 测试盒购自同正生物技术公司。
1.3 mdr-1检测按试剂盒说明书进行。
2 结果
2.1 在紫外透射反射显像仪下观察并判读结果。见附图。
附图 PCR产物电泳结果
2.2 107例肿瘤组织mdr-1检测的结果，见表1。
表1 107例肿瘤组织mdr-1检测的结果
肿瘤组织
例数
阳性
阳性率%
胃 癌
26
10
38.5
大肠癌
26
9
34.6
乳腺癌
55
16
29.0
合 计
107
35
32.7
3 小结
3.1 模板细胞的数量对mdr-1检测起决定性的作用，特别是mDNA的提取应充分，并用PBS反复洗涤。细胞最低浓度设定在8×104～1×105为最佳。
3.2 提取RNA的关键是避免外源RNA酶污染，造成RNA降解。所以在提取RNA时要尽量缩短RNA干燥的时间，减少RNA降解的机率。
3.3 在同一条件下，探针可以扩出，而样品扩增结果不满意。可适当加大样品量(即模板量)，或将mdr-1和内标分开扩增，此时dNTP和酶量可减半。
3.4 PCR循环参数的确定原则是保证在扩增仍处于对数期而未到平台期。
3.5 要尽可能在同一反应条件下同时检测多个样品，以利于比较。
3.6 临床价值 mdr-1高表达可导致肿瘤对多种药物发生耐受，但不是对所有药物都耐受。单纯mdr-1表达升高与DDP的耐受关系不大。mdr-1基因表达主要可造成肿瘤对几种亲脂性药物产生程度不同的耐受，其中对生物碱类高度耐受，对蒽环类中度耐受，对VP-16等低度耐受，对烷化剂或抗代谢类药物不耐受。故在mdr-1阳性表达的患者化疗方案中，临床医师应注重DDP、5-Fu和氮芥。对阴性和低表达患者可选用生物碱类、蒽环类和Vp-16类；而对阳性患者可同时增用mdr-1逆转剂、增敏剂等，以增加临床化疗效果。 (1998-01-19收稿，1998-11-17修回), http://www.100md.com
单位：无锡市第四人民医院，江苏无锡214062
关键词：多药耐药基因；肿瘤组织
107例肿瘤组织多药耐药基因的检测 药物耐药是肿瘤化疗成功的最大障碍。研究表明，肿瘤细胞耐受药物的生物学基础是细胞内mdr-1基因的过度表达。本文报告我院检测107例肿瘤组织mdr-1的结果。
1 材料和方法
1.1 临床资料 107例肿瘤组织皆为手术切取的新鲜标本。其中，胃癌26例，大肠癌26例，乳腺癌55例。各取癌组织20 g(清洗血迹，不需固定)放液氮或-80℃～-30℃冰箱保存待测。
1.2 测试盒购自同正生物技术公司。
1.3 mdr-1检测按试剂盒说明书进行。
2 结果
2.1 在紫外透射反射显像仪下观察并判读结果。见附图。
附图 PCR产物电泳结果
2.2 107例肿瘤组织mdr-1检测的结果，见表1。
表1 107例肿瘤组织mdr-1检测的结果
肿瘤组织
例数
阳性
阳性率%
胃 癌
26
10
38.5
大肠癌
26
9
34.6
乳腺癌
55
16
29.0
合 计
107
35
32.7
3 小结
3.1 模板细胞的数量对mdr-1检测起决定性的作用，特别是mDNA的提取应充分，并用PBS反复洗涤。细胞最低浓度设定在8×104～1×105为最佳。
3.2 提取RNA的关键是避免外源RNA酶污染，造成RNA降解。所以在提取RNA时要尽量缩短RNA干燥的时间，减少RNA降解的机率。
3.3 在同一条件下，探针可以扩出，而样品扩增结果不满意。可适当加大样品量(即模板量)，或将mdr-1和内标分开扩增，此时dNTP和酶量可减半。
3.4 PCR循环参数的确定原则是保证在扩增仍处于对数期而未到平台期。
3.5 要尽可能在同一反应条件下同时检测多个样品，以利于比较。
3.6 临床价值 mdr-1高表达可导致肿瘤对多种药物发生耐受，但不是对所有药物都耐受。单纯mdr-1表达升高与DDP的耐受关系不大。mdr-1基因表达主要可造成肿瘤对几种亲脂性药物产生程度不同的耐受，其中对生物碱类高度耐受，对蒽环类中度耐受，对VP-16等低度耐受，对烷化剂或抗代谢类药物不耐受。故在mdr-1阳性表达的患者化疗方案中，临床医师应注重DDP、5-Fu和氮芥。对阴性和低表达患者可选用生物碱类、蒽环类和Vp-16类；而对阳性患者可同时增用mdr-1逆转剂、增敏剂等，以增加临床化疗效果。 (1998-01-19收稿，1998-11-17修回), http://www.100md.com